内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
高三生物综合题简单题
内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
高三生物综合题简单题查看答案及解析
内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊 发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
（10分）【生物——现代生物技术专题】
内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导人羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoR I、SaII、SphI为限制酶。
请据图回答。
（1）在构建基因表达载体的过程中，应采用____（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是____。
（2）要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的____筹调控组件重组起来，构建基因表达载体。
（3）图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是____。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②____技术可培育成转基因克隆山羊。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
血管内皮生长因子（VEGF）是在肿瘤细胞中通过表达，分泌到血液中的蛋白类生长因子，促进肿瘤血管的生成，进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。
研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了PVAX1—VEGF的DNA疫苗，为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题：
（1）首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA，通过_______法获得VEGF基因。
（2）对获取的VEGF基因进行PCR扩增前，需要根据VEGF基因序列设计两种引物，其原因是_________。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接，引物中要增加适当的__________。扩增时，每个循环一般需要经过“变性、退火、延伸”三个过程，其中______过程的温度设定是扩增成败的关键。
（3）构建的PVAX1—VEGF上应含有特定的______（填“复制原点”或“启动子”或“标记基因”），它能被受体细胞的_______所识别，以便于催化转录过程。
（4）DNA疫苗制备简单，价格低廉，且免疫强度高，应答持久，但同时也可能存在着不可忽视的潜在危险。你认为可能存在的潜在危险是________________。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
肿瘤血管生长是肿瘤生长的关键环节，血管内皮生长因子（VEGF）是一种参与促进肿瘤血管生长的蛋白质，VEGF作为治疗癌症的靶分子受到了很多研究者的关注。
（1）VEGF 的受体存在于血管内皮细胞的_____，可促进血管内皮细胞的_______，形成的细胞最终构成新的血管。
（2）研究者利用噬菌体文库筛选能与VEGF特异性结合的多肽。过程如下。
①将人工合成的编码随机六肽的基因插入噬菌体DNA，形成重组DNA分子，用重组DNA分子转化大肠杆菌，大肠杆菌经培养后裂解，产生噬菌体。这些噬菌体构成一个文库，一个包含所有可能六肽的噬菌体文库至少有____种噬菌体组成，在这些噬菌体中可能有某种六肽能与VEGF特异性结合（图一）。
②将VEGF能够与受体结合的部位固定在微孔容器底部，在微孔中加入随机肽文库，一段时间后用缓冲液洗去不能与VEGF结合的噬菌体，然后用含有_____的缓冲液将结合在微孔底部的噬菌体洗脱下来，这种分子能够与微孔容器底部的分子竞争性结合噬菌体，这说明噬菌体与目标分子的结合是_____（可逆或不可逆）的。
③将洗脱下来的噬菌体转入另一试管，加入_____，经过一段时间振荡培养，产生新一代噬菌体库。
④重复步骤②③多次。
（3）在多轮实验后产生的噬菌体文库比第一代噬菌体文库与VEGF的结合能力更强，文库中噬菌体的种类_____，请分析原因：_____。
（4）欲证明筛选到的多肽X能够起到抑制肿瘤生长的作用，研究者设计了这样的实验：将多肽X溶液注射到⼀只肿瘤模型小鼠体内，（肿瘤型鼠是天然条件下就会产生肿瘤的小鼠品系），检测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。
高三生物综合题困难题查看答案及解析
（12分）如图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖 LPS 刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（ VEGFR-3 ）和信号分子VEGF-C 的表达。VEGFR-3形成反馈环路，抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。
（1）细菌或细菌脂多糖 LPS在免疫学上相当于 ， TLR4的本质是 。
（2）过度或持续性的 TLR4 活化引起 ，在 VEGF-C 的刺激下，通过活化 PI3K-Akt1 通路，促进 ，从而抑制 NF-kB 活性，降低败血症的发生。
（3）该细胞能够产生溶菌酶直接杀死病原菌，该过程属于 免疫。吞噬细胞吞噬病菌后会发生死亡现象，该现象属于 。
（4）大多数抗原激发的体液免疫应答，第一种是必须有T细胞参与才能完成，第二种是有少数抗原物质，可单独刺激B细胞，为了探究细菌脂多糖LPS属于哪一类免疫应答，可以选择相同性别的同龄的小鼠进行LPS接种处理，如下表，实验组对应 组小鼠，如果 ，则该抗原属于第二种。
| 处理胸腺 | 是否产生相应浆细胞 | 是否产生相应的抗体 | |
| 甲组小鼠 | 切除 | ||
| 乙组小鼠 | 不切除 |
（5）一般情况下，接受抗原刺激的B细胞会增殖分化为 ，科学家用LPS分先后两次接种小鼠，并检测相应的抗体的产生量，如图所示：该实验结果说明LPS能够 。
高三生物综合题困难题查看答案及解析
下图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖 LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（ VEGFR-3 ）和信号分子VEGF-C 的表达。VEGFR-3形成反馈环路，抑制TLR4-NF-kB 介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。
（1）细菌或细菌脂多糖 LPS 在免疫学上相当于 ， TLR4 的本质是 。
（2）过度或持续性的 TLR4 活化引起 ，在 VEGF-C 的刺激下，通过活化 PI3K-Akt1 通路，促进 ，从而抑制 NF-kB 活性，降低败血症的发生。
（3）该细胞能够产生溶菌酶直接杀死病原菌，该过程属于 免疫。吞噬细胞吞噬病菌后会发生死亡现象，该现象属于 。
（4）大多数抗原激发的体液免疫应答，第一种是必须有T 细胞参与才能完成，第二种是有少数抗原物质，可单独刺激B 细胞，为了探究细菌脂多糖LPS 属于哪一类免疫应答，可以选择相同性别的同龄的小鼠进行LPS 接种处理，如下表，实验组对应 组小鼠，如果 ，则该抗原属于第二种。
（5）一般情况下，接受抗原刺激的B 细胞会增殖分化为 ，科学家用LPS分先后两次接种小鼠，并检测相应的抗体的产生量，如图所示：该实验结果说明LPS 能够 。
高三生物综合题困难题查看答案及解析
下图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3）和信号分子VEGF-C的表达。最终可以实现抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。结合下图，相关分析错误的是：
A.VEGFR-3的化学本质最可能是糖蛋白，细菌的脂多糖LPS属于抗原
B.抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应是通过抑制NF-kB的表达来实现
C.若该细胞通过产生的溶菌酶直接杀死细菌，则该过程属于特异性免疫
D.抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应存在VEGFR-3和VEGF-C的反馈
高三生物选择题困难题查看答案及解析
下图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）和信号分子VEGF-C的表达。最终可以实现抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。结合下图，相关分析错误的是：
A．VEGFR-3的化学本质最可能是糖蛋白，细菌的脂多糖LPS属于抗原
B．抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应是通过抑制NF-kB的表达来实现
C．若该细胞通过产生的溶菌酶直接杀死细菌，则该过程属于特异性免疫
D．抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应存在VEGFR-3和VEGF-C的反馈
高三生物选择题中等难度题查看答案及解析
血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”（SIM63）,有效打破了跨国公司的技术垄断。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。请回答下列相关问题：
（1）动物细胞在体外培养的技术属于 工程，由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加入 等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O2外，还需要CO2，其作用是 。
（2）在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是 ，要在短时间内扩增大量的目的基因采用 技术，这个技术中的关键酶是 。
（3）当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为 ，要分离出杂交瘤细胞,应该用 培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的 ,并可大量制备。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析