如图是基因文库的构建示意图。请回答下列问题。（1）获取目的基因时，如果目的基因的_____...

如图是基因文库的构建示意图。请回答下列问题。

（1）获取目的基因时，如果目的基因的_________是未知的，可以建立一个包括目的基因在内的基因文库，再从基因文库中获得目的基因。对于高等动植物复杂的染色体DNA来说，单个基因所占比例极小，将其分离出来并非易事，一般需要先对DNA进行_________。以产生足够多的数量。

（2）如图所示基因文库用克隆载体构建，载体中目的基因可通过细菌的___________完成片段的克隆。从基因文库中分离目的基因时主要利用核酸探针，核酸探针在基因工程的操作过程中还有很多方面的应用，如：检测目的基因是否导入到受体细胞，以及_________。

（3）培育转基因羊时，可利用显微注射法将基因文库中获得的目的基因导入_____（受体）细胞，再经过___________后，移植到___________的发情母畜的输卵管或子宫角。目的基因在受体细胞中的整合率不太稳定，这除了与注射的位置和时间有关外，还要考虑目的基因的构型和__________。

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以下是基因工程四个主要操作程序：

①基因表达载体的构建　 ②将目的基因导入受体细胞　　　　 ③目的基因的获取　 ④目的基因的检测与鉴定

请回答下列问题：

（1）进行③操作时，可以从基因文库中获取，基因文库分为_____________ 两种，其区别是_____________ ，PCR扩增也是获取目的基因常用的方法，进行PCR时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、_____________ 以及引物，合成引物的前提是_____________ 。PCR扩增时，与引物结合的是_____________ 。

（2）进行操作①时，应先选择合适的载体，常见的载体是质粒，质粒的本质是______；如图是常用的质粒载体，基因工程中利用BamH I限制酶识别CCATCC序列，并在GG之间切割，通过BamH I限制酶切割形成的末端属于___________，科研人员利用该质粒完成基因工程，则通过___________基因供重组DNA的鉴定与选择。

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如图是从酵母菌中获取某种酶基因的流程示意图。回答下列问题：

（1）从图示流程可知，目的基因可以从______中获取。

（2）图中基因组文库______（填“大于”、“等于”或“小于”）cDNA文库。B过程所需的酶是______。

（3）将该目的基因导入植物细胞，通常采用的方法是______；导入微生物细胞，通常采用Ca2+处理细胞，使之转化为______细胞。

（4）检测目的基因是否翻译出蛋白质可采用______技术。导入细菌受体细胞中的目的基因成功表达的标志是______。

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基因工程是从分子水平对基因进行操作，从而实现人们定向改造生物，得到人们所需要的生物性状或生物产品的技术。目的基因的获取是基因工程的第一步，常见的方法是构建基因组文库。请分析并回答下列问题：

（1）构建基因组文库的一般步骤：

①提取某种生物体内的__________，用适当的限制酶处理，得到一定范围大小的DNA片段；

②DNA片段分别与载体结合，得到重组载体；

③重组载体导入到__________的群体中储存，基因组文库构建完成。

（2）与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少。其原因是__________。

（3）载体与DNA片段结合前，需要使用同种的限制酶处理。其目的是__________。

（4）受体菌被导入重组DNA分子之前，常用__________处理，提高导入的成功率。

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基因工程技术又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即______和从_______中分离。

（2）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是______。

（3）在基因表达载体中，启动子是______聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是______。

（4）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是　　　　　　 法。

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根据以下植物基因工程的操作步骤，回答有关问题。

（1）利用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因（基因序列未知），需根据相应蛋白质的氨基酸序列设计多种引物，原因是____________，基因表达载体中目的基因上游的____________是RNA聚合酶的识别位点。

（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是____________。

（3）下图是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入植物受体细胞的示意图。图中质粒含CRISPR基因和Cas9基因，CRISPR基因转录的sgRNA可以特异性识别细胞核DNA分子中的特定序列，Cas9基因表达的Cas9酶能切割被sgRNA识别的DNA序列。重组片段中的目的基因，能通过DNA损伤修复和被切割的DNA序列连接。

sgRNA通过____________特异性识别细胞核DNA分子中的有关序列，sgRNA、Cas9酶和基因工程中的基本工具____________作用相似。不同基因工程中利用的CRISPR/Cas9质粒有差异，这些质粒中所含的CRISPR基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的，所含的Cas9基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的。

（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入受体细胞与“（2）”中使用的方法相比，优点是____________。

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下图是基因文库的构建和获取目的基因的示意图。

下列叙述正确的是（　　 ）

A.通过该途径获得的目的基因，通常是序列已知的

B.①过程通常只用一种DNA酶切割全部DNA

C.③过程需用CaC12处理，使大肠杆菌细胞壁的通透性增加

D.④过程可用相应抗体，利用核酸分子杂交技术钓取目的基因

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请回答下列与基因工程、胚胎工程有关的问题：

（1）基因工程技术中，科学家可以从基因文库中获取目的基因，基因文库包括基因组文库和cDNA文库，后者比较小，原因是________________。

（2）获得目的基因后，利用PCR技术将该基因扩增时，需要添加的有机物质除了模板、原料外，还应加入___________。将目的基因导入动物细胞最常用的方法是________________。

（3）体外受精是胚胎工程的重要环节，要想顺利受精必须满足两个条件：来自父方的精子需要进行获能处理，来自母方的卵母细胞需要_______，胚胎工程的最后一道工序是________（填生物技术名称）。

（4）与传统方法生成的抗体相比，在治疗癌症时，将抗癌细胞的单克隆抗体与________结合，制成“生物导弹”，借助单克隆抗体的________作用，将药物带到癌细胞所在部位。

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已知在人体中，基因 A 可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白 A)。现欲通过基因工程技术生产蛋白 A，根据所学知识回答下列问题：

（1）获取目的基因是实施基因工程的第一步，某同学想从基因文库中获取目的基因，基因文库有基因组文库和部分基因文库，我们常用的 cDNA 文库属于上述_____文库。

（2）基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步也是基因工程的_____。下图 2 是三种不同的基因表达载体，图 1 是基因表达载体上 3 种限制内切酶的识别序列与切割位点，那么第一步中获取的目的基因应插入到基因表达载体的_____和_____之间。根据 3 种酶的识别序列与切割位点，图 2 中 3 种基因表达载体中最理想的是_____。

（3）大肠杆菌常常作为受体细胞，与真核生物相比，其优势是_____（答出两点即可）。若用家蚕作为表达基因 A 的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用噬菌体作为载体的原因是_____。

（4）若要检测基因 A 是否插入家蚕的 DNA 上，检测方法是_____。

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下列获取目的基因的方法中，需要模板的是

①从基因组文库中获取目的基因　②利用PCR技术扩增目的基因　③构建cDNA文库　④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因

A.②③     B.①②      C.③④       D.②④

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