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欲测定新鲜绿叶中叶绿素a和叶绿素b的含量，可通过测定色素提取液的光密度值（OD值，各吸光物质的总OD值），再根据以下公式计算：

叶绿素a浓度=12.72D665-2.59D649；叶绿素b浓度=20.13D649-5.03D665（D665、D649表示光程为lcm、波长分别为665nm、649nm所测得的OD值）。

仪器与用具：OD值测定仪一套、天平、研钵、25mL容量瓶、漏斗、滤纸、95%乙醇、石英砂、碳酸钙等。

（1）完善实验步骤：

①取材：取新鲜植物叶片，擦净，剪碎（去掉中脉），混匀。

②研磨：称取剪碎的新鲜样品0.2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙及2~3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成____________，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白，并静置3~5min。

③过滤：在漏斗中放置滤纸，用乙醇湿润，把研磨液沿玻棒倒入漏斗，过滤到25mL棕色容量瓶中，然后用少量95%乙醇冲洗研棒、玻棒、___________及__________数次，洗涤液一并倒入漏斗中过滤，再用95%乙醇，将漏斗中色素全部洗入容量瓶，直至滤纸和残渣变白为止。最后定容至25mL。

④测定：把色素提取液摇匀，倒入____________内，以___________为空白对照，在光波长665nm、649nm条件下分别测定OD值。

⑤计算。

（2）实验

①过滤和定容选择的容量瓶为“棕色”的目的是为了防止____________。在测定叶绿素OD值时，选择波长为665nm、649m的红光，以防类胡萝卜素的干扰，其原因是_____________。

②本实验中，____________（需要/不需要）先作叶绿素a、b的标准曲线用于获得浓度值。

③若实验中过滤液较浑浊，则测得叶绿素含量将____________（偏大/不影响/偏小）。

④若根据实验结果计算得到叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为Ca、Cb（单位mg/L），则待测植物新鲜叶片中叶绿素的含量是_____________mg/g（用Ca、Cb表示）。

高三生物实验题困难题

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