(14分)人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL-2）。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体...

(14分)人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL-2）。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。其技术流程如图。请回答：

（1）图中③过程的模板是________。表达载体1中的位点____应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。

（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有____________，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白。

（3）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在______℃，此外还需要通入______（气体）。

（4）应用________技术可检测酵母菌是否表达出IL-2- HSA融合蛋白。

（5）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是________________________________________　　

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人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL﹣2）．该蛋白可增强机体免疫功能，在体内易被降解．研究人员将IL﹣2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL﹣2生理功能、且不易降解的IL﹣2﹣HSA融合蛋白．其技术流程如图．请回答：

（1）图中②过程的原料是　　　　 ，③过程的模板是　　　　 ．表达载体1中的位点　　　　 应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2．

（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL﹣2蛋白对应的碱基序列不能含有　　　　 ，才能成功表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白．

（3）在上述基因工程的操作过程中可以遵循碱基互补配对原则的步骤有　　　　 （用序号表示）．

（4）不同种生物之间的基因移植成功，从分子水平分析，进行基因工程的主要理论依据是（至少2点）　　　　 ，　　　　 ．

（5）培养人外周血单核细胞时，通常需要在合成培养基中加入　　　　 等，此外还需要通入　　　　 　 （气体），该气体的作用是　　　　 ．

（6）应从重组酵母菌中提取　　　　 ，用相应的抗体进行　　　　 ，来检测酵母菌是否表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白．

（7）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫　　　　 ．

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人外周血单核细胞能合成白细胞介素-2（IL-2）。该蛋白为淋巴因子，可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，在酵母菌中表达出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白。技术流程如图。请回答：

（1）从健康人外周血分离得到的单核细胞，应置于________气体环境中，并在适宜温度和pH条件下培养48h。培养液中通常要加________等天然成分。提取细胞总RNA生成cDNA。图中PCR过程的模板是________，该过程使用的酶是________。

（2）表达载体1中的位点a应含有图中________酶的识别序列，才能成功构建表达载体2。

（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有________密码，才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白。

（4）将表达载体2导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后离心，取________（上清液／菌体）进行产物鉴定。鉴定方法是________。

（5）若希望白细胞介素-2（IL-2）在体内不易被降解，则需要通过________工程手段对合成白细胞介素-2的相关目的基因进行设计，该工程是一项难度很大的工程，目前成功的例 子不多，主要原因是________。

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【生物——选修3：现代生物科技专题】

人外周血单核细胞能合成白介素2(IL～2)。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL－2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL－2生理功能、且不易降解的IL－2－HSA融合蛋白。其技术流程如图。请回答下列问题。

(1)培养人外周血单核细胞需要无菌、无毒的环境，为防止培养过程中的污染，通常要在细胞培养液中添加一定量的_____；为保证营养充足，通常要在细胞培养液中添加_____；除提供适宜培养温度和pH外，还需适宜气体环境，通常将培养皿置于含_____的混合气体培养箱中进行培养。

(2) 图中②表示________过程，图中③表示________过程。

(3) 表达载体1中的位点________，应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL－2蛋白对应的碱基序列不能含有________(起始、终止)密码子，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白。

(4)应用____________杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白。IL－2－HSA融合蛋白从酵母菌细胞中排出，需要酵母菌细胞中_________（细胞器）的加工。

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人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL－2）。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易 被降解。研究人员将1L－2基因与人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有1L－2生理功能、且不易降解的1L－2－HSA融合蛋白，其技术流程如图。请回答：

（1）图中③过程的模板是_______。表达载体1中的位点________应为限制酶Bg1Ⅱ的识别位点，才能成功构建表达载体2。

（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与1L－2蛋白对应的碱基序列不能含有____________，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白。 启动子是__________识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。

（3）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在___________℃，此外还需要通入__________（气体）。

（4）应用_____________技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白。

（5）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是 ________________。

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人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL－2）。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易 被降解。研究人员将1L－2基因与人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有1L－2生理功能、且不易降解的1L－2－HSA融合蛋白，其技术流程如图。请回答：

（1）图中③过程的模板是_______。表达载体1中的位点________应为限制酶Bg1Ⅱ的识别位点，才能成功构建表达载体2。

（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与1L－2蛋白对应的碱基序列不能含有____________，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白。 启动子是__________识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。

（3）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在___________℃，此外还需要通入__________（气体）。

（4）应用_____________技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白。

（5）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是 ________________。

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【生物——选修3：现代生物科技专题】白细胞介素—2（IL—2），在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。传统生产方法成本高、产量低，获得的IL—2在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题：

（1）利用基因工程生产IL—2，过程是：

①从健康人体外周静脉血分离能合成IL—2的免疫细胞，从中提取_______________，经逆转录获取目的基因，此过程需要的原料是_______________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用DNA链接酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是_____________。该步骤是基因操作的核心，称为_____________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用Ca2+处理，使其成为_____________，再在一定温度下完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用_____________技术。

（2）利用蛋白质工程对IL—2进行改造，基本途径是：

预期蛋白质功能→_____________→_____________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

（3）利用细胞工程生产IL—2，思路是：

将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选出______细胞，经细胞培养可获得大量IL—2。

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（12分）回答下列问题：机体的免疫系统对核辐射损伤很敏感，主要表现在核辐射会诱导免疫细胞凋亡。人白细胞介素18（IL-18）能促进免疫细胞的增殖和分化，提高机体免疫功能。某科研小组开展了“IL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用”的研究，方法如下：选取若干实验小鼠，随机分成三组：①组无辐射损伤；②组辐射损伤（60Co照射，下同）；③组先辐射损伤，1天后注射IL-18。14天后分别取各组小鼠脾细胞进行体外培养，在培养了Oh、12h、24h、48h后，进行细胞凋亡检测，得到的细胞凋亡相对值如下表：

(1)选择脾细胞作为本实验材料，是因为脾脏是机体重要的_______器官。已知IL-18是一种淋巴因子，淋巴因子与______都属于免疫活性物质。

(2)自爆凋亡是由遗传机制决定的______死亡。从表中数据可知，细胞凋亡相对值越小，说明发生凋亡的脾细胞数目越______；从_______（组别）两组数据可知，IL-18能够抑制脾细胞凋亡。

(3)科研小组还设置了第④组实验，方法是先注射IL-18，3天后进行辐射损伤，14天后的实验操作同前三组。与第③组相比，设置第④组的目的是_________________。

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（12分）回答下列问题：机体的免疫系统对核辐射损伤很敏感，主要表现在核辐射会诱导免疫细胞凋亡。人白细胞介素18（IL-18）能促进免疫细胞的增殖和分化，提高机体免疫功能。某科研小组开展了“IL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用”的研究，方法如下：选取若干实验小鼠，随机分成三组：①组无辐射损伤；②组辐射损伤（⁶⁰Co照射，下同）；③组先辐射损伤，1天后注射IL-18。14天后分别取各组小鼠脾细胞进行体外培养，在培养了Oh、12h、24h、48h后，进行细胞凋亡检测，得到的细胞凋亡相对值如下表：

(1)选择脾细胞作为本实验材料，是因为脾脏是机体重要的_______器官。已知IL-18是一种淋巴因子，淋巴因子与______都属于免疫活性物质。

(2)自爆凋亡是由遗传机制决定的______死亡。从表中数据可知，细胞凋亡相对值越小，说明发生凋亡的脾细胞数目越______；从_______（组别）两组数据可知，IL-18能够抑制脾细胞凋亡。

(3)科研小组还设置了第④组实验，方法是先注射IL-18，3天后进行辐射损伤，14天后的实验操作同前三组。与第③组相比，设置第④组的目的是_________________。

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(16分)

回答下列Ⅰ、Ⅱ题

Ⅰ、机体的免疫系统对核辐射损伤很敏感，主要表现在核辐射会诱导免疫细胞凋亡。人白细胞介素18（IL-18）能促进免疫细胞的增殖和分化，提高机体免疫功能。某科研小组开展了“IL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用”的研究，方法如下：

选取若干实验小鼠，随机分成三组：①组无辐射损伤；②组辐射损伤（⁶⁰Co照射，下同）；③组先辐射损伤，1天后注射IL-18.14天后分别取各组小鼠脾细胞进行体外培养，在培养了Oh、12h、24h、48h后，进行细胞凋亡检测，得到的细胞凋亡相对值如下表：

(1)细胞凋亡是由遗传机制决定的______________死亡。从表中数据可知，细胞凋亡相对值越小，说明发生凋亡的脾细胞数目越__________;从___________（组别）两组数据可知，IL-18能够抑制脾细胞凋亡。

(2)科研小组还设置了第④组实验，方法是先注射IL-18，3天后进行辐射损伤，14天后的实验操作同前三组。与第③组相比，设置第④组的目的是______。

Ⅱ。使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学对有关实验做了如下归纳：

（1）上述实验结果的归纳，正确的有_______（实验序号）。

（2）实验②和实验④在染色之前，都使用了一定浓度的盐酸处理。其中，实验②用盐酸可改变______通透性，加速染色剂进入细胞；实验④用盐酸与酒精混合，对材料进行解离。在两个实验操作中，都要注意盐酸浓度，处理材料时的温度和______。

（3）健那绿使线粒体着色与线粒体内膜的酶系统有关。线粒体内膜上发生的反应变化是____________。

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