如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将目的基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的是(...

如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将目的基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的是(　　)。

A. HindⅢ B. EcoRⅠ

C. EcoB D. PstⅠ

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科学家将拟南芥的抗寒基因(CBFl)转入香蕉以获得抗寒的香蕉品种。如图是某质粒载体上的SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ四种限制酶的切割位点示意图。请据图回答：

（1）为构建基因表达载体，用限制酶SacⅠ、XbaⅠ切割含目的基因的DNA片段获得了CBFl基因，同时要用限制酶__对质粒载体进行切割，目的是__，这种采用双酶切的方法构建基因表达载体的优点是使目的基因与载体__，并能防止目的基因或载体的自身环化。

（2）将CBFl基因连接到图示质粒后，作为基因表达载体，其组成还必须有__，将重组质粒导入香蕉细胞最常用的方法是__。

（3）为了鉴别受体细胞中是否含有CBFl基因，可用含__的培养基进行筛选。

（4）科学家将生长健壮、苗龄一致的转基因香蕉(实验组)与非转基因香蕉(对照组)进行____处理，鉴定两组之间的抗寒性差异，如果__，则说明获得了抗寒的香蕉优质品种。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

（1）从基因文库中获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，将__________、__________、四种游离的脱氧核苷酸、Taq酶投入仪器中DNA分子可以进行指数扩增。

（2）在构建重组质粒时，应选用图中__________两种限制酶，目的是：_____________。

（3）将目的基因导入烟草常用__________法，该方法是利用了农杆菌___________特点。

（4）为了确定抗盐烟草培育成功，既要用放射性同位素标记的_____________作探针进行分子杂交检测，又要用____________________的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用_____________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有_______种。

（2）在构建重组质粒时，应选用______酶和________酶，对_______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入________________，理由是_______。

（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用__________________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加________。

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研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是

A.构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶

B.使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组

C.能在添加四环素的培养基上生存一定是含有重组质粒的大肠杆菌

D.利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙

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不属于目的基因与运载体结合过程的是 （　　 ）

A. 用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端

B. 用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端

C. 将重组DNA导入受体细胞中进行扩增

D. 将切下的目的基因插入到质粒切口处

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不属于目的基因与运载体结合过程的是(　　)

A.用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端

B.用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端

C.将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处

D.将重组DNA导入到受体细胞进行扩增

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下图1表示含目的基因的DNA片段，图2表示质粒（巳知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：

（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5＇端向3＇端延伸。利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有______________(从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。上述过程中，经过__________次循环后会产生双链等长的目的基因片段。

（2）要保证目的基因能与图2中的质粒连接，要将（2）中选出的两种引物的5＇端分别添加上________两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入到含大肠杆菌的转化液中。要从中分离出含该重组质粒的大肠杆菌单菌落，请简述操作思路将转化液接种在__________的固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间后，___________。

（3）从DNA分子结构分析，上述操作用到的工具酶作用的共同点是______________。

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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制性核酸内切酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶 ______ 分别对 ______ 、 ______ 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为 ______ 、 ______ 种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使I重组DNA中含有 ______ 作为标记基因。

（3）研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。

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根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA  除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即　　　　DNA连接酶和　　　　　DNA连接酶。

（3）基因工程中除质粒外，　　　　________和　　　　也可作为运载体。

（4）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，应先用________处理大肠杆菌。

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