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纤维素分解菌对于环境治理和废弃物的资源化开发利用具有重大意义。研究人员从富含腐殖质的土壤样品中筛选出高效纤维素分解菌并测定其纤维素分解能力。请回答下列问题。
(l)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上，培养基中加入的KH2P04和Na2HP04的作用有____（答出两点即可）。
(2)经选择培养后的样品需接种在___的培养基上培养，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是____。为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中l块平板的各划线区均未见菌落生长，最可能的原因是____。
(3)刚果红可以与纤维素形成____色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员将菌液接种在刚果红培养基平板中培养，长出菌落后出现大小不同的透明圈，透明圈的大小与纤维素酶的____有关，应选择____的菌落即为分解纤维素能力最强的菌株。
(4)为确定得到的是纤维素分解菌，需进行发酵产纤维素酶的实验。可采用对纤维素酶分解滤纸后产生____进行定量的测定。
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分离筛选降解纤维素能力强的微生物对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株，并对筛选出的菌株进行了初步研究。
（1）对培养基进行灭菌的常用方法是 。为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用 法进行接种。
（2） 先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以 为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入 溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量 。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知，8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强,原因是 。
注: ① DP = （D / d） 2，其中d表示菌落直径（cm） ，D表示水解圈直径（cm）
②“+”为滤纸边缘膨胀， “+ + ”为滤纸整齐膨胀并弯曲，“+ + + ”为滤纸不定形“+ + + +”为成团糊状“+ + + + +” 为半清状
（3） 为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见下图。
由图分析可知，三种菌株对 的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中 的降解率变化最大。整体分析 号菌株的降解效果最好。
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纤维素的微生物分解对减轻废弃物污染和作物秸秆再利用具有重要应用价值。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，待培养液混浊后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。请回答：
（1）上述选择培养的目的是_________。培养过程中“振荡”作用是_________。
（2）鉴别培养时，为了得到单菌落，常采用平板划线法或_________进行接种，后一种方法测得的菌落数比活菌实际数目低的原因是_________。
（3）鉴别培养基中需加入_________才能对纤维素分解菌加以筛选。鉴别培养后，培养基中出现了几个以菌落为中心的透明圈，根据_________（ 填 “菌落直径”、“透明圈直径”或“透明圈直径/菌落直径”）的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。
（4）从纯化培养得到的纤维素分解菌中分离提取纤维素酶后怎样确定该酶酶活性的高低？_________。
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纤维素是地球上最丰富的可再生碳源物质之一，科学合理地利用纤维素有助于解决能源危机和环境污染等重大问题。请回答下列问题：
（1）分离纤维素分解菌时，从富含有机质的土壤中取样，将土壤滤液加入含有纤维素的液体培养基中进行选择培养，选择培养的目的是____________________。如果将选择培养后的液体培养基离心，人们__________（填“能”或“不能”）从上清液中获得纤维素酶。
（2）将纤维素酶粗提取液装入透析袋中，置于pH适宜的磷酸缓冲液中进行透析处理，可除去其中__________的杂质。为进一步纯化分离纤维素酶，可将样品加入__________中进行洗脱、收集。
（3）为使纤维素酶能够重复使用，可将冷却后的海藻酸钠溶液与纤维素酶液进行混合，通过注射器滴入CaCl2溶液中。这种酶固定方法称为__________。
（4）研究人员测定了不同温度对固定化酶酶活力的影响，结果如图所示。
根据以上数据可以看出，在温度为30℃～80℃的变化范围内，随着温度的升高固定化酶和游离酶的酶活力均呈现出__________的变化趋势。该趋势是由以下两个方面共同作用的结果：反应体系温度升高时，底物和酶分子动能增大，使反应速率__________；温度可改变酶的__________，其活性会随着温度的升高而降低甚至失活。除此之外，你还能得出的结论是____________________________。
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纤维素是地球上最丰富的可再生碳源物质之一，科学合理地利用纤维素有助于解决能源危机和环境污染等重大问题。请回答下列问题：
（1）分离纤维素分解菌时，从富含有机质的土壤中取样，将土壤滤液加入含有纤维素的液体培养基中进行选择培养，选择培养的目的是____________________。如果将选择培养后的液体培养基离心，人们__________（填“能”或“不能”）从上清液中获得纤维素酶。
（2）将纤维素酶粗提取液装入透析袋中，置于pH适宜的磷酸缓冲液中进行透析处理，可除去其中__________的杂质。为进一步纯化分离纤维素酶，可将样品加入__________中进行洗脱、收集。
（3）为使纤维素酶能够重复使用，可将冷却后的海藻酸钠溶液与纤维素酶液进行混合，通过注射器滴入CaCl2溶液中。这种酶固定方法称为__________。
（4）研究人员测定了不同温度对固定化酶酶活力的影响，结果如图所示。
根据以上数据可以看出，在温度为30℃～80℃的变化范围内，随着温度的升高固定化酶和游离酶的酶活力均呈现出__________的变化趋势。该趋势是由以下两个方面共同作用的结果：反应体系温度升高时，底物和酶分子动能增大，使反应速率__________；温度可改变酶的__________，其活性会随着温度的升高而降低甚至失活。除此之外，你还能得出的结论是____________________________。
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酶具有高效性和专一性，利用酶来生产产品，不但产量高，品质好，而且可减少对环境的污染。回答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，至少包含______酶，能将农业废弃物如秸杆中的纤维素分解成_______而成为新的生产原料。
（2）土壤中的圆褐固氮菌利用自身酶系，可将大气中的N2固定以供农作物利用。实验室人员欲从土壤中筛选固氮菌，所用培养基应缺少______以抑制其它菌的生长，这样的培养基叫做______。植物细胞中含量较多的含氮有机物有______（答出两种）。若对土壤中固氮菌进行计数，可用________法将样本接种于固体培养基，经培养后对菌落数进行统计。
（3）固定化酶技术使得酶______以降低生产成本，常用的固定手段是______（答出两种）。
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现如今为了缓解温室效应，人类开始开发清洁能源，植物材料是良好的生产原料，其中最重要的步骤是木质纤维素转化为可发酵糖，由于纤维素酶具有 高效、环境友好的特点而被广泛采用。自然界中，能高效分解和利用纤维素的微生物很多，其中丝状真菌产生纤维素酶活力最高且包含各种降解酶。研究发现曲霉菌体内与纤维素转化相关基因多，里氏木霉虽然相关基因较少，但其外分泌纤维素酶的能力较其他丝状真菌最高。某科研小组欲对里氏木霉进行遗传改造以进一步提高其纤维素的分解能力。（己知真菌不能生活在含有潮霉素的环境中，而潮霉素磷酸转移酶可以抵抗潮霉素的这种作用。）
（1）从浩瀚的“基因海洋”中获得特定的目的基因的方法有（____）
①从供体细胞的DNA中直接分离基因②从受体细胞的DNA中直接分离基因③人工合成基因④复制⑤PCR法⑥cDNA文库法
A.①②④⑤ B.①③⑤⑥ C.③④⑤⑥ D.②④⑤⑥
（2）研究发现，在对丝状真菌转化时也可以用农杆菌转化法，该方法主要利用了农杆菌体内的________，在转化植物细胞时，除了该法还可以使用_____________法和_____________法。
（3）下图为研究人员构建的基因表达载体（hph为潮霉素磷酸转移酶基因），则目的基因应插入_____区段，原因是_____________。在筛选菌株时，应在培养基中添加__________________________。
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羽毛的成分主要是角蛋白，是一类结构稳定、不溶于水的蛋白质，目前缺乏对其高效降解的处理方法。实验人员从废弃羽毛堆积处的土壤中分离筛选出具有高效降解羽毛角蛋白的细菌，请回答下列问题：
（1）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌需从废弃羽毛堆积处的土壤中取样，其原因是____________。
（2）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌的培养基中应加入____作为唯一碳源，所用培养基从功能上来看属于_____培养基，该培养基中还需要加入适量的K2HPO4和KH2PO4，其作用是______________，对培养基灭菌的常用方法是___________________。
（3）角蛋白酶是羽毛降解菌的一种分泌蛋白，为了测定其角蛋白酶的活性，应让羽毛降解菌发酵，然后将发酵液离心，再从________（填“沉淀物”或“上清液”）取样。为了将角蛋白酶和其他蛋白质分离，可用电泳法分离蛋白质，电泳法可以根据蛋白质分子__________的不同，将蛋白质分离。测定羽毛降解菌角蛋白酶活性的主要目的是_____________。
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羽毛的成分主要是角蛋白，是一类结构稳定、不溶于水的蛋白质，目前缺乏对其高效降解的处理方法。实验人员从废弃羽毛堆积处的土壤中升离筛选出具有高效降解羽毛角蛋白的细菌，请回答下列问题：
（1）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌需从废弃羽毛堆积处的土壤中取样，其原因是__________。
（2）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌的培养基中应加入__________作为唯一碳源，该培养基中还需要加入适量的K2HPO4和KH2PO4，其作用是__________，对培养基灭菌的常用方法是__________。
（3）角蛋白酶是羽毛降解菌的一种分泌蛋白，为了测定其角蛋白酶的活性，应让羽毛降解菌发酵，然后将发酵液离心，再从__________（填“沉淀物”或“上清液”）取样。为了将角蛋白酶和其他蛋白质分离，可用电泳法分离蛋白质，电泳法可以根据蛋白质分子__________的不同，将蛋白质分离。测定羽毛降解菌角蛋白酶活性的主要目的是____________________。
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有些细菌可分解原油，从而消除原油泄漏造成的环境污染，某同学欲从土壤中筛选出高效降解原油的菌株，回答下列问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有__________和平板划线法，以下关于平板划线法操作中错误的是______
A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红
B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却
C．接种环在平板上划线位置是随机的
D．在挑取菌种和接种完毕后均要将试管口通过火焰
（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和______，无菌技术要求实验操作应在酒精灯__________附近进行，以避免环境中微生物的污染。
（4）对这些微生物的临时保藏，通常首先将菌种接种到试管的固体_______培养基上，在合适的温度下培养，菌落长成后，将试管放入______ ℃的冰箱中保藏。以后每3—6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上，原因是________________。
（5）醋酸杆菌是生产葡萄醋必用的菌种，可以从食醋中分离得到纯化的醋酸杆菌。扩大培养醋酸杆菌时，一般采用平板倒置培养，原因是_______________________________。
（6）某同学在实验室中一不小心将醋酸菌和酵母菌菌种混合在了一起，我们可以通过在培养基中加入青霉素而选择留下酵母菌，原因是______________________。
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