某校生物兴趣小组的同学对洞庭湖水体中的微生物种类进行了调查，并且分离出了一种能分解芦苇纤维...

某校生物兴趣小组的同学对洞庭湖水体中的微生物种类进行了调查，并且分离出了一种能分解芦苇纤维素茎秆的细菌，对细菌培养后进行了计数，请据所学知识回答下列问题：

(1)培养基中一般含有微生物生长所需的水、无机盐、____________等；培养基灭菌时采用的方法是______________________，接种时要对接种环进行__________。

(2)从众多细菌中筛选出能分解芦苇纤维素的细菌，应选择以________________________的培养基，对芦苇纤维素分解菌计数时，常采用的方法是　 ______________。

(3)当芦苇纤维素分解菌数量较少时，可采用________增加其数量；在稀释度数为106倍下涂布了三个平板(每次取0.1　 mL)，统计菌落数分别为240、250、260，则稀释前1　 mL菌液中所含细菌数为________个。

(4)获取芦苇纤维素分解菌后如要临时保存，可将其接种在______________________上，等长出菌落后放在______的冰箱中保存。

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【生物——选修l：生物技术实践】某兴趣小组欲调查学校某区域土壤中微生物的种类，并进行了微生物的分离等工作。回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法从土壤中分离分解纤维素的微生物，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________；分离得到的纯化单菌落属于_____________（填“种群”或“群落”）；筛选纤维素分解菌常用_______法，根据菌落周围是否出现___________来判定。

（2）该小组采用平板划线法分离土壤中的微生物，操作时，接种环通过___________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________。

（3）鉴定土壤中微生物的种类，可以通过菌落的___________（至少两点）等特征。在实验中该小组每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_________________________________。

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某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，实验结果见下表1：

表1　不同土壤微生物对纤维素的分解

（1）上述实验过程中“选择培养”的目的是________________。

（2）与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会________其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3）兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A． 先培养微生物，再加入刚果红染色；B． 直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成________，故选方案B。由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌________（填“前”或“后”）加入。

（4）有小组成员根据表1结果中的________，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如下表2：

表2　不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较

你认为将________作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈________相关。

（5）兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是________。

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为调查某地土质状况，科研小组对该地土壤中分解尿素的细菌进行了分离和纯化培养。请回答下列问题：

(1)分解尿素的细菌能分解尿素，而其它微生物不能，其根本原因是前者具有____________________________。为筛选出分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择以________作为唯一氮源。分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，但可用葡萄糖作为碳源，由此推测分解尿素的细菌是________(填“自养”或“异养”)型生物。

(2)该研究小组将10克土样进行梯度稀释，在某个稀释度下涂布接种了3个平板(接种量均为0.1mL)，经适宜培养后，3个平板均没出现菌落，分析可能的原因是____________________________。

分析原因后，科研小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，推测最可能的原因是______________________________________。

(3)科研小组从同一平板中挑选出A、B、C三种菌落进行梯度稀释并分别涂布接种在分解尿素的细菌的选择培养基上，经适宜培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落。

①由此可得出的结论是________________________________________________。

②推测C种细菌与A、B等在同一个平板上能生长繁殖的可能原因是________________。

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为调查某地土质状况，科研小组对该地土壤中分解尿素的细菌进行了分离和纯化培养。请回答下列问题：

(1)分解尿素的细菌能分解尿素，而其它微生物不能，其根本原因是前者具有____________________________。为筛选出分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择以________作为唯一氮源。分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，但可用葡萄糖作为碳源，由此推测分解尿素的细菌是________(填“自养”或“异养”)型生物。

(2)该研究小组将10克土样进行梯度稀释，在某个稀释度下涂布接种了3个平板(接种量均为0.1mL)，经适宜培养后，3个平板均没出现菌落，分析可能的原因是____________________________。

分析原因后，科研小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，推测最可能的原因是______________________________________。

(3)科研小组从同一平板中挑选出A、B、C三种菌落进行梯度稀释并分别涂布接种在分解尿素的细菌的选择培养基上，经适宜培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落。

①由此可得出的结论是________________________________________________。

②推测C种细菌与A、B等在同一个平板上能生长繁殖的可能原因是________________。

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大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。某生物科技小组的同学拟对某地严重污染的水体中细菌种类、大肠杆菌数目进行调查，实验及流程如下：

实验一：滤膜法测定大肠杆菌数目：

用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。

实验二：大肠杆菌的培养和分离：

配制培养基→灭菌→扩大培养→划线分离和培养→菌种保存。

回答下列问题：

（1）实验一中，过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，通过________方法进行灭菌处理。统计大肠杆菌菌落时应选择颜色为________的菌落进行计数。

（2）实验二中，“划线分离和培养”前应对样品进行________，这样，“划线分离和培养”过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是纯化菌种的常用方法。

（3）实验一和实验二中均用到固体培养基，配制培养基过程中，除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持培养基的________。获得纯净培养物的关键是________，所以对所用培养基均需进行灭菌处理，为检测灭菌是否彻底，应进行的操作是________________________；一般对所需菌种长期保存可采用________的方法。

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【生物—生物技术实践】（15分）某生物兴趣小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。

(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了___________和__________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐。

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_______________。

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于__________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种

_________作为对照进行实验。

(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有多种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_____________。

(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐____________细菌，这种培养基被称为__________。

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某生物兴趣小组想对土壤中能分解尿素的细菌进行分离，并统计每克土壤样品中的活菌数目，确定了培养基配方(如下表)。将配方中各种物质溶解后，用蒸馏水定容到l 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基以备用。

（1）培养皿用_____灭菌；培养基灭菌后，待培养基冷却到________℃(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在酒精灯附近倒平板；待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止__________________，造成污染。

（2）根据培养基的成分判断，该同学不能分离出土壤中分解尿素的细菌，原因是__________________。

（3）该同学采用稀释涂布平板法检测样液中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________；然后，将l mL样液稀释l00倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、38和37，据此可得出每升样液中的活菌数为___________。

（4）若该同学采用显微镜直接计数法测量细菌数量，左下图是一块血细胞计数板正面示意图，其上有________个计数室。右下图是计数室中一个中格的细菌分布示意图，该中格内细菌数量应计为____________。

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[生物—选修模块1：生物技术实践]（15分）

Ⅰ．纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①培养纤维素酶分解菌的土样最好选择在　　　　　　 环境采集。

②以下是一种培养基配方：纤维素5g、NaNO31g、Na2HPO4·7H20 1．2g、KH2PO40．9 g、MgSO4·7H2O 0．5g、KCl 0．5g、酵母膏0．5 g、水解酪素0．5g（蒸馏水定容到1000mL）。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是　　　　　 。

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用　　　　　 方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养。

Ⅱ．回答下列与芳香油提取相关的问题：

（1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有　　　　　　　 的性质。蒸馏时收集的蒸馏液不是纯的玫瑰精油，原因是　　　　　　　　 。

（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和　　　 　　　 。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是　　　　　　　　 。

（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会　　　　 　　 。

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土壤有“微生物的天然培养基”之称，其中的微生物，数量大，种类多，大约70%～90%是细菌。某科研小组现对土壤中某种细菌进行分离和计数实验，回答下列问题：

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基和选择培养基。制备牛肉膏蛋白胨固体培养基具体操作步骤包括：计算→称量→溶化→_________→_________。在牛肉膏蛋白胨固体培养基的基础上再制备选择培养基。

（2）从适宜的土壤环境中取样，并进行系列梯度稀释。将稀释相同倍数的菌液，分别在牛肉膏蛋白胨固体培养基和选择培养基上涂布，在适宜条件下进行培养，最终在牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长的菌落数目________（“多于”、“少于”或“等于”）选择培养基上的菌落数目。产生此现象的原因_____________________________________________。

（3）细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在______________的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对_______个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出土样中细菌的数目。

（4）为了保持菌种的纯净，需要对菌种进行保藏。目前菌种保藏常用方法包括__________和__________，前者保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。

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