某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土...

某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，实验结果见下表1：

表1　不同土壤微生物对纤维素的分解

（1）上述实验过程中“选择培养”的目的是________________。

（2）与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会________其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3）兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A． 先培养微生物，再加入刚果红染色；B． 直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成________，故选方案B。由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌________（填“前”或“后”）加入。

（4）有小组成员根据表1结果中的________，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如下表2：

表2　不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较

你认为将________作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈________相关。

（5）兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是________。

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分离分解纤维素的微生物的实验流程为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选符合要求的菌落。请回答下列问题。

（1）土壤取样一般选择____________丰富的环境。进行选择培养的目的是____________。

（2）测定土壤中纤维素分解菌的数量，一般选用_________________倍的稀释液进行培养。

（3）将样品用____________________（填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”） 接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上，具体操作都要在_____________________附近完成。

（4）刚果红可与纤维素形成________________复合物，因此纤维素被分解后，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的__________________，据此可以筛选纤维素分解菌。

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植物中的纤维素能被土壤中的某些微生物分解，下图为分离纤维素的微生物的实验流程。请回答：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选特定的菌落

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它包括C1酶、　　　　　　 、　　　　　　　 。

（2）在使用超净工作台前，可以用　　　　　　　　 照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒　　　　　　　　 溶液（写出一种即可），可以加强消毒效果。

（3）上图中选择培养的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）需要在鉴别培养基中加入　　　　　　　　 染料，通过颜色反应对分解纤维素的微生物进行筛选。产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的　　　　　　　　　　　　 。筛选到的菌种可以采用　　　　　　　　　 的方法长期保存。

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生产实践中应用的菌种主要来土壤,从土壤中分离微生物的一般实验流程是：土壤収样—选择培养—梯度稀释—鉴別培养。请回答：

（1）欲从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在　　　　 环境中采集土样，所选择的培养基应以　　　　 作为唯一碳源。

（2）Taq耐热菌的发现和分离为基因工程的发展作出了突出贡献。分离Taq耐热菌所需要的特殊培养条件是　　　　　　　　 ，在生物休内进行DNA复制所必需而PCR技术中不需要的酶是　　　　　　　　 。

（3）下图是纯化微生物培养的效果图。请冋答：

① 先配制好的培养基在接种前都要进行　　　　　　　　 灭菌，在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在　　　　　　　　 条件下进行。

②获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　 ,获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　 。

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纤维素酶的成本是影响乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程:土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。回答下列问题：

（1）最好选择____________环境采集土样。

（2）以下是一种培养基配方：

利用该培养基培养的目的是__________，在该培养基中_____________是唯一碳源。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入__________染液，加入染液的方法有两种:一种先培养微生物，再加入染液进行颜色反应；另一种是在________时加入染液。

（4）将筛选获得的菌液稀释后用__________(方法)接种到鉴别培养基上，然后挑选产生_________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）请设计实验检测纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量的思路:________________________。

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某生物活动小组为测定当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作如下：

请分析并回答下列问题：

（1）为了筛选和分离尿素分解菌，培养基中需要添加____________作为唯一氮源，除了必需的营养物质外，培养基中还需要添加____________。尿素分解菌能产生脲酶，把尿素分解成____________。

（2）在上述系列梯度稀释时，吸取前一试管（或锥形瓶）中lmL菌液到后一试管的工具是____________，该工具在使用前需要进行____________灭菌。

（3）实验结果：3号试管涂布的三个平板的菌落数为560、601、24，4号试管涂布的三个平板的菌落数为57、59、61，5号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该10克土壤样品中含有尿素分解菌的估算数目是____________。通过该方法计算出来的数值往往比实际值低，原因是____________。在进行实验时，除了涂布的三个平板外，还需要至少准备一个空白培养培养基做对照，目的是____________。

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从土壤中筛选纤维素分解菌的实验设计正确的是

A．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→发酵培养

B．土壤取样→选择培养→稀释涂布平板→挑选菌落

C．土壤取样→梯度稀释→选择培养→挑选菌落

D．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→选择培养→挑选菌落

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土壤中的纤维素分解菌能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程如下：

土壤取样→选择培养基→梯度稀释→鉴别培养基

（1）纤维素酶是复合酶，由C1酶、Cx酶和__________组成。

（2）实验室中微生物筛选常应用选择培养基的方法，原理是__________。为分离得到纤维素分解菌，使用的培养基应以__________作为主要碳源。

（3）梯度稀释前进行选择培养的目的是__________，这一步一般选用__________（填“固体”或“液体”）培养基。

（4）梯度稀释后用__________（仪器）将菌种接种在培养基表面。

（5）用__________染色法鉴定纤维素分解菌时，培养基上的菌落周围会形成透明圈，其大小反映____________________。

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当猪粪和小麦秸秆自然堆肥的温度上升到55℃时，实验小组采集样品以获取纤维素高温分解菌。下图表示目的菌的分离过程，请回答下列问题：

在高温堆肥中取样→选择培养→X→将样品接种到鉴别纤维高温分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落

（1）在取样前，对猪粪和小麦秸秆进行高温堆肥的目的是_________。取样后进行选择培养的目的是______________________。

（2）图中X所表示的操作过程为_________，之后需要将样品接种到_______（物理性质）培养基上。

（3）鉴别纤维素高温分解菌的培养基的成分为羧基甲纤维素钠（CMC-Na）12.0g、NaCl 4.0g、NH2PO4 2.0g、MgSO4•7H2O 0.3g、蒸馏水100mL、琼脂、刚果红，pH为7.0～7.4。

①分析培养基的成分可知，该培养基中为纤维素高温分解菌提供碳源的物质是_____________。若要培养霉菌，需要将培养基的pH调至________（填“酸”“碱”或“中”）性。

②鉴别纤维素高温分解菌的原理是纤维素能和刚果红形成一种__________________，而纤维素高温分解菌能产生_____________________将纤维素分解而出现透明圈。

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纤维素的微生物分解对减轻废弃物污染和作物秸秆再利用具有重要应用价值。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，待培养液混浊后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。请回答：

（1）上述选择培养的目的是_________。培养过程中“振荡”作用是_________。

（2）鉴别培养时，为了得到单菌落，常采用平板划线法或_________进行接种，后一种方法测得的菌落数比活菌实际数目低的原因是_________。

（3）鉴别培养基中需加入_________才能对纤维素分解菌加以筛选。鉴别培养后，培养基中出现了几个以菌落为中心的透明圈，根据_________（ 填 “菌落直径”、“透明圈直径”或“透明圈直径/菌落直径”）的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（4）从纯化培养得到的纤维素分解菌中分离提取纤维素酶后怎样确定该酶酶活性的高低？_________。

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