当猪粪和小麦秸秆自然堆肥的温度上升到55℃时，实验小组采集样品以获取纤维素高温分解菌。下图...

当猪粪和小麦秸秆自然堆肥的温度上升到55℃时，实验小组采集样品以获取纤维素高温分解菌。下图表示目的菌的分离过程，请回答下列问题：

在高温堆肥中取样→选择培养→X→将样品接种到鉴别纤维高温分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落

（1）在取样前，对猪粪和小麦秸秆进行高温堆肥的目的是_________。取样后进行选择培养的目的是______________________。

（2）图中X所表示的操作过程为_________，之后需要将样品接种到_______（物理性质）培养基上。

（3）鉴别纤维素高温分解菌的培养基的成分为羧基甲纤维素钠（CMC-Na）12.0g、NaCl 4.0g、NH2PO4 2.0g、MgSO4•7H2O 0.3g、蒸馏水100mL、琼脂、刚果红，pH为7.0～7.4。

①分析培养基的成分可知，该培养基中为纤维素高温分解菌提供碳源的物质是_____________。若要培养霉菌，需要将培养基的pH调至________（填“酸”“碱”或“中”）性。

②鉴别纤维素高温分解菌的原理是纤维素能和刚果红形成一种__________________，而纤维素高温分解菌能产生_____________________将纤维素分解而出现透明圈。

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[生物——选修1：生物技术实践]

针对蔬菜废弃物纤维素降解慢的难题，从自然界中采集堆肥、枯树叶等样品进行分离，筛选分解能力较强的纤维素分解菌。某研究小组探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下：①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量的测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请回答下列问题：

（1）步骤①中，用________法将1 mL菌液逐步稀释成10-6的悬浊液。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

注："+"表示有，"-"表示无。

据表判断，培养基甲_____（填"能"或"不能"）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是________；培养基乙________（填"能"或"不能"）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____。

（2）对土壤中该类微生物进行计数，则步骤①采用的接种方法是______________。

（3）纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量测定的方法。

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[生物一选修1生物技术实践专题]

针对蔬菜废弃物纤维素降解慢的难题，从自然界中采集堆肥、枯树叶等样品进行分离，筛选分解能力较强的纤维素分解菌。回答下列问题：

（1）采集的样品中的纤维素分解菌能产生纤维素酶，该酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即____酶、____酶和葡萄糖苷酶，葡萄糖苷酶可将_____________分解成葡萄糖。

（2）为了确保能够从样品中分离到所需要的微生物，通常可以通过__________增加纤维素分解菌的浓度。配制的培养基按物理性质分属于______培养基，其中碳源为__________,除碳源外，还应有的营养物质有水、氮源、________。

（3）为了分离出分解能力强的纤维素分解菌的单个菌落，用_________法将富含纤维素分解

菌的溶液接种到无色的培养基上，待长出菌落后，覆盖_____溶液，10～15分钟后倒去，再

经过________溶液的处理，15min后倒掉，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现________。

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农作物秸秆中含有的纤维素阻碍了堆肥技术在处理有机固体废物领域的发展。为提高堆肥品质：科研人员探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下:①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请问答下列问题：

（1）步骤①中，若用稀释涂布平板法接种，则必须将菌液进行一系列的_________，接种所需的培养基中通常加入__________制成固体培养基。已知纤维素酶的最适温度在45～65℃之间，欲从45～65℃的恒温箱中筛选出能高效分解纤维素的细菌，请写出测定纤维素酶的最适温度的实验思路：______________。

（2）步骤②中，在条件适宜的环境下培养细菌10d后，用__________(填一种实验用具）在显微镜下可计算细菌数量。此方法中的“条件”至少包括:适宜温度、以________作为唯一碳源的_______（填“固态”“半固态”或“液态”）培养基等。可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡，原理是__________。

（3）步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及_____________来表示。

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农作物秸秆中的纤维素阻碍了堆肥技术在处理有机固体废物领域的发展。为提高堆肥品质，科研人员探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下：①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请问答下列问题：

（1）步骤①中，若用稀释涂布平板法接种，则必须将菌液进行一系列的_____。已知纤维素酶的最适温度在45～65℃之间，欲从45～65℃的恒温箱中筛选出能高效分解纤维素的细菌，请写出测定纤维素酶的最适温度的实验思路：_____。

（2）步骤②中，在条件适宜的环境下培养细菌10d后，用_________（填一种实验用具）在显微镜下可计算细菌数量。此方法中的“条件”至少包括：适宜温度、以_________作为唯一碳源的_____（填“固态”“半固态”或“液态”）培养基等。可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡，原理是_________。

（3）步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及_____来表示。

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[生物—选修1]请回答关于“分解纤维素的微生物的分离”的实验的一些问题。

（1）采集土样时，应选择_____的环境，因为纤维素分解菌大多分布在这些环境的土壤中。

（2）为确保能够从样品中分离得到目的菌，可通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度。选择培养基应以_____作为唯一的碳源。为什么选择培养能够“浓缩”目的菌？__________。

（3）分离得到分解纤维素的微生物，常用的方法是_____，常用的接种方法是______，判断是否是目的菌菌落的依据是_____，设置空白对照的目的是______。

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某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，实验结果见下表1：

表1　不同土壤微生物对纤维素的分解

（1）上述实验过程中“选择培养”的目的是________________。

（2）与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会________其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3）兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A． 先培养微生物，再加入刚果红染色；B． 直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成________，故选方案B。由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌________（填“前”或“后”）加入。

（4）有小组成员根据表1结果中的________，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如下表2：

表2　不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较

你认为将________作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈________相关。

（5）兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是________。

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研究发现，牛的瘤胃中含有多种纤维素分解菌，这些纤维素分解菌可用于分解秸秆等废弃物。某兴趣

小组按以下实验流程分离获取了牛瘤胃中的纤维素分解菌。

①从屠宰场获取新鲜瘤胃液，短暂离心后过滤。

②将滤液接种到含有羧甲基纤维素钠和染色剂A的培养基上进行培养。

③将从步骤②获取的目标菌落接种到以滤纸条为唯一碳源的培养基中，摇床悬浮培养5天，观察滤纸的崩解效果。

④取崩解效果最好的几片滤纸，将上面的菌种接种到同体培养基上，观察菌落生长情况。

请回答下列问题：

（1）步骤②中的培养基加入的染色剂A为___________，若此培养基中出现___________，则可以证明滤液中含有纤维素分解菌。

（2）从基质状态上划分，步骤③所使用的培养基是_________，以滤纸条为唯一碳源的目的是_________，造成滤纸条崩解的原因是______________________。

（3）若步骤④的实验结果是_________________，可得出牛瘤胃中有多种纤维素分解菌的结论。

（4）步骤④得到多种纤维素分解菌后，仍需要进一步分离纯化。其实验思路是_______。

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对于农作物秸秆的处理手段越来越倾向于添加高效降解微生物进行腐熟堆肥。为了寻求高效降解纤维素的微生物，某科研团队进行了纤维素优势分解菌的筛选实验。主要步骤如下：

①制备培养基。

②纤维素分解菌的分离、纯化。取富集培养后的土样培养液，经适当稀释后，移取培养液各0.1mL分别接种到能分别筛选出细菌、真菌和放线菌的固体培养基上进行分离、纯化培养。

③纤维素分解菌的初筛。将已经纯化的菌株接种到同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上，使用刚果红染色法，根据培养基平板上透明圈直径（D）与菌落直径（d）比值的大小，初步筛选出纤维素优势分解菌。

回答下列问题：

（1）为了制成固体培养基，除了水、碳源、氮源和无机盐等基本配方以外，培养基中通常还需加入________。微生物吸收的无机盐的作用是_________________________________________________________________（答出两点即可）。

（2）步骤②、③中，若将稀释后且富含多种类型微生物的土样培养液直接涂布于同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上，可能导致错过优势纤维素分解菌的发现，原因是___________________________。某研究人员将1mL培养液稀释100倍后，在4个平板上分别接入0.1mL的稀释液，经适当培养后，4个平板上的菌落数分别是15、151、155、159，据此可得出1L培养液中的活菌数是__________个。

（3）步骤③中，刚果红可以与纤维素形成______色复合物。接种在培养基上初筛分离得到的4个菌株的观察结果如下表。据表分析，哪号菌株产生的纤维素酶活性最高或其纤维素酶量最大？理由是什么？_______________________________________________

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为了减轻废弃农作物秸秆对农村环境污染，某科研小组使用下图所示接种方法分离纯化分解纤维素的微生物用于生产。请据图回答下列问题：

（1）图中接种工具的名称是______，制备培养微生物的培养基时，灭菌与调pH的先后顺序是______。

（2）步骤②中，将接种工具冷却的原因是______。

（3）图示接种方法是______。

（4）为从富含纤维素的土壤中分离获得分解纤维素的微生物单个菌落，某同学配制了一个培养基（成分见下表）：

注：“+”表示有

据表分析，该培养基含有微生物所需的______、氮源、水、无机盐四大类营养物质。该培养基______（填“能”或“不能”）用于分离纤维素分解菌，原因是______。

（5）对该微生物的优良菌种进行长期保存，可以采用______的方法。

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