为了减轻废弃农作物秸秆对农村环境污染，某科研小组使用下图所示接种方法分离纯化分解纤维素的微...

为了减轻废弃农作物秸秆对农村环境污染，某科研小组使用下图所示接种方法分离纯化分解纤维素的微生物用于生产。请据图回答下列问题：

（1）图中接种工具的名称是______，制备培养微生物的培养基时，灭菌与调pH的先后顺序是______。

（2）步骤②中，将接种工具冷却的原因是______。

（3）图示接种方法是______。

（4）为从富含纤维素的土壤中分离获得分解纤维素的微生物单个菌落，某同学配制了一个培养基（成分见下表）：

注：“+”表示有

据表分析，该培养基含有微生物所需的______、氮源、水、无机盐四大类营养物质。该培养基______（填“能”或“不能”）用于分离纤维素分解菌，原因是______。

（5）对该微生物的优良菌种进行长期保存，可以采用______的方法。

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纤维素的微生物分解对减轻废弃物污染和作物秸秆再利用具有重要应用价值。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，待培养液混浊后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。请回答：

（1）上述选择培养的目的是_________。培养过程中“振荡”作用是_________。

（2）鉴别培养时，为了得到单菌落，常采用平板划线法或_________进行接种，后一种方法测得的菌落数比活菌实际数目低的原因是_________。

（3）鉴别培养基中需加入_________才能对纤维素分解菌加以筛选。鉴别培养后，培养基中出现了几个以菌落为中心的透明圈，根据_________（ 填 “菌落直径”、“透明圈直径”或“透明圈直径/菌落直径”）的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（4）从纯化培养得到的纤维素分解菌中分离提取纤维素酶后怎样确定该酶酶活性的高低？_________。

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对于农作物秸秆的处理手段越来越倾向于添加高效降解微生物进行腐熟堆肥。为了寻求高效降解纤维素的微生物，某科研团队进行了纤维素优势分解菌的筛选实验。主要步骤如下：

①制备培养基。

②纤维素分解菌的分离、纯化。取富集培养后的土样培养液，经适当稀释后，移取培养液各0.1mL分别接种到能分别筛选出细菌、真菌和放线菌的固体培养基上进行分离、纯化培养。

③纤维素分解菌的初筛。将已经纯化的菌株接种到同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上，使用刚果红染色法，根据培养基平板上透明圈直径（D）与菌落直径（d）比值的大小，初步筛选出纤维素优势分解菌。

回答下列问题：

（1）为了制成固体培养基，除了水、碳源、氮源和无机盐等基本配方以外，培养基中通常还需加入________。微生物吸收的无机盐的作用是_________________________________________________________________（答出两点即可）。

（2）步骤②、③中，若将稀释后且富含多种类型微生物的土样培养液直接涂布于同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上，可能导致错过优势纤维素分解菌的发现，原因是___________________________。某研究人员将1mL培养液稀释100倍后，在4个平板上分别接入0.1mL的稀释液，经适当培养后，4个平板上的菌落数分别是15、151、155、159，据此可得出1L培养液中的活菌数是__________个。

（3）步骤③中，刚果红可以与纤维素形成______色复合物。接种在培养基上初筛分离得到的4个菌株的观察结果如下表。据表分析，哪号菌株产生的纤维素酶活性最高或其纤维素酶量最大？理由是什么？_______________________________________________

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研究发现，牛的瘤胃中含有多种纤维素分解菌，这些纤维素分解菌可用于分解秸秆等废弃物。某兴趣

小组按以下实验流程分离获取了牛瘤胃中的纤维素分解菌。

①从屠宰场获取新鲜瘤胃液，短暂离心后过滤。

②将滤液接种到含有羧甲基纤维素钠和染色剂A的培养基上进行培养。

③将从步骤②获取的目标菌落接种到以滤纸条为唯一碳源的培养基中，摇床悬浮培养5天，观察滤纸的崩解效果。

④取崩解效果最好的几片滤纸，将上面的菌种接种到同体培养基上，观察菌落生长情况。

请回答下列问题：

（1）步骤②中的培养基加入的染色剂A为___________，若此培养基中出现___________，则可以证明滤液中含有纤维素分解菌。

（2）从基质状态上划分，步骤③所使用的培养基是_________，以滤纸条为唯一碳源的目的是_________，造成滤纸条崩解的原因是______________________。

（3）若步骤④的实验结果是_________________，可得出牛瘤胃中有多种纤维素分解菌的结论。

（4）步骤④得到多种纤维素分解菌后，仍需要进一步分离纯化。其实验思路是_______。

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农作物秸秆中含有的纤维素阻碍了堆肥技术在处理有机固体废物领域的发展。为提高堆肥品质：科研人员探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下:①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请问答下列问题：

（1）步骤①中，若用稀释涂布平板法接种，则必须将菌液进行一系列的_________，接种所需的培养基中通常加入__________制成固体培养基。已知纤维素酶的最适温度在45～65℃之间，欲从45～65℃的恒温箱中筛选出能高效分解纤维素的细菌，请写出测定纤维素酶的最适温度的实验思路：______________。

（2）步骤②中，在条件适宜的环境下培养细菌10d后，用__________(填一种实验用具）在显微镜下可计算细菌数量。此方法中的“条件”至少包括:适宜温度、以________作为唯一碳源的_______（填“固态”“半固态”或“液态”）培养基等。可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡，原理是__________。

（3）步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及_____________来表示。

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农作物秸秆中的纤维素阻碍了堆肥技术在处理有机固体废物领域的发展。为提高堆肥品质，科研人员探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下：①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请问答下列问题：

（1）步骤①中，若用稀释涂布平板法接种，则必须将菌液进行一系列的_____。已知纤维素酶的最适温度在45～65℃之间，欲从45～65℃的恒温箱中筛选出能高效分解纤维素的细菌，请写出测定纤维素酶的最适温度的实验思路：_____。

（2）步骤②中，在条件适宜的环境下培养细菌10d后，用_________（填一种实验用具）在显微镜下可计算细菌数量。此方法中的“条件”至少包括：适宜温度、以_________作为唯一碳源的_____（填“固态”“半固态”或“液态”）培养基等。可用台盼蓝染液鉴定视野中细菌是否死亡，原理是_________。

（3）步骤③中，酶活力可用培养基上菌落直径及_____来表示。

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某生物兴趣小组成员用如图所示方法分离纯化分解尿素的微生物。请回答下列问题：

（1）图示接种方法是_____，图中接种工具的名称是_____。制备培养微生物的培养基时，调pH应在灭菌之_____（填“前”或“后”）。

（2）②中接种工具的冷却需在酒精灯火焰旁的原因是_____。

（3）纯化培养时，培养基中的唯一氮源是尿素，此外还应加入的营养物质有_____，在该培养基中加入_____指示剂，可对微生物进行初步鉴定。

（4）该实验还可以将菌液进行一系列的_____，再分别涂布到固体培养基表面进行培养。统计时，培养基表面生长的一个菌落来源于_____个活菌。

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当猪粪和小麦秸秆自然堆肥的温度上升到55℃时，实验小组采集样品以获取纤维素高温分解菌。下图表示目的菌的分离过程，请回答下列问题：

在高温堆肥中取样→选择培养→X→将样品接种到鉴别纤维高温分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落

（1）在取样前，对猪粪和小麦秸秆进行高温堆肥的目的是_________。取样后进行选择培养的目的是______________________。

（2）图中X所表示的操作过程为_________，之后需要将样品接种到_______（物理性质）培养基上。

（3）鉴别纤维素高温分解菌的培养基的成分为羧基甲纤维素钠（CMC-Na）12.0g、NaCl 4.0g、NH2PO4 2.0g、MgSO4•7H2O 0.3g、蒸馏水100mL、琼脂、刚果红，pH为7.0～7.4。

①分析培养基的成分可知，该培养基中为纤维素高温分解菌提供碳源的物质是_____________。若要培养霉菌，需要将培养基的pH调至________（填“酸”“碱”或“中”）性。

②鉴别纤维素高温分解菌的原理是纤维素能和刚果红形成一种__________________，而纤维素高温分解菌能产生_____________________将纤维素分解而出现透明圈。

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传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌（脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前需要进行调节________；接种前要采用________法进行灭菌，这种操作的目的是___________________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体培养基上；并加入酚红指示剂进行检测，若指示剂变________，则说明有目的菌株在。在第二次及其后的划线操作时，总是从________开始划线，该分离纯化方法称平板划线法。

（3）进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________（填序号）。

①所取土样不同  ②培养基被污染  ③接种操作错误    ④没有设置对照实验

实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后才能倒掉。

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传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌(脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调节_______；接种前要进行_______，这种操作的目的是___________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于以______________为唯一氮源的固体培养基上；并加入_________指示剂加以鉴别。在第二次及其后的划线操作时，总是从____________开始划线，该分离纯化方法称平板划线法。

（3）进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有_________(填序号）。

①所取土样不同　　　 ②培养基被污染　　 ③接种操作错误　　 ④没有设置对照实验

实验结束后，使用过的培养基应该进行___________处理后才能倒掉。

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