传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污...

传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌（脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前需要进行调节________；接种前要采用________法进行灭菌，这种操作的目的是___________________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体培养基上；并加入酚红指示剂进行检测，若指示剂变________，则说明有目的菌株在。在第二次及其后的划线操作时，总是从________开始划线，该分离纯化方法称平板划线法。

（3）进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________（填序号）。

①所取土样不同  ②培养基被污染  ③接种操作错误    ④没有设置对照实验

实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后才能倒掉。

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传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌(脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调节_______；接种前要进行_______，这种操作的目的是___________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于以______________为唯一氮源的固体培养基上；并加入_________指示剂加以鉴别。在第二次及其后的划线操作时，总是从____________开始划线，该分离纯化方法称平板划线法。

（3）进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有_________(填序号）。

①所取土样不同　　　 ②培养基被污染　　 ③接种操作错误　　 ④没有设置对照实验

实验结束后，使用过的培养基应该进行___________处理后才能倒掉。

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【生物一选修1生物技术实践】

传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从油脂污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。

（1）在菌株筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_________为唯一碳源的固体培养基上；随后对培养基采用高压蒸汽灭菌，目的是__________________。

（2）为了筛选出目的菌株，可将适量的_________(试剂）滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后若菌落周围出现________________，则说明此菌株能够降解脂肪。

（3）把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，需利用_____________法进行接种，注意每次操作前均要___________；操作时首尾区______________。

（4）细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为_________________；实验结束后，使用过的培养基应该进行____________处理后才能倒掉。

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无菌操作是微生物接种技术的关键；传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：

（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理　　　　　　　　　 。

①皮肤　　　 ②饮用水　　 ③牛奶　　 ④注射器　　 ⑤培养皿　　

⑥接种环　　 ⑦培养基　　 ⑧果汁　　 ⑨酱油　　　　 ⑩手术刀

A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩　　 C．①②③④⑤⑥⑧　　 D．以上全部

（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整　　　　　　　 ，接种前要进行　　　　 ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。

（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下图是利用　　　　　　　　　　 法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：

① 每次划线前要　　　　　　　　　　　　 ；

② 冷却后从上一区划线末端开始划；

③ 首尾区　　　　　　 。

（4）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被

污染。对固体培养基应采用的检测方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，观察培养基上是否有菌落产生。

（5）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

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请分析回答下列问题:

(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。实验室常用的灭菌方法有　　 灭菌、干热灭菌和　　 灭菌。

(2)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是(　 )

①土壤取样 ②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液 ③吸取0.1mL溶液进行平板涂布

④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A.①②③④    B.①③②④

C.①②④③    D.①④②③

(3)利用酵母菌将葡萄汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验,在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈　　 色。在发酵过程中,随着酒精度的提高,发酵液逐渐呈现深红色,原因是　　　　　　　　　　 。

(4)从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌,最常使用的接种方法是　　 和　　 两种。酵母菌适合生活在偏酸性环境中,而放线菌则适合生活在偏碱性环境中,分离二者所用的培养基称为　　 。

(5)在腐乳制作的过程中,起主要作用的微生物是　　 。

(6)腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有哪些(　 )

①盐的用量 ②酒的种类和用量 ③发酵温度 ④发酵时间 ⑤香辛料的用量

A.①②③④⑤    B.①②③

C.①②⑤　     D.③④

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嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的有关分离纯化与鉴定过程，请回答相关问题。

第一步：从国家乳业技术中心获得混合发酵剂（含多种乳酸菌），用无菌生理盐水梯度稀释。

第二步：取等量不同稀释度的菌液分别接种于Elliker培养基，在相同且适宜条件下培养。

第三步：选取疑似菌落分别穿刺接种于ABC三种糖发酵半固体培养基（成分及现象如下表）中培养，进一步进行生化鉴定。

第四步：将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养并保存。

（1）第一步中稀释的目的是______________________。

（2）在第二步中，利用的接种方法是____________，可根据菌落__________特征来选取疑似菌落。（写出两点）

（3）第三步中，如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌，根据生化鉴定现象归纳其代谢特点为：利用___（葡萄糖/蔗糖/麦芽糖）作为主要碳源，并可以经_____（无氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代谢产物中一定有____（酸/碱/中）性产物产生。NaCl的主要作用是_________。

（4）第四步中，如果要长期保存分离出的菌种常采用___________________的方法，并将其置于_____ ℃ 冷冻箱中保存。

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嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的有关分离纯化与鉴定过程，请回答相关问题。

第一步：从国家乳业技术中心获得混合发酵剂（含多种乳酸菌），用无菌生理盐水梯度稀释。

第二步：取等量不同稀释度的菌液分别接种于Elliker培养基，在相同且适宜条件下培养。

第三步：选取疑似菌落分别穿刺接种于ABC三种糖发酵半固体培养基（成分及现象如下表）中培养，进一步进行生化鉴定。

第四步：将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养并保存。

（1）第一步中稀释的目的是______________。

（2）在第二步中，利用的接种方法是___________，可根据菌落_______特征来选取疑似菌落。(写出两点)

（3）第三步中，如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌，根据生化鉴定现象归纳其代谢特点为：利用_________(葡萄糖/蔗糖/麦芽糖)作为主要碳源，并可以经____（无氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代谢产物中一定有____（酸/碱/中）性产物产生。NaCl的主要作用是___________。

（4）第四步中，如果要长期保存分离出的菌种常采用____的方法，并将其置于___℃冷冻箱中保存。

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运用所学知识回答下列与生物技术实践相关的问题。

（1）某科普实验小组欲从石油污染的水域中筛选出能高效降解石油的微生物。请回答：

①从水体中分享纯化菌种时，若要获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是＿＿＿，操作时采用＿＿＿灭菌的方法。

②在筛选过程中，应将稀释接种于以石油为唯一碳源的固体培养基上，在微生物培养前，需对培养基进行＿＿＿，该培养基从功能上看属于＿＿＿＿

（2）进行月季花药离体培养时，选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是＿＿＿＿＿。花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中＿＿＿＿

（3）葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮红素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用＿＿＿＿法来分离提取，还可以用＿＿＿＿和蒸馏等提取什物芳香油的方法。

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有关微生物的培养与应用，下列说法正确的是（　　 ）

A.通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落

B.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段

C.接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格灭菌处理

D.某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3，以M2作为该样品菌落估计值

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（一)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

(1)无菌操作是微生物实验中重要的一项技术，下列常用的无菌操作中错误的是（_____）

A.用酒精擦拭双手

B.用氯气消毒水源

C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行

D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭

(2)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。

(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即__________和_______。

(4)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力____________。

(二)为了更好地分解石油，通过基因工程产生超级细菌。下图a表示基因工程中经常选用的载体——pBR322质粒,Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检査载体是否导入原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌(受体细胞），将大肠杆菌涂布在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图b的结果(黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：

(1)将重组的DNA分子导人受体细胞时，用________处理大肠杆菌，增大____________。

(2)pBR322质粒的化学本质是_______，其控制着__________等性状。与图c空圏相对应的图b中的菌落表现型是___________，由此说明目的基因插入了_____________中。

(3)基因工程成功的标志是_______________________。

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