嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的...

嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的有关分离纯化与鉴定过程，请回答相关问题。

第一步：从国家乳业技术中心获得混合发酵剂（含多种乳酸菌），用无菌生理盐水梯度稀释。

第二步：取等量不同稀释度的菌液分别接种于Elliker培养基，在相同且适宜条件下培养。

第三步：选取疑似菌落分别穿刺接种于ABC三种糖发酵半固体培养基（成分及现象如下表）中培养，进一步进行生化鉴定。

第四步：将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养并保存。

（1）第一步中稀释的目的是______________________。

（2）在第二步中，利用的接种方法是____________，可根据菌落__________特征来选取疑似菌落。（写出两点）

（3）第三步中，如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌，根据生化鉴定现象归纳其代谢特点为：利用___（葡萄糖/蔗糖/麦芽糖）作为主要碳源，并可以经_____（无氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代谢产物中一定有____（酸/碱/中）性产物产生。NaCl的主要作用是_________。

（4）第四步中，如果要长期保存分离出的菌种常采用___________________的方法，并将其置于_____ ℃ 冷冻箱中保存。

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嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的有关分离纯化与鉴定过程，请回答相关问题。

第一步：从国家乳业技术中心获得混合发酵剂（含多种乳酸菌），用无菌生理盐水梯度稀释。

第二步：取等量不同稀释度的菌液分别接种于Elliker培养基，在相同且适宜条件下培养。

第三步：选取疑似菌落分别穿刺接种于ABC三种糖发酵半固体培养基（成分及现象如下表）中培养，进一步进行生化鉴定。

第四步：将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养并保存。

（1）第一步中稀释的目的是______________。

（2）在第二步中，利用的接种方法是___________，可根据菌落_______特征来选取疑似菌落。(写出两点)

（3）第三步中，如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌，根据生化鉴定现象归纳其代谢特点为：利用_________(葡萄糖/蔗糖/麦芽糖)作为主要碳源，并可以经____（无氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代谢产物中一定有____（酸/碱/中）性产物产生。NaCl的主要作用是___________。

（4）第四步中，如果要长期保存分离出的菌种常采用____的方法，并将其置于___℃冷冻箱中保存。

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酸奶和泡菜的制作都离不开乳酸菌，请回答下列有关制作酸奶和泡菜的问题：

（1）分离纯化乳酸菌的培养基中含牛肉膏，牛肉膏提供的主要营养有___________；培养皿灭菌常采用___________法；检验培养基灭菌是否合格的方法是___________。

（2）培养乳酸菌一段时间后，培养基中的pH会下降，原因是______________________。

（3）家庭制作泡菜时，一般需要配制泡菜盐水，但会因其含盐量过高而影响口感。直接接种乳酸菌制作泡菜时，产生的大量乳酸能够抑制___________，因此可以采用低盐工艺制作泡菜，从而大幅降低泡菜的含盐量。

（4）乳酸菌活菌数是衡量酸奶营养价值的一个重要指标，为检测某酸奶中乳酸菌的含量取不同稀释度的样品各1mL涂布到固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间，统计得到106、107、108三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为413个，86个、13个，据此估算，每毫升样品中的乳酸菌数约为___________个，接种乳酸菌所用的接种工具是___________。

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酸奶和泡菜的制作都离不开乳酸菌，请回答下列有关制作酸奶和泡菜的问题：

（1）分离纯化乳酸菌的培养基中含蛋白胨，蛋白胨提供的主要营养有_________；培养基灭菌常采用_________法；检验培养基灭菌是否合格的方法是_________。

（2）培养乳酸菌一段时间后，培养基中的pH会下降，原因是_____________________。

（3）家庭制作泡菜时，一般需要配制泡菜盐水，但会因其含盐量过高而影响口感。直接接种乳酸菌制作泡菜时，产生的大量乳酸能够___________，因此可以采用低盐工艺制作泡菜，从而大幅降低泡菜的含盐量。

（4）乳酸菌活菌数是衡量酸奶营养价值的一个重要指标，为检测某酸奶中乳酸菌的含量，取不同稀释度的样品各1 mL涂布到固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间，统计得到106、107、108三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为433个、76个、8个，据此估算，每毫升样品中的乳酸菌数约为_________个，接种乳酸菌所用的接种工具是_________。

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）某同学用新鲜的泡菜汁为实验材料分离纯化出乳酸菌，用来生产酸奶。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________对泡菜汁进行梯度稀释，然后采用__________法进行分离，可获得乳酸菌的单菌落。

（2）推测分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有__________和__________。分离纯化时应挑选出__________的菌落作为候选菌。

（3）获得纯化的乳酸菌后，可以利用纯牛奶作为原料制作酸奶，发酵常在__________（A．有氧+常温 B．无氧+常温 C．有氧+低温 D．无氧+低温）条件下进行。如果使用的是加了某些抗生素的纯牛奶作原料制酸奶，很有可能会发酵成怪味“酸奶”，其原因可能是__________。

（二）科学家用转基因方法培育“巨型小鼠”。图1为含大鼠生长激素基因的DNA及限制酶切割位点示意图；图2为含有相应标记基因和限制酶切割位点的质粒示意图，其中nptII为卡那霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关。图3是转基因过程中的一个步骤。

（1）根据图1，在获得目的基因时，应使用限制酶__________（PvuⅠ / EcoRⅠ）进行切割。可以选择图2中的质粒__________（A / B）作为目的基因的载体，理由是__________。

（2）图3表示基因工程中将重组DNA分子导入受体细胞的过程，该步骤采用的技术方法是__________，通常选择__________作为受体细胞。

（3）获得含目的基因的细胞后，该细胞需要进行__________。然后再进行移植，通常移植最适宜的时期是发育到__________（A．2细胞胚胎 B．4细胞胚胎 C．早期囊胚 D．原肠胚）。再经分娩产仔就可以获得“巨型小鼠”。

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某同学用新鲜酸奶为实验材料初步分离纯化乳酸菌．分离纯化所用固体培养基中因含有15%的脱脂乳而不透明，乳酸菌能分解利用培养基中的蛋白质等物质．回答下列问题

（1）培养基的组成成分除乳酸菌生长繁殖所需的营养物质外，还必须添加_____．

（2）推测培养基中加入脱脂乳的作用是_____，_____．

（3）分离纯化如果用稀释涂布平板法，梯度稀释时应该用_____对酸奶进行稀释．

（4）分离纯化如果用平板划线法，首次划线灼烧接种环的目的是_____，为保证得到单个细菌繁殖而来的菌落，操作时必须做到①_____；③从第二次开始_____．

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血红蛋白是人和其他脊椎动物负责血液中O2或CO2运输的蛋白质。请回答以下有关问题：

（1）蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步，凝胶色谱法一般用于____________这一步，凝胶色谱法是____________的有效方法；所用凝胶的化学本质大多为____________。

（2）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的___________________、大小及形状不同，在电场中的____________不同而实现分离。

（3）血红蛋白是一种含铁的蛋白质，它存在于____________中。若要根据某人血红蛋白的含量数据来判断其健康状况，则体检时____________（选填“要”或“不要”）空腹做____________。若某人患有慢性贫血，则体检单上会显示血红蛋白含量____________。

（4）人口腔上皮细胞中____________（选填“含有”或“不含有”）血红蛋白，____________（选填“含有”或“不含有”）控制血红蛋白合成的基因，判断是否含有该基因的依据是____________。

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酸奶、泡菜的制作都离不开乳酸菌，其代谢产物乳酸菌素（小分子蛋白质）和柚皮中的柚皮精油均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌，分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，分离纯化时应挑选出_____________的菌落作为候选菌。若用稀释涂布平板法统计单位体积泡菜液中乳酸菌的数量，统计的菌落数往往比活菌的实际数目______，原因是_________________________________________________。

（2）通常不用水中蒸馏法提取柚皮精油，是因为_________________________________________，该过程得到的糊状液体可通过__________初步除去其中的固体物和残渣。

（3）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的____________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

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以下是制作酸奶的生物化学过程：将适宜的菌种接种到牛奶中，产生的乳酸使牛奶蛋白凝聚形成浓稠的酸奶。酸奶的发酵剂中含有大体等量的两种细菌（保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）。保加利亚乳杆菌在无氧条件下分解牛奶中的乳糖产生乳酸，还产生多肽酶，将牛奶蛋白分解成多肽和氨基酸；这些反应会刺激嗜热链球菌生长，产生二氧化碳和甲酸，使得发酵液的pH降低，这又会促进保加利亚乳杆菌的生长和代谢。

（1）用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是________，以保证接种后的正常发酵；操作者的双手需进行清洁和__________；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法_______杀灭，也可以用化学试剂____________（列出两种）进行消毒。

（2）牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为______________________________。

（3）发酵剂中的两种细菌之间的关系属于______________。

（4）包装的酸奶在2～4℃下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死

细菌这是因为用于酸奶发酵的两种微生物_____________，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。

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酸奶因营养丰富和口感美味而深受大众喜爱，且含有活性乳酸菌，对身体大有益处。常见的乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。现采用如下步骤对酸奶中的乳酸菌进行筛选、分离：

酸奶→选择适宜稀释度→涂布MRS琼脂培养基→适宜温度培养→挑取单个菌落→接种于MRS琼脂平板或MC琼脂平板→菌种鉴定→接种MRS液体培养基→菌种保藏

请回答下列有关问题：

（1）制备MRS琼脂培养基时，采用__________法灭菌 15 ～20 min。

（2）倒平板操作时，应在_________________附近进行，待平板冷凝后将平板倒置的目的是_________________。

（3）制备稀释液时，先将酸奶样品充分摇匀，以无菌吸管吸取样品_____ mL放入装有225 mL无菌水锥形瓶中，充分振荡，制成1∶10的样品液。

（4）培养一段时间后，从MRS固体培养基上挑多个单菌落，使用____________法接种于 MC琼脂平板或MRS琼脂平板上，于36℃±1 ℃ ________（填“厌氧”或“好氧”）条件下倒置培养48 h后，再挑取单个菌落进行菌种鉴定。

（5）菌种鉴定后将其接种至MRS液体培养基的目的是________。将得到的纯菌株进行长期保藏，可采用___________的方法。

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