某同学用新鲜酸奶为实验材料初步分离纯化乳酸菌．分离纯化所用固体培养基中因含有15%的脱脂乳...

某同学用新鲜酸奶为实验材料初步分离纯化乳酸菌．分离纯化所用固体培养基中因含有15%的脱脂乳而不透明，乳酸菌能分解利用培养基中的蛋白质等物质．回答下列问题

（1）培养基的组成成分除乳酸菌生长繁殖所需的营养物质外，还必须添加_____．

（2）推测培养基中加入脱脂乳的作用是_____，_____．

（3）分离纯化如果用稀释涂布平板法，梯度稀释时应该用_____对酸奶进行稀释．

（4）分离纯化如果用平板划线法，首次划线灼烧接种环的目的是_____，为保证得到单个细菌繁殖而来的菌落，操作时必须做到①_____；③从第二次开始_____．

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）某同学用新鲜的泡菜汁为实验材料分离纯化出乳酸菌，用来生产酸奶。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________对泡菜汁进行梯度稀释，然后采用__________法进行分离，可获得乳酸菌的单菌落。

（2）推测分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有__________和__________。分离纯化时应挑选出__________的菌落作为候选菌。

（3）获得纯化的乳酸菌后，可以利用纯牛奶作为原料制作酸奶，发酵常在__________（A．有氧+常温 B．无氧+常温 C．有氧+低温 D．无氧+低温）条件下进行。如果使用的是加了某些抗生素的纯牛奶作原料制酸奶，很有可能会发酵成怪味“酸奶”，其原因可能是__________。

（二）科学家用转基因方法培育“巨型小鼠”。图1为含大鼠生长激素基因的DNA及限制酶切割位点示意图；图2为含有相应标记基因和限制酶切割位点的质粒示意图，其中nptII为卡那霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关。图3是转基因过程中的一个步骤。

（1）根据图1，在获得目的基因时，应使用限制酶__________（PvuⅠ / EcoRⅠ）进行切割。可以选择图2中的质粒__________（A / B）作为目的基因的载体，理由是__________。

（2）图3表示基因工程中将重组DNA分子导入受体细胞的过程，该步骤采用的技术方法是__________，通常选择__________作为受体细胞。

（3）获得含目的基因的细胞后，该细胞需要进行__________。然后再进行移植，通常移植最适宜的时期是发育到__________（A．2细胞胚胎 B．4细胞胚胎 C．早期囊胚 D．原肠胚）。再经分娩产仔就可以获得“巨型小鼠”。

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某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用_________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_________________。

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_________________和_________________。分离纯化时应挑选出_________________的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌在-20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。

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某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用_________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是______________。

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有______________和_______________。分离纯化时应挑选出_________________的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌在-20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。

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某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸菌能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用_________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_________________。

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_________________和_________________。分离纯化时应挑选出_________________的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌在-20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。

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酸奶、泡菜的制作都离不开乳酸菌，其代谢产物乳酸菌素（小分子蛋白质）和柚皮中的柚皮精油均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌，分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，分离纯化时应挑选出_____________的菌落作为候选菌。若用稀释涂布平板法统计单位体积泡菜液中乳酸菌的数量，统计的菌落数往往比活菌的实际数目______，原因是_________________________________________________。

（2）通常不用水中蒸馏法提取柚皮精油，是因为_________________________________________，该过程得到的糊状液体可通过__________初步除去其中的固体物和残渣。

（3）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的____________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

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某同学用新鲜的果醋为实验材料分离纯化醋酸菌。分离纯化用的固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，醋酸菌产生的醋酸能够溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）醋酸菌是一种好氧细菌，当氧气充足时，醋酸菌能够将乙醇变为_______、最终变为醋酸，醋酸菌在变酸的酒的表面大量繁殖会形成______________。

（2）分离纯化醋酸菌时，首先让新鲜果醋经过滤膜，如图甲所示，图中滤膜的孔径应_______（填“大于”或“小于”）醋酸菌，将滤膜贴于醋酸菌的分离培养基上，培养一段时间，观察菌落形态和透明圈大小。

（3）图乙两个平板中能够表现该方法得到的培养结果的是图_____，经观察发现，在平板上不同菌落的形态和透明圈大小都存在明显差异原因是___________。

（4）为获得产酸能力强的醋酸菌，应选择透明圈_______（填“大”或“小”）的菌落进行进一步的分离纯化操作。此时可以用________挑取部分菌株，在固体培养基上进行连续划线操作。

（5）由于研究的醋酸菌带有一定的未知性，因此要注意进行规范的无菌操作，实验后一定要洗手，目的是防止___________________。

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不同品牌的酸奶具有不同的口味，某研究小组利用含碳酸钙的固体培养基探究甲、乙品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同（乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明）。请回问题：

（1）将甲、乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化，分别接种在含碳酸钙的固体培养基中培养，相据菌落周围____________可确定酸奶中乳酸菌的类型，原理是____________。

（2）家庭制作酸奶时，在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的____________操作，纯牛奶变成酸奶，改变了口味但含有的能量减少，原因是____________。

（3）为长期保存纯化的优质乳酸菌，可将菌液与____________充分混匀，置于-20℃的冷冻箱中保存。

（4）该研究小组用稀释涂布平板法进一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌数量，在实验时需要做A、B、C三个平板，目的是____________，如果平板菌落数超过300，一般还需进一步____________。

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乳酸是一种重要的多用途有机酸。为得到高产乳酸的菌种并降低其培养成本，科学家利用辣白菜为材料进行了如下筛选纯化过程：

（1）配制培养基:基础液体培养基中需含有细菌生长必须的___________，分离液体培养基是在基础培养基的基础上加入0.lg/L溴甲酚紫（酸碱指示剂，酸性条件下变黄），分离固体平板是在液体培养基的基础上加入CaCO3和___________。

（2）菌种筛选纯化:取适量辣白菜放入30ml___________，充分震荡后，取1ml上淸液加入到液体培养基中，37℃培养24h，选取发酵液颜色___________的样品，经稀释后采用___________方法接种到固体平板上继续培养，挑取___________的单菌落接种到基础液体培养基中，得到纯种。

（3）用以上方法筛选纯化得到的菌种的异化作用类型是___________，理由是______________________。

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不同品牌的酸奶具有不同的口味。某研究小组利用含碳酸钙的固体培养基探究甲，乙两品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同(乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明)。请回答下列问题:

（1）将甲、乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化，分别接种在含碳酸钙的固体培养基中培养，根据菌落周围透明圈的大小，可确定酸奶中乳酸菌的类型。不同乳酸菌菌落透明圈大小不同的原因是_________________________________________________________

（2）家庭制作酸奶时，在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的________操作。 纯牛奶变成酸奶，改变了口味但含有的能量减少，原因是____________________________。

（3）为长期保存纯化的优质乳酸菌，可将菌液与________充分混匀，置于20C的冷冻箱中保存。

（4）该研究小组进一步探究甲 品牌酸奶中乳酸菌数量，实验操作如下图。接种微生物的方法有很多，图中过程①②③所示的方法为_____________用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10后，才可表示乳酸菌的数量(单位:个/ml), 这里的n=______用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个平板，目的是________________________如果平板菌落数超过300，一般还需进一步_____

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