1985年Smith建立了噬菌体展示技术，科学家们利用这项技术，按照基因工程的原理，将控制...

1985年Smith建立了噬菌体展示技术，科学家们利用这项技术，按照基因工程的原理，将控制抗体某片段合成的DNA序列插入噬菌体DNA的特定部位，使培养所得的噬菌体表面带有抗体片段，这些噬菌体既可以特异识别抗原，又能感染宿主菌进行再扩增。回答下列问题：

（1）实施这项技术，首先需从外周血、脾或淋巴结等部位分离出________（填“B”、“T”或“体”）细胞，提取其总mRNA再经逆转录获得________。

（2）噬菌体DNA的某启动子和终止子之间有限制酶A和B的酶切位点，实施这项技术过程中需将相应DNA序列插入其中，而相应DNA序列中不含有上述两种酶的酶切位点，因此利用________技术扩增相应DNA序列时，需对两个引物的序列稍加修改，使扩增产物具有________，从而有助于扩增所得的相应DNA序列与噬菌体DNA定向连接。

（3）经一定程序培养得到噬菌体后，可以利用________方法对其进行筛选，以获得表面带有特定抗体片段的噬菌体。

（4）对带有特定抗体片段的噬菌体进行克隆化培养时，________ （填“需要”或“不需要”）利用CaCl2处理细菌，理由是________。

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为临床检测肿瘤坏死因子（TNF-α )，利用“噬菌体展示技术”获得TNF-α抗体，需要获得TNF-α抗体的基因片段，插入到噬菌体基因组中，经过筛选得到能正确表达TNF-α抗体的噬菌体，进行大量扩增。下列相关叙述不正确的是 （　　 ）

A. 将TNF-α抗体的基因片段与噬菌体DNA重组需用限制酶和DNA连接酶

B. 在细菌体内，噬菌体以自身氨基酸为原料合成TNF-α抗体

C. TNF-α抗体随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面

D. 噬菌体通过侵染细菌繁殖，增殖速度快，更容易快速获得抗体

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噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随噬菌体外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白或多肽随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。利用该技术可以获得单克隆抗体(最新技术）。请问答下列问题：

（1）传统单克隆抗体的获得需先对小鼠进行_______处理，整个过程中涉及的现代科学技术有________。

（2）外源DNA片段含_________个游离的磷酸。为了得到大量的外源DNA，可使用PCR技术进行体外扩增，合成引物________(填“需要”或“不需耍”)知道整个外源DNA序列，合成的引物间不能进行碱基互补配对的原因是________________。

（3）噬菌体展示技术获得的抗体还可用于定量检测抗原，如双抗体夹心法，具体原理如下图所示：

分析上图可知，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体可与同一抗原表面的______结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是__________，可通过测定产物量来推测抗原量。

（4）试说说噬菌体展示技术可能的局限性:_______________________。

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有关PCR技术的说法，不正确的是（    ）

A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B．PCR技术的原理是体外模拟DNA的复制

C．利用PCR技术获取目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列已知

D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

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利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述正确的有(　　)

A. 用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

B. 设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连

C. 退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物

D. 第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为15/16

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利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是

A. 用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

B. 设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连

C. 退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物

D. 第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比率为15/16

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利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是

A. 用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

B. 设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连

C. 退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物

D. 第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比率为15/16

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有关PCR技术的说法，不正确的是

A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B．PCR技术的原理是DNA双链复制

C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

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科学家将体外扩増的人抗体基因片段插入噬菌体DNA,用该噬菌体侵染大肠杆菌，人抗体基因与噬菌体基因一起表达，形成融合蛋白，出现在子代噬菌体表面，再通过筛选可得到噬菌体抗体，该抗体可用于肿瘤的诊断与治疗。回答下列问题：

（1）获得人抗体基因的途径之一是从____________细胞中提取mRNA，通过____________获取cDNA。

（2）cDNA可通过____技术扩增，在反应体系中除了加入模板DNA、酶和引物外，还应加入____________作为合成DNA的原料。这一过程____________（填“需要”或“不需要”）加入解旋酶。

（3）在制备噬菌体抗体的过程中，应选用具有多个____________切割位点的噬菌体为材料，便于抗体基因片段的插入。所用大肠杆菌不需要用Ca2+处理的原因是________________________。

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下列属于基因的是(　 )

A.控制抗体合成的DNA片段

B.组成DNA的4种脱氧核苷酸及其序列

C.组成染色体的主要化学成分

D.含有编码淀粉酶遗传信息的DNA分子

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