［生物—选修1：生物技术实践］（15分）大肠杆菌是人和许多动物肠道中的主要细菌，若水中大肠...

［生物—选修1：生物技术实践］（15分）大肠杆菌是人和许多动物肠道中的主要细菌，若水中大肠杆菌超标，说明水源可能被粪便污染。伊红美蓝培养基可用于检测水中大肠杆菌的数量。回答下列问题：

（1）伊红美蓝培养基含有大肠杆菌生长繁殖必须的　 　　 　 四类营养物质，大肠杆菌的代谢产物会和伊红、美蓝发生反应，使菌落呈现　 　　 　 色。伊红美蓝培养基属于 　　 　　 （填“选择”或“鉴别”）培养基。

（2）某水样的大肠杆菌严重超标，需采用稀释涂布平板法统计样品中活菌数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的　　 。一般选择菌落数在　 　　 　 的平板进行计数，这样统计的菌落数　 　　 　 （填“大于”、“等于”或“小于”）活菌的实际数目。

（3）用大剂量紫外线照射大肠杆菌，获得了变异菌株，这种变异来源于　 　　 　 。利用平板划线法对该变异菌株进行纯化，在第二次以及其后的划线操作时，菌体来自　 　　 　 。

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大肠杆菌含有 2000 种以上的蛋白质，是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

(1)在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有______。

(2)通过滤膜法（自来水过滤后的滤膜置于伊红-美蓝培养基中，再进行计数）可以测定自来水中大肠杆菌的数目，伊红-美蓝培养基的主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液，蛋白胨的作用有___________。（写两点），这种测定方法的主要原理是______，在实验接种前通常需要检测固体培养基______ （填是否）灭菌合格。

(3)大肠杆菌在_______中合成蛋白质，利用______分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质。

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【生物——选修1：生物技术实践】

大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。下面是其培养基配方：

回答下列问题：

（1）该培养基中，蛋白胨为大肠杆菌提供的主要营养有________________和维生素。从物理性质来看，该培养基属于____________培养基。

（2）对该培养基进行灭菌时，可采用_____________法。在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，其目的是_______________。

（3）为检测严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为_____________的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是_________________________________。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmOl/L的________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是______________蛋白质。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤 膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____(填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____(答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是______。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _______(填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是___。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的_____到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红-美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____ (填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____ (答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是_____。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _____ (填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是________。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7．0、浓度为20mmol/L的_______________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_______蛋白质。

（2）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是____________________________。

（3）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用_______________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和_____________。

③某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_____；

④滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是______。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的___________ 到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____蛋白质。

（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有 _________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和高压蒸汽灭菌。配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min，原因是__________。接种前通常需要检测固体培养基是否灭菌合格，检测方法是___________。

③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_______________。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质。回答下列问题：

（1）大肠杆菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基为大肠杆菌的生长提供____________。培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是___________。

（2）利用平板划线法纯化大肠杆菌时，通过接种环在培养基表面连续划线，将聚集的菌种________分散到培养基的表面；长期保存纯化后的菌种，可以采用_______的方法。稀释涂布平板法是根据培养基上的菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_________________________________。

（3）利用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质过程如图一，正确的加样顺序是______________。图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是_____。

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大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。某生物科技小组的同学拟对某地严重污染的水体中细菌种类、大肠杆菌数目进行调查，实验及流程如下：

实验一：滤膜法测定大肠杆菌数目：

用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。

实验二：大肠杆菌的培养和分离：

配制培养基→灭菌→扩大培养→划线分离和培养→菌种保存。

回答下列问题：

（1）实验一中，过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，通过________方法进行灭菌处理。统计大肠杆菌菌落时应选择颜色为________的菌落进行计数。

（2）实验二中，“划线分离和培养”前应对样品进行________，这样，“划线分离和培养”过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是纯化菌种的常用方法。

（3）实验一和实验二中均用到固体培养基，配制培养基过程中，除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持培养基的________。获得纯净培养物的关键是________，所以对所用培养基均需进行灭菌处理，为检测灭菌是否彻底，应进行的操作是________________________；一般对所需菌种长期保存可采用________的方法。

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【生物——选修1:生物技术实践】

我国东晋医药学家葛洪在《肘后备急方》中首次记载了用人粪治疗食物中毒和严重腹泻的医案。现代医学也采用粪便菌群移植疗法即把经过处理的健康人的粪便液送入患者肠道中重建患者的肠道微生物环境以帮助病人康复。回答下列问题：

（1）将人粪稀释液接种于一定培养基可筛选出特定菌种，接种前要对培养基进行_______处理，常用的接种方法是稀释涂布平板法和______________。

（2）医学实验室制取的健康人的粪便混悬液可供医疗使用，某兴趣小组欲利用固体培养基鉴定粪便混悬液中含有大肠杆菌活菌并进行计数，需向培养基中加入_____________染料，理论上他们的统计值要比实际值________________（填“偏高”“低”或“相等），原因是_________________________________。

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