胚胎干细胞（ES细胞）介导法是转基因动物培育的途径之一，请据下图绿色荧光蛋白老鼠的培育流程...

胚胎干细胞（ES细胞）介导法是转基因动物培育的途径之一，请据下图绿色荧光蛋白老鼠的培育流程回答相关问题：

（1）胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，在形态上，表现为_________，在体外培养的条件下具有__________的特点。

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，此过程中常用到的酶是__________。将修饰后的绿色荧光蛋白基因导人ES细胞常采用的方法是__________；培养过程中，ES细胞所需的气体主要有02和C02，其中02是__________，C02用来维持培养液的pH值。

（3）为检测ES细胞的染色体上是否含有绿色荧光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是__________；图中④过程中要将含外源基因的ES细胞导人囊胚的__________。将得到的重组胚胎导入⑤体内，其存活的基础是__________。

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科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因表达就会使细胞带有绿色荧光的，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如下图。请回答：

（1）在步骤①中，若绿色荧光蛋白(GFP)基因是cDNA片段，则在GFP基因的上游必须加入_____________，该核苷酸序列是_____________酶识别和结合的部位。

（2）步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的_______________分离得到。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为_______________。

（3）为获取更多卵母细胞，首先要对供体母鼠注射促性腺激素，使其____________，然后可用人工方法从小鼠输卵管内获得，该过程称为__________________。

（4）图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有_______________，再通过_________________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

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科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

（1）在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入_________，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。

（2）步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的_________中分离得到。对其进行的初次培养称为__________，在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为___________。

（3）图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有____________，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

（4）该小鼠诞生过程中涉及到的现代生物技术主要有:______________________。(至少答出3项）

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（12分）胚胎干细胞介导法（转基因动物培育的途径之一），即将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎，参与宿主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到种系嵌合。下图是实验过程示意图，请分析回答下列问题：

（1）胚胎干细胞（ES细胞）体外培养时需要在________条件下进行，由于人们对细胞所需营养物质还没有搞清楚，因此在使用合成培养基培养细胞时需加入________。

（2）图中②表示导入________时期的胚胎。生成嵌合体小鼠④，外源DNA转染的ES细胞产生的变异类型属于________。构建外源DNA分子所用的限制性内切酶、DNA连接酶分别作用于图中的________（a、b）处。

（3）1984年我国第一例转生长激素基因的鱼诞生，但鱼类易于逃逸、扩散，会引起生态安全性问题，试分析原因：。

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下图是转基因小鼠的培育过程示意图，是绿色荧光蛋白基因，请分析回答:

（1）过程①需要用到　　　　 酶。过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是　　　　　　　　　　 。培养胚胎干细胞的培养液中除加人各种营养物质外，通常还需加入　　　　　　 。

（2）表达载体包含绿色荧光蛋白基因、　　　　　　 、　　　　　　 、终止子和复制原点等。

（3）自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或　　　　　　 中分离出来的一类细胞胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，细胞核仁明显;在功能上具有　　　　 性。

（4）图中载体上的基因是B抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是B抗生素（对细胞有毒害作用），培养液添加G418的目的是　　　　　　 。

（5）图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的　　　　　　 位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是　　　　　　　　 。

（6）检测目的基因是否翻译成蛋白质，可从小鼠c体内提取蛋白质，用　　　　 杂交的方法加以检测。

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胚胎干细胞介导法(转基因动物培育的途径之一)的主要操作过程是：将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与宿主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到种系嵌合。下列是实验过程示意图，有关分析不正确的是

A．①的培养基中需加入动物血液，并保持无菌、温度适宜、营养充足

B．与②相比，③的培养基中应加入有筛选作用的物质

C．产生的嵌合体小鼠通过杂交可以获得纯合体转基因小鼠

D．外源DNA导入的ES细胞产生的变异类型属于基因重组

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转基因技术的应用大大提高了动植物的品质，下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪培育示意图，据图和材料回答下列问题：

(1)过程①需要的工具酶有________。绿色荧光蛋白基因需要导入到成纤维细胞的____上才有可能培育出绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

(2)猪胎儿成纤维细胞培养过程中，为了防止培养过程中的污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的____。

(3)通过过程⑤将早期胚胎移植到受体母猪体内能存活的原因是____。

(4)若是想在短期内获得更多的相同的绿色荧光蛋白转基因克隆猪该如何做？ _____________

(5)科学家将反义F3H序列导入到康乃馨中，降低了植株中F3H基因的表达量和酶活性，封锁了花青素合成途径，获得花香物质苯甲酸的释放量大大增加的转基因康乃馨。以上说明目的基因除了编码蛋白质的基因外，还可以是____。将目的基因导入植物细胞常用的方法是____　　 。

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转基因技术的应用大大提高了动植物的品质，下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪培育示意图，据图和材料回答下列问题：

(1)过程①需要的工具酶有________。绿色荧光蛋白基因需要导入到成纤维细胞的____上才有可能培育出绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

(2)猪胎儿成纤维细胞培养过程中，为了防止培养过程中的污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的____。

(3)通过过程⑤将早期胚胎移植到受体母猪体内能存活的原因是____。

(4)若是想在短期内获得更多的相同的绿色荧光蛋白转基因克隆猪该如何做？ _____________

(5)科学家将反义F3H序列导入到康乃馨中，降低了植株中F3H基因的表达量和酶活性，封锁了花青素合成途径，获得花香物质苯甲酸的释放量大大增加的转基因康乃馨。以上说明目的基因除了编码蛋白质的基因外，还可以是____。将目的基因导入植物细胞常用的方法是____　　 。

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转基因技术的应用大大提高了动植物的品质，下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪培育示意图，据图和材料回答下列问题：

(1)过程①需要的工具酶有________。绿色荧光蛋白基因需要导入到成纤维细胞的____上才有可能培育出绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

(2)猪胎儿成纤维细胞培养过程中，为了防止培养过程中的污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的____。

(3)通过过程⑤将早期胚胎移植到受体母猪体内能存活的原因是____。

(4)若是想在短期内获得更多的相同的绿色荧光蛋白转基因克隆猪该如何做？ _____________

(5)科学家将反义F3H序列导入到康乃馨中，降低了植株中F3H基因的表达量和酶活性，封锁了花青素合成途径，获得花香物质苯甲酸的释放量大大增加的转基因康乃馨。以上说明目的基因除了编码蛋白质的基因外，还可以是____。将目的基因导入植物细胞常用的方法是____　　 。

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（10分）科学家从129品系小鼠中成功分离出胚胎干细胞，并注入小鼠的囊胚，形成嵌合体囊胚，育出嵌合体小鼠。利用该技术，可获得表达绿色荧光蛋白（ GFP）转基因昆明（KM）小鼠，操作流程图如下，请回答：

（1）在基因工程的操作中，携带GFP基因 的病毒作为　　　　　　　　 。

（2）步骤②中，利用荧光显微镜观察到细胞　　　　　　　　 ，将其取出，进行扩增培养。

（3）步骤③中，胚胎的收集方法称为　　　　　　　　 。

（4）步骤⑤中，胚胎干细胞可以　　　　　　 形成包括生殖腺在内的各种组织。

（5）图中X小鼠为　　　　　 小鼠。

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