（10分）研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达。该工...

（10分）研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达。该工程技术基本流程如下图（EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞）。请回答：

（1）过程①中，需利用　　 限制酶处理表达载体1。

（2）过程②中，常采用　　 技术将表达载体2成功导入受体细胞。

（3）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的　　 ，以防污染。

（4）在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的　　 （mRNA/DNA），利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。

（5）据实验结果推测，猪bmp15基因在　　 细胞特异性表达。

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科学家利用生物工程技术，探究猪骨形态发生蛋白15(bmP15)基因具有表达特异性和示踪干细胞诱导分化为类卵母细胞的潜能。通过扩增猪bmP15基因的启动子片段与增强型绿色荧光蛋白（EGFP)基因构建表达载体，该工程技术基本流程如下图。请回答下列问题：

（1）利用___________技术扩增bmP15基因的启动子片段的前提，是要有一段已知核苷酸序列，以便合成__________。

（2）过程①中，应先用限制酶________________处理表达载体1,以便插入bmP15基因的启动子构建表达载体2。

（3）过程②中，常采用___________技术将表达载体2成功导入受体细胞。

（4）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的___________，以防污染；还需通入一定浓度的C02,目的是_________________。

（5）在实验结果的基础上，利用标记的_______基因作探针，与猪羊水干细胞的mRNA进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。

（6）实验说明，bmP15基因启动子调控下EGFP基因在____________细胞表达。

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现代生物科技专题

肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。

请回答：

（１）进行过程①时，需用　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　　　。

（２）进行过程②时，需用　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

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(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。

请回答：

(1)进行过程①时，需用　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　________。

(2)进行过程②时，需用　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取　　　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中　　　　(选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。

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狂犬病的病原体为RNA病毒,其表面的G蛋白可作为主要抗原用于制备狂犬病疫苗。研究人员利用生物工程技术培育出转G基因番茄,实现G蛋白的大量生产。其基本技术流程如下图。请回答:

病毒RNAMG基因G基因表达载体番茄细胞N胚状体转基因番茄

(1)图中,过程①称为　　 ;过程②采用最多的方法是　　　　　 。

(2)图中,N称为　　 ;过程③称为　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)食用G基因已有效表达的转基因番茄果实　　 (能/不能)预防狂犬病。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：

（1）进行过程①时，需用相关酶切开载体以插入let-7基因，该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为___________，同时，重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。

（2）进行过程②时，当细胞生长到表面___________时，需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。

（3）研究发现，let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析，肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________含量减少引起的，作出该假设的依据是_________________________。

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肺细胞中的let﹣7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let﹣7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图1．

请回答：

（1）进行过程①时，需用　　　　 酶切开载体以插入let﹣7基因．载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let﹣7基因转录，该部位称为　　　　 ．

（2）进行过程②时，需用　　　　 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养．

（3）研究发现，let﹣7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞提取　　　　 进行分子杂交，以直接检测let﹣7基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　　 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的．

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人肺细胞中的let -7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let -7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图：

请回答：

(1)理论上，基因组文库含有生物的_______基因；而cDNA文库中含有生物的_______基因。

(2)进行过程①时，需用__________酶切开载体以插入let -7基因；载体应含有启动子序列，该序列的作用为__________；有时候被切开的载体并没有插入let -7基因而形成空载的载体，此时可用含有_______序列的引物对载体进行PCR扩增，并通过检测扩增产物来筛选出重组载体。

(3)图中对肺癌组织块的处理应是__________，进行过程②时，需用胰蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞以避免出现_________现象，从而有利于传代培养。

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肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

(1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg²⁺)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为________。

(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取________进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中________(RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。

(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为________。

(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为________的片段。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该技术基本流程如图１。

（１）进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为________。

（２）进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取________进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中________（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

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