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【生物-选修3：现代生物科技专题】已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列，编码β-半乳糖苷酶的α肽。而宿主细胞含有IacZ+的突变基因，其产物无β-半乳糖苷酶活性，但遇α肽，可发生α-互补作用，产生有活性的酶，使培养基中的无色物质X-Gal分解，菌落呈蓝色；若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中，失去α-互补作用（注：宿主细胞菌落为白色）。图甲为pUC质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，tctR为四环素抗性基因，P为启动子、T为终止子，ori为复制原点。图乙表示目的基因的两端分别有EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。为获得目的菌株，请分析回答下列问题：
（1）为快速筛选目的基因，应将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用 酶切，酶切产物用 进行连接后将得到的混合物直接导入受体菌中，培养受体菌有的未被转化（用A表示），有的被转化，被转化的菌株有三种（B含环化目的基因的菌株 C含质粒载体的菌株 D含插入了目的基因的重组质粒的菌株）。
（2）为筛选出插入了目的基因的菌株，需要将宿主细胞接种在含有 的培养基中。
（3）在培养基中，不能生长的菌株为 ；产生蓝色菌落的菌株为 ；产生白色菌落的菌株为 （请用（1）中的A、B、C、D字母作答）。
（4）基因工程中除质粒作为基因载体外，还可用动植物病毒和 。
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【生物—选修3：现代生物科技专题】下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：
（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有_________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。
（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了____________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。
（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。
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【生物—选修3：现代生物科技专题】下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：
（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有_________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。
（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了____________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。
（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。
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研究发现，M限制酶在大肠杆菌PUC18质粒(含氨苄青霉素抗性基因)的IacZ基因上存在唯一的酶切位点，如果IacZ基因没有插入外源基因，便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Ⅹ-gal时，β-半乳糖苷酶能将Ⅹ-gal水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落，反之，则形成白色菌落。回答下列问题：
(1)已获得的目的基因可利用___________技术进行扩增，与体內DNA复制相比较，该反应要在___________中才能进行，并且要严格控制___________条件。
(2)构建重组质粒的过程中，需要用到的酶有___________。大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理，目的是______________________。
(3)在选择培养基上加入IPTG、X-gal和氨苄青霉素，其巾氨苄青霉素的作用是筛选出____________。与“氨苄青霉素”筛选相比，“蓝白斑”筛选的优点是___________。若要挑取已导入目的基因的大肠杆菌，应选取___________色菌落。
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【生物一一选修3:现代生物科技专题】基因疫苗是指编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划利用基因疫苗，通过基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
(1)基因表达软体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、_______、标记基因等。
(2)动物基因工程常用的受体细胞是___________，因为该细胞的全能性高，一般用______法将目的基因导入受体细胞。
(3)欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检的方法及结果是从转基因牛中提取________，用_______杂交，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白，如果不出现杂交带，表明奶牛中未出现抗原蛋白。
(4)胚胎工程最后一道工序处胚胎移植，其实效是___________ 。
(5)为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用什么样的胚胎进行分割___________？
(6)现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用___________技术获得更多具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]
编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。
回答下列问题：
（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列
（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________。
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为_____________________，加入了________________作为合成DNA的原料。
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。
①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是__________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是__________________。
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
上图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、 CCC↓GGG。
（1）图左DNA分子中的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由_______（化学键）连接。
（2）若用限制酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段，其产物长度分为__________________。
（3）为了提高试验成功率，需要通过________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,引物的作用是_______________。若该目的基因扩增n代，则其中含有A、B引物的DNA分子有_______个。
（4）若将图右中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_________。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是______________。
（5）导入目的基因的植物细胞，经过植物组织培养技术得到幼苗，该技术利用的原理是_______________。
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【生物――选修3：现代生物科技专题】(15分，除标明外其余每空2分)请回答下列相关生物工程问题：下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点。图是转基因香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。
（1）香蕉组织细胞具有发育成完整个体的潜能，图中④、⑤依次表示组织培养过程中香
组织细胞的___________________（1分）。培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加_________________等植物激素。
（2）图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是_______。
（3）下图是用_________________(限制）酶进行切割得到的目的基因。可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化。
（4） 从转基因香蕉培育图中反映了质粒作为运载体的特点是_______ ，基因工程中还可以用___________________作为运载体。
（5）人体细胞内含有抑制癌症发生的某基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。该基因含有800对碱基对(bp)，用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp,.用EcoRⅠ再次切割得到100bp,300bp,150bp，50bp,200bp.而患者体内获取的这段基因，用BamHⅠ切割得到的区段变为400bp，400bp ，用EcoRⅠ再次切割得到100bp,300bp,150bp，250bp.在正常人体内BamHⅠ和EcoRⅠ识别序列分别有________个和_____个。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
转基因抗病香蕉的培育过程如图1所示，图2表示PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ四种限制酶的识别序列及酶切位点。请据图回答下列问题：
（1）质粒的化学本质是______________。
（2）利用基因工程培育转基因抗病香蕉的核心步骤是形成重组质粒，即______________；将目的基因导入受体细胞的方法是______________。
（3）将抗病基因从含抗病基因的DNA中切割下来，使用的限制酶是______________，一个质粒被限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ同时切割后得到的DNA片段和黏性末端分别为___________个。请写出单独用ApaⅠ切割质粒后的片段：______________________。
（4）转基因抗病香蕉的培育是否发生了染色体（数目）的变异？______________。卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可以利用含卡那霉素的培养基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞。由此推断，重组质粒中应含有______________基因作为标记基因。
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【生物-选修3：现代生物科技专题】 嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展并得到了以下试验结果，如图。据图回答相关问题：
质粒限制酶酶切图谱
（1）已知BglB基因不含图1中限制酶识别序列。PCR扩增bglB基因时，选用______杆菌基因组DNA作模板，进行扩增的前提是要有一段已知BglB基因的核苷酸序列以便根据这一序列合成___________。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入________和_______两种不同限制酶的识别序列。大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________。
（2）根据2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会________________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（填“50”、“60”、“70”、“80”）℃。
（3）在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高BglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_______（多选）。
A.仅针对BglB基因进行诱变 B.BglB基因产生了定向突变
C.BglB基因可快速累积突变 D.BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
