培养基中含有微生物生长繁殖所需的各种营养成分。分解尿素的细菌的培养基各营养成分如下表所示，...

培养基中含有微生物生长繁殖所需的各种营养成分。分解尿素的细菌的培养基各营养成分如下表所示，请回答下列问题：

（1）根据上表中培养基的成分可推测，其从物理形态上看属于______培养基，从功能上看属于_________培养基，其中为分解尿素的细菌提供碳源的物质是_______。

（2）实验中发现不能分解尿素的微生物不能在该培养基上存活，原因是____。当样品的稀释度足够高时，平板上的菌落数较能准确地反映样品中的______数。

（3）培养过程中若某一组平板上菌落平均数为 56 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，某同学将 50（即 56-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法是否正确？_____________。请说明理由：_____________________ 。

（4）假设在培养过程中，某培养基经紫外线照射后其上的分解尿素的细菌不能正常生长，需添加某种维生素才能恢复生长，请推测最可能的原因是__________：

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如图表示从土壤中分离分解尿素的细菌的实验过程，回答下列有关问题：

（1）该实验中，培养基中除尿素外，还应含有_______________________等营养成分。

（2）实验中为什么要对土壤样品进行稀释？_________________________________________

（3）图中将细菌转移到固体培养基上接种时，可采用的方法是__________________________若将100ml土壤样液稀释105倍，取0.1ml稀释液均匀涂布在培养基表面，测得菌落数的平均值为121个（空白对照组无污染），则原来的100ml样液中含有该细菌_____________个。

（4）如果将此培养基改为用来分离分解纤维素的微生物的培养基，应将培养基的成分做哪些改变？_______________________________________________

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生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为从土壤中微生物筛选到能分解尿素的细菌。培养基成分如下表所示，实验步骤如图1所示。回答下列问题

（1）分解尿素的细菌能分泌________酶，能将尿素分解成__________。

（2）培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自________和_________。为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，在培养时应采用的操作方法是_______________________________。

（3）图中将细菌转到固体培养基上时，应采用________法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH_______（降低/不变/升高），说明该菌种能够分解尿素。

（4）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。有同学认为造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染。为了证实该说法，则进一步实验的操作思路是________________。

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人们按照各种生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，即液体培养基或固体培养基。下表为一种培养基的配方，试根据表中的成分回答下列问题：

（1）若上述培养基用于植物培养，在培养的初期植物出现萎蔫现象，最可能的原因是_______________。可采用的最简单的有效措施是____________________。若培养一段时间后，检测到培养基中留存的NO3-较少而Ca2+等离子较多，这一现象与细胞膜的____________________功能有关。

（2）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有____________________及特殊生长因子。

（3）分析表中成分发现，此培养基若用于培养微生物，则只能培养的微生物代谢类型是_____________。培养基中含有的营养物质有__________类，分别是_____________________。如果不慎将过量的NaCl加入培养基中，还不想浪费此培养基，则可加入______________________，用于培养金黄色葡萄球菌。

（4）若此培养基用于菌种的鉴定，应该增加的成分是___________。若表中除去Ca（NO3）2、Fe（NO3）2成分，该培养基则可用于培养______________________。

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（一）某同学为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了如下实验。并通过该实验成功筛选出了能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请回答：

（1）制备培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、_____________、分装、加塞、包扎、灭菌等。

（2）“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的_____________。用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因为__________________________。为检测能降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂，若存在，则菌落周围将形成_____________色环带。

（3）图中为将细菌转接到固体培养基上，应采用_____________法进行接种，获得单菌落后继续筛选。

（4）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_____________。

A.高压蒸汽灭菌　　 B.紫外灯照射　　 C.70%的酒精浸泡　　　 D.过滤

（二）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，下图中标注了在某质粒及某DNA片段上相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

（1）根据表中信息，Sau3A Ⅰ在该质粒上有____________个酶切位点。在将图中质粒和目的基因构建成重组质粒进程中，应从表中选爪的两种限制酶是______________________。

（2）若将BamHⅠ酶切的DNA末端与BcIⅠ酶切的DNA末端连接，对于该连接部位（_____）

A.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切开　　　　　　

B.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切开

C.BamHⅠ酶能切开，BcIⅠ酶不能切　　　　

D.BamHⅠ酶不能切开，BcIⅠ酶能切开

（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过_______________酶作用后可形成重组质粒。若将该重组质粒导入大肠杆菌需用_______________处理大肠杆菌，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，应在培养基中添加_______________。

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微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质，并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法，正确的是（　 ）

A．纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的

B．在纤维素分解菌生长的培养基中只需碳源、氮源、水、无机盐即可正常生长

C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利

D．生长因子是微生物生长必需的，而微生物本身合成这些物质的能力往往不足

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传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌(脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前一般需要先_______。平板冷却凝固后一般要_______放置，这样操作的目的是___________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于______________固体培养基上，并加入_________指示剂加以鉴别。平板划线法时在第二次及其后的划线操作时，总是从____________开始划线，原因是_______________。

（3）如何设计实验判断培养基是否被污染？__________________________。

（4）对于频繁使用的菌种，可以采用_____________的方法进行保藏，但该方法具有_______________________________缺点。

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下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

（1）该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为________培养基。该培养基会 抑制其他种类微生物生长，其原因是该培养基______。

（2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成 分是_____，接种时应采用______法，该方法接种培养基后的菌落，不可能是下图中的_______（单选）。

（3）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_______指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_____，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

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生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：

（1）分解尿素的细菌能分泌____________酶，能将尿素分解成_______________。培养基中加入尿素的目的是________________。

（2）培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自__________和________。实验需要振荡培养，原因是______________。转为固体培养时，常采用___________法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体。其中需要灭菌的是_____________(填序号）。

（4）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有__________(填序号）。

①取样不同　 ②培养基污染　 ③操作失误　 ④没有设置对照

（5）以尿素为唯一氮源的培养“目的菌”后，加入________指标剂后变红，说明“目的菌”能分解尿素。

（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24〜48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中___________倍的稀释比较合适。

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土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：

(1)能分解尿素的细菌代谢类型为＿＿，应从富含有机质的土壤表层取土样。

(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用　　　 的培养基进行分离，并加入＿＿＿指示剂进行鉴别。

(3)若取土样5g，应加入＿＿ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要＿＿＿以减少误差。将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用＿＿＿＿将菌液铺平。这种接种方法称为＿＿＿＿。

(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有＿＿＿＿(现象)的菌落数，结果如下表，其中＿＿＿＿倍的稀释比较合适。

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