枇杷食用、药用价值高，但不耐储存和运输。科研人员以枇杷为原料，通过筛选优良酿酒酵母，制备枇...

枇杷食用、药用价值高，但不耐储存和运输。科研人员以枇杷为原料，通过筛选优良酿酒酵母，制备枇杷果酒，实验步骤如下。请回答下列问题：

（1）步骤1：将枇杷果皮和果园土壤匀浆放入三角瓶中，适度稀释后放入YPD液体培养基培养，28℃摇床培养24小时。推测该步骤的主要目的是_____________。

（2）步骤2：将培养好的菌液稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-65个梯度，每个梯度至少设计_________个重复，用________法将0.1ml稀释液接种到TTC平板培养基上，28℃_________（填“静置”或“摇床”）培养2天。经统计，发现稀释梯度为10-5的平板上平均有40个单菌落，由此可计算出每毫升菌液有________个微生物。其中有产酒精能力的酵母在TTC平板上显红色，从用途上来看TTC平板属于________培养基。

（3）步骤3：将筛选出的酿酒酵母经扩大培养后，分别接种到等量的枇杷汁中，密闭培养，每隔2h观察各菌株的___________，筛选出发酵能力强的酿酒酵母。还可根据乙醇与______________试剂反应呈现灰绿色，来检验酒精的产生。

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（2014•河南模拟）聚羟基丁酸酯可被用于制造生物可降解塑料．如图是科研人员用微生物发酵技术以蔗糖为原料生产生物可降解塑料的过程示意图，请据图回答：

（1）制备筛选碱性天然菌种的培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、 倒平板 ．培养基中的蔗糖可以为微生物的生长提供 碳源 ．该培养基除含有微生物所需的各种营养物质外，还应注意调整适宜的 PH ．

（2）为了获得纯净的培养物，实验用的培养基最好选用 高压蒸汽灭菌 法进行灭菌．

（3）为了检测菌液中活菌的数量是否适宜，可以采用 显微镜直接计数（稀释涂布平板法） 法进行计数，该方法计数的结果与实际数目相比 偏大（偏小） （偏大/偏小）．

（4）为使微生物易于从发酵液中分离且达反复使用的目的，可采用 固定化细胞 技术进行处理．该技术通常采用的方法是 包埋法 ．

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聚羟基丁酸酯可被用于制造生物可降解塑料。下图是科研人员用微生物发酵技术以蔗糖为原料生产生物可降解塑料的过程示意图，请据图回答：

(1)制备筛选碱性天然菌种的培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、_________。培养基中的蔗糖可以为微生物的生长提供_________。该培养基除含有微生物所需的各种营养物质外，还应注意调整_________。

(2)为了获得纯净的培养物，实验用的培养基最好选用_________法进行灭菌。

(3)为了检测菌液中活菌的数量是否适宜，可以采用_________法进行计数，该方法计数的结果与实际数目相比_________（偏大／偏小）。

(4)为使微生物易于从发酵液中分离且达到反复使用的目的，可采用___________技术进行处理该技术通常采用的方法是__________。

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人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，实验流程示意图如下图所示。

请回答下列问题：

（1）步骤A是_____________，可以通过此步骤增加__________________________。

（2）研究人员用_____________法筛选纤维素分解菌，这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。培养基中透明圈的大小与纤维素酶的_____________有关。

（3）在涂布平板时，取少量菌液（不超过0.1mL）滴加到培养基表面，菌液量不宜过多的原因是_______________________________________。

（4）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株甲和乙，在不同pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见下表，推测菌株_____________更适合用于人工瘤胃发酵，理由是__________________________。

注：纤维素酶活性用U表示。

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乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖在工业生产中具有重要价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下图。回答下列问题：

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时,培养基中的唯一碳源应该是_____，在实验室培养微生物L时,一方面需要为L提供合适的营养和环境条件,另一方面需要_______,以获得纯净的培养物。

(2)将微生物L研磨破碎得到提取液后,可采用凝胶色谱法分离纯化其中的乳糖酶分离过程中,比乳糖酶相对分子质量小的蛋白质,在凝胶中的移动速度比乳糖酶_____(填“快”或“慢”),原因是______________。

(3)工业生产中,若要将乳糖酶固定化,一般____(填“适宜”或“不适宜”)采用包埋法原因是________,与使用游离酶相比,工业生产中使用固定化酶的优点是________。

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（1）为提高果酒的品质，要筛选得到纯净的酵母菌菌种，通常使用的培养基按功能来分，可称为。

（2）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本操作步骤是：计算、称量、________、灭菌、倒平板。在纯化大肠杆菌时．常用的方法有________和________。

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素，常用的方法是________，提取的胡萝卜素可通过________法进行鉴定，在鉴定过程中需要用________对照。

（4）进行菊花组织培养的基本实验操作步骤是：制备MS固体培养基、________、接种、培养、移栽、栽培．花药离体培养时，选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是

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（15分）

（1）为提高果酒的品质，要筛选得到纯净的酵母菌菌种，通常使用的培养基按功能来分，可称为________。

（2）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本操作步骤是：计算、称量、________、灭菌、倒平板。在纯化大肠杆菌时，常用的方法有________和________。

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素，常用的方法是________，提取的胡萝卜素可通过________法进行鉴定，在鉴定过程中需要用 ________对照。

（4）进行菊花组织培养的基本实验操作步骤是：制备MS固体培养基、、

接种、培养、移栽、栽培。花药离体培养时，选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是________________。

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酿酒酵母不能利用木糖制约了利用植物原料生产乙醇的经济效益。木酮糖激酶是木糖转化、利用的关键酶，为提高酵母细胞中木酮糖激酶的表达量，科研人员将两种启动子与木酮糖激酶基因结合并导入酿酒酵母细胞，构建能同时利用葡萄糖和木糖的重组酿酒酵母。下左图表示相关研究过程，右表是几种限制性内切酶的识别序列及切割位点。请回答：

(1)重组质粒中终止子的作用是____。表中切割DNA后形成相同黏性末端的限制性内切酶是____，黏性末端为____。

(2)过程③使用的限制性内切酶是________。过程⑤需先用LiAc处理酿酒酵母细胞，其目的是__________，使细胞处于能吸收环境中DNA的状态。

(3)结合图示分析，进行工程菌筛选时，在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的酿酒酵母，这是因为____________。

(4)研究人员对筛选得到的两种重组酵母(甲中导入启动子A，乙中导入启动子B)细胞中木酮糖激酶活力及发酵乙醇得率进行比较(发酵条件：1 L 15 g·L－1的葡萄糖和50 g·L－1的木糖培养基中，120 h)结果如下表。

从木酮糖激酶酶活力分析，可以得出的结论是启动子A的功能比启动子B____，但本实验中乙醇得率相差不大，其可能的原因是___________________________________________。

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科研人员通过诱变、筛选获得基因A与基因B突变的酵母菌突变体，它们的蛋白质分泌过程异常，如下图所示。下列叙述正确的是

A. A基因突变体不能完成氨基酸的脱水缩合反应

B. B基因突变体中的蛋白质都呈直线的链状结构

C. A、B基因都突变的细胞蛋白质沉积在高尔基体

D. A、B基因的突变都会影响到细胞膜蛋白的更新

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产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是__________（填编号）。

（2）称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________个。

（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行__________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以__________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径__________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关研究，理由是__________。

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