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CRISPR-Cas9是大肠杆菌等细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，可用来对抗入侵的部分病毒（DNA）及外源DNA．其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。CRISPR--Cas9基因编辑技术是通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可以对目标DNA上几乎任何一个位置进行删除或添加特定的DNA片段，如下图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A.大肠杆菌等细菌细胞内能合成与入侵病毒（DNA）及外源DNA互补的RNA序列
B.识别序列形成杂交区的过程与转录过程的碱基配对方式相同
C.Cas9能专一性破坏双链DNA分子中碱基之间的氢键来切割DNA分子
D.在被切割后的目标DNA中添加特定的DNA片段需要DNA连接酶
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CRISPR—Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA，受此机制启发，科学家们研发了CRISPR—Cas9基因编辑技术，这是一种对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，其原理是由一个向导RNA分子引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的任一目标位点进行切割（见下图）。
（1）CRISPR—Cas9基因编辑复合体中Cas9蛋白是由相应基因指导，在细胞的__________中合成的，其工作原理是特异性的切断目标DNA的_____________（填具体部位）；向导RNA中的识别序列与目标DNA的识别遵循______________原则，该复合体中，决定其在DNA上切割位点的是_______________。
（2）中国科学家从肺癌患者血液中提取某种细胞，利用CRISPR—Cas9基因编辑技术加入一个帮助这种细胞定向清除肿瘤的新基因序列，然后再把这些细胞注入患者的血液，以达到杀死癌细胞的目的。这些细胞应该是人体的___________，这种治疗方法属于__________（填“体内”或“体外”）基因治疗。
（3）分析上述信息可知，CRISPR—Cas9基因编辑技术与早期基因工程相比最明显的优势是___________________________________。
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CRISPR/Cas9系统能参与细菌的免疫防御，对抗入侵的外源DNA。CRISPR/Cas9系统主要包括：Cas9核酸内切酶和sgRNA，在sgRNA引导下，Cas9蛋白在目的基因处进行切割，使DNA双链断裂。CRISPR/Cas9系统切割DNA双链的情景如图所示，下列相关叙述正确的是（ ）
A.Cas9蛋白切断的是氢键
B.Cas9蛋白具有限制酶的作用
C.图中物质有5种碱基配对类型
D.核糖体能合成CRISPR/Cas9系统
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（1）细菌的CRISPR/Cas9系统通过将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR中，并利用相应的CRISPRRNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。
Cas9在基因工程中起到类似于_______（ 填物质）的作用。CRISPR/Cas9 在基因敲除、基因治疗等多方面显示出广阔的应用前景。若要进行基因治疗，首先要获得正常基因，目前比较常用的方法之一是从cDNA文库中获取，但获得的基因与人体内正常基因相比要短，但若要获得的是原核基因则基本相同，原因是___________________。
（2）科学家尝试将某种重组基因导入小鼠体内，以研究该基因的作用机理，常用的导入方法是___________________。目前比较常用的导入对象是小鼠的胚胎干细胞，因为ES细胞在功能上具有________________。经过早期胚胎培养之后获得的胚胎需要经过胚胎移植到_______雌性动物的体内，最终发育成具有新性状的个体。
（3）为了提高胚胎的利用率，科学家选用发育良好的__________进行胚胎分割，在此过程中，需要注意的是______________分割。
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科学家发现细菌细胞中存在清除入侵病毒DNA的功能系统（见下图1），并发明了CRISPR/Cas9基因编辑技术，目前已成为生物科学领域最热门的基因操作技术。下图2 是科研人员运用CRISPR/Cas9基因编辑技术（其中表达载体1的作用是在受体细胞中控制合成CRISPR复合体，表达载体2可以与相应DNA的同源区进行互换、重组），成功地将基因A精确导入到绒山羊细胞内的甲、乙两个基因之间，并和绿色荧光蛋白基因一起表达的过程示意图。请回答。
（1）由图1可知，CRISPR复合体中crRNA的主要功能是________________________，而Cas9蛋白催化断裂的化学键位于____________之间。细菌的这种清除能力的生理意义是________________________。
（2）结合对图1的理解，图2中表达载体1首先要表达出含有________________________序列的crRNA和Cas9蛋白，以结合形成CRISPR复合体。
（3）根据图2，基因表达载体2上需要加入:①基因甲片段、②基因乙片段、③基因A、④绿色荧光蛋白基因等四种DNA片段，这4种片段在载体上的正确排列顺序应是___________（用序号代表相应片段）。在形成重组DNA时需要___________酶参与催化表达载体2与绒山羊DNA的连接。
（4）实验室一般会将重组DNA导入山羊的胚胎干细胞中，以培育、筛选出转基因山羊，选择胚胎干细胞作为受体细胞的主要依据是______________________。
（5）与传统的基因工程相比较，运用CRISPR/Cas9基因编辑技术培育转基因生物的明显优点是_________________________________。
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CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统，用来抵抗外源遗传物质的入侵，当细菌遭受病毒或者外源质粒入侵时，会产生相应的“记忆”，从而可以抵抗它们的再次入侵。CRISPR/Cas系统作用机理如图一所示，图一中的CRISPR位点结构如图二所示，过程③作用如图三所示。请据图回答问题：
（1）图一中，新CRISPR序列中a间隔区的来源是______，图二中CRISPR序列上游的前导区中含有______，以保证CRISPR序列转录的正常进行。
（2）图一中，过程①需要______酶的参与，过程②需要的原料有______。
（3）图三中，向导RNA上的识别序列存在于______（填“tracrRNA”或“crRNA”）上。若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……，则向导RNA相应的识别序列为______。由此推测，tracrRNA、crRNA和Cas9蛋白组装的系统类似于基因工程中的______酶。
（4）原核生物通过CRISPR/Cas系统抵抗外源遗传物质的入侵类似哺乳动物的______（填“初次”或“二次”）免疫。
（5）一对名为露露和娜娜的基因编辑婴儿于2018年11月在中国健康诞生。这对双胞胎的一个CCR5基因经过CRISPR/Cas9敲除，使她们出生后即能天然抵抗艾滋病。这是世界首例免疫艾滋病的基因婴儿，也意味着中国在基因编辑技术用于疾病预防领域实现历史性突破。但这项研究也引起了争议，下列属于该项研究争议的有______（多选）。
A．伦理上的担忧
B．CRISPR/Cas9基因编辑技术存在潜在脱靶效应
C．CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CCR5基因后对其他基因的表达有可能存在影响
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免疫是在长期进化过程中，哺乳动物特别是人体对病原性物质的侵害所形成的特殊防御机制。请回答下列问题：
（1）HIV是具有包膜的________病毒，入侵人体后，引起获得性免疫缺陷综合症 （AIDS）。
（2）请简述HIV病毒在寄主细胞内复制繁殖的过程。
（3）除了AIDS外，还有其他免疫缺陷相关的疾病，这些疾病一般可通过骨髓移植和基因治疗等方法进行部分治疗。
①骨髓移植，其实质是________移植，能替代受损的免疫系统，实现免疫重建。
②基因治疗，取患者的________作为受体细胞，将正常的________转染受体细胞后，再回输体内，以替代、修复或纠正有缺陷的基因。
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CRISPR/Cas系统是细菌在进化过程中形成的一种防御机制。回答下列问题：
（1）Cas蛋白能截取噬菌体DNA片段，并将其插入到细菌自身的CRISPR基因中，此过程需要断开和连接的化学键是__________。
（2）整合有噬菌体DNA片段的CRISPR基因经_______产生RNA，此RNA与Cas蛋白共同构成CRISPR /Cas复合物，在此RNA的引导下，该复合物能定点切割对应的噬菌体DNA片段。由此分析，细菌中CRISPR/Cas系统的生理意义是________。
（3）通过改造此系统，可以实现对DNA的定点切割。在对不同基因进行定点切割时，应使用________（填“相同”或“不同”）的RNA和Cas蛋白构成CRISPR /Cas系统。
（4）科学家利用改造的CRISPR /Cas系统定点破坏绵羊胎儿成纤维细胞中的肌肉生长抑制基因，并用此细胞作为核供体，结合核移植技术，生产出新品种绵羊。
①在核移植时，应选用________期卵母细胞进行去核操作。
②代孕绵羊对移入子宫内的外来胚胎基本不发生________，这为重组胚胎在受体内的存活提供了可能。
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骨缺损治疗是临床工作的一大挑战。骨髓间充质干细胞常用于骨和软骨的再生，但不适合长期培养。科学家基于CRISPR/Cas9同源定向修复（HDR）机制，将永生化癌基因SV40T靶向整合到小鼠Rosa26基因座，建立了永生化的BMSC，使用腺病毒载体转染BMP-9后可以有效地诱导异位成骨。HDR机制的原理是：用单个具有引导作用的sgRNA引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割（图1），DNA双链发生断裂后，在同源模板DNA存在时，通过HDR途径，根据模板供体DNA序列在预定位点精确整合DNA序列（图2）。回答下列问题：
（1）sgRNA之所以能引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割，是因为其序列能与小鼠DNA特定位点（靶位点）进行____________。据此分析，需确定靶位点序列在基因组中唯一性的原因是___________________________。
（2）运用CRISPR/Cas9系统时，可将sgRNA和Cas9mRNA元件导入小鼠的受精卵，使用的方法是____________。还可通过腺病毒将CRISPR系统运送到细胞内，腺病毒能够感染分裂和非分裂细胞，且不会将其DNA整合到宿主细胞基因组中，为基因治疗设计的腺病毒应具备的特点是_______________________（至少答出两点）。
（3）可提取小鼠的基因组DNA作为模板，利用PCR技术检测SV40T基因是否成功整合到小鼠Rosa26基因座中。利用PCR技术扩增目的基因时应使用____________种引物，需要合成引物的原因是__________________。
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CCR5是人体的正常基因，其编码的细胞膜CCR5蛋白是HIV－Ⅰ(人类免疫缺陷病毒Ⅰ型)感染的“入口”。有学者用“CRISPR/Cas9”技术对该基因进行定点编辑后植入志愿者体内，诞生了两位婴儿。这就是学术界和社会伦理界引起激烈争论的“基因编辑婴儿”事件。下图1、图2分别为相关的技术原理和实施过程。请分析回答：
(1)将Cas9蛋白和向导RNA序列注入受精卵的方法称为________。据图推测，“CRISPR/Cas9”技术中，首先由________引导定位至目标DNA序列，然后由Cas9蛋白将DNA切断。这两种物质的作用结果类似于基因工程中________的作用。基因编辑过程中可能会产生“脱靶”(对CCR5基因以外的其他基因进行了编辑)现象，最可能的原因是________________________________________________________________________。
(2)细胞对被切断的DNA进行重新连接前大都会随机切掉或增加几个碱基对，此过程导致的变异属于________。胚胎2的两个变异CCR5基因编码的蛋白质中，氨基酸数目都可能减少，原因是____________________________。变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，从而实现了________________________________________________________________________。
(3)CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种精准改变目标DNA序列的技术。下列现代生物科技中与该技术最接近的是________。
A.转基因技术 B.蛋白质工程 C.细胞核移植 D.胚胎工程
(4)现今基因编辑技术门槛低，很多人在实验室里都可以做，如果不及时制止，就有泛滥的可能性。基因编辑婴儿事件，在社会上引起了激烈的争论，从科研工作者应具备的科学道德、科学精神来思考，你应持有的正确观点是________________________________________________________________________。