2020年4月12日，由军事科学院陈薇院士团队牵头研发的创新型重组疫苗产品——重组新冠病毒...

2020年4月12日，由军事科学院陈薇院士团队牵头研发的创新型重组疫苗产品——重组新冠病毒（腺病毒载体）疫苗正式在武汉开始受试者接种试验。腺病毒也会引起人类呼吸系统等不适，但只要不是免疫缺陷者，一般不会导致严重后果，可以被当做没有杀伤力的载体，将其一部分基因替换成新冠病毒的刺突糖蛋白S蛋白基因就可以得到重组病毒，然后接种于人体后就能达到类似接种牛痘病毒预防天花的效果。

注：A、B、C、D是引物，箭头是延伸方向

（1）图中是新冠病毒S蛋白基因可用PCR技术体外扩增，PCR技术的原理是___________，需经过变性→_______→延伸→重复过程，其中子链延伸需要引物，引物会与________结合，此处应该选用的引物种类是___________（用图中字母作答）。

（2）新冠病毒S蛋白基因和载体重组时需要的一种工具酶是___________，与限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列_____（填“有”或“无”）专一性要求。

（3）病毒基因表达依赖启动子，它是__________片段，位于基因的首端，是________识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。

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2020年5月22日国际医学权威期刊《柳叶刀》上发表了新冠病毒疫苗1期临床试验的成果。该试验是由陈薇院士等人领衔的团队开展的研究，试验中使用的疫苗是一种腺病毒载体重组新冠病毒疫苗（基因重组疫苗），该疫苗接种108名健康的成年志愿者后，在志愿者体内均产生了特定的免疫应答。下列叙述正确的是（　　 ）

A.该疫苗的制备不需要用到DNA连接酶

B.志愿者接受重组新冠病毒疫苗的接种后，体内产生被动免疫

C.主要通过检测志愿者体内新冠病毒的含量来评价试验的有效性

D.相对于普通人来说，已对腺病毒具有免疫力的个体使用该疫苗的效果要差

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2020年春节期间，一种新型冠状病毒引发了武汉的肺炎疫情。各研发机构迅速进行了针对新型冠状病毒检测和治疗的研发。回答下列问题。

（1）“硕世生物”在拿到新型冠状病毒序列后，第一时间就进行了新型冠状病毒核酸检测试剂盒（双重荧光PCR法）的开发。

①这里涉及的PCR是利用___________________的原理，将目的基因加以复制。

②PCR技术扩增目的基因的前提是要有_____________________，以便根据它合成_____________________。

③PCR扩增的过程：目的基因DNA___________后解链为单链，___________与单链相应互补序列结合，然后在___________________作用下进行延伸，如此重复循环。

（2）接种疫苗是人类对付传染病的有力武器。疫苗作为_______________可激发人体产生相应的____________________，当与疫苗同源的病毒侵入人体后，可引发二次免疫反应。

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2020年3月，科研人员研制的重组新冠疫苗启动临床试验，mRNA疫苗的灵长类动物毒理和药效预实验已启动。回答下列问题：

（1）研究发现，新型冠状病毒粒子表面有S蛋白，可与人体细胞表面的血管紧张素转化酶2结合，从而入侵人体细胞。重组疫苗是利用改造后的腺病毒和__________拼装得到的腺病毒载体疫苗。疫苗注射入人体后，免疫系统会识别出病毒抗原，产生抗病毒免疫反应。腺病毒作为运载体受到了科学家的青睐，理由是__________________________（写出两点）。计划免疫是否成功，可以检测免疫个体的血浆中是否存在__________。

（2）mRNA疫苗瞄准的突破口也是S蛋白，开发mRNA疫苗不需要扩增病毒，关键步骤是在体外合成一种能翻译成特定蛋白质的mRNA，人工合成mRNA的前提条件是__________。当mRNA疫苗进入机体细胞，会在宿主细胞的__________（填细胞器）上合成S蛋白，从而刺激机体产生免疫应答。

（3）一般情况下，间隔一定时间连续注射3针疫苗会有更好的免疫效果，主要原因是体内产生的__________数量增多；当同种抗原再次入侵时，人体会发生二次免疫，其特点是__________，免疫预防作用更强。

（4）如果要利用单克隆抗体治疗相关病毒的感染性疾病，请提出相关的治疗思路：_________________________。

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2020年1月12日，世界卫生组织正式将造成武汉市肺炎疫情的新型冠状病毒命名为2019-nCoV（简称新冠病毒），该病毒是一种单股正链RNA病毒。新冠病毒能特异性地识别肺部细胞膜上的ACE2受体，感染肺部细胞。作为一种包膜病毒，它与T2噬菌体侵染大肠杆菌的机制有所不同。下列表述中错误的是（　　 ）

A.新冠病毒侵入人体细胞时，需要借助于细胞膜的的流动性

B.新冠病毒的遗传物质被彻底水解后得到的产物一共有6种

C.新冠病毒识别宿主细胞，这体现了细胞间的信息交流功能

D.新冠病毒侵入人体后需借助淋巴细胞和吞噬细胞将其消灭

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2020年初，新冠病毒肆虐全球，研发新冠病毒疫苗受到广泛关注。如图是其中一种疫苗的研发思路，图中A~C表示结构或物质，①~⑦表示过程，虚线箭头表示Nco Ⅰ、Sph Ⅰ、Nhe Ⅰ、BamH Ⅰ的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因SUC2控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。

1.图中结构A表示______，过程①表示______。

2.根据C分子可确定需要用限制酶______切割质粒B。

3.图中表示筛选的过程是______（填编号），筛选时应使用以______为唯一碳源的培养基，下列关于筛选过程的叙述正确的是______。

A．成功导入重组质粒的酵母菌能存活

B．成功导入重组质粒的酵母菌不能存活

C．未成功导入重组质粒的酵母菌能存活

D．未成功导入重组质粒的酵母菌不能存活

4.给实验动物注射S蛋白后，在实验动物体内检测到了针对S蛋白的特异性抗体。据此判断下列说法正确的是______。

A.S蛋白作为抗原，引发了特异性免疫

B.抗体大多是蛋白质，少数是糖类、脂质

C.B淋巴细胞一定参与了上述免疫过程

D.T淋巴细胞可能参与了上述免疫过程

5.与一般减毒疫苗相比，以S蛋白为主要有效成分的疫苗（蛋白质疫苗）安全性更高，其原因是______。

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目前，重组蛋白疫苗、腺病毒疫苗、核酸疫苗等多种类型的新冠病毒疫苗都在研发当中。新冠病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，一男子与新冠肺炎患者有接触史，在进行医学隔离期间，检查发现该男子血清中有相应的抗S蛋白抗体出现。某研究小组研制重组蛋白疫苗的简要操作流程如下。请分析回答：

（1）疫苗研制实验步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用DNA连接酶，该酶的作用是_____________________。若不进行步骤②而将S蛋白基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是_______________________。

（2）为了检验步骤⑥所表达的S蛋白是否具有病毒S蛋白的抗原特性，可进行相关实验检测，实验思路是_________________________________。

（3）过程④的大量生产，需对导入表达载体A的大肠杆菌进行筛选和纯化培养。如图是纯化过程中一个平板的菌落分布，该接种方法是___________________；推测接种时可能的操作失误是_________________。

（4）注射疫苗是预防新冠肺炎的有效途径，但是并不意味着接种过新冠疫苗的人将来不会成为新冠肺炎患者。可能的原因有______________________。

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（10分）为了提高乙肝疫苗的预防效果，科学家们对于该疫苗的研发过程做如下改进：提取乙肝病毒（HBV）基因重组后，与β-半乳糖苷酶基因结合，形成重组质粒BPT（如图1），随后的操作如图2，请回答下列问题：

（1）在图一中_____（A/B）插入终止子。构建重组质粒BPT必须使用__________作为工具酶。

（2）从大肠杆菌中提取融合蛋白P-BPT仍需进一步修饰、纯化。其主要原因是因为大肠杆菌不具备__________（细胞器）。

（3）实验中抽取小鼠脾的淋巴细胞进行细胞培养，在培养基中需要添加_______防止杂菌生长。从分子水平上使用__________对特异性免疫应答结果进行检测。

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2020年三月下旬，肆虐武汉的新冠病毒终于慢慢的停止了前进的脚步，与此同时相关的病毒基因的研究和疫苗临床试验正在紧张进行中，请分析下列各题：

（1）为了防止疫情的蔓延武汉1月23日封城，为疫情的防控做出了巨大的牺牲，从预防传染病的措施来看，这样做的主要目的是________________。

（2）中国科学院武汉病毒研究所右正丽团队在《自然》命名了新型冠状病毒为2019-nCov，还确认了它进入细胞的路径与SARS冠状病毒一样，即通过细胞膜上ACE2受体，由此角度你可以建议研制_____________________的药物来抑制病毒对细胞的感染。

（3）临床解剖表明，死者的肺部细胞内和组织液中均含大量的病毒，故机体的免疫系统要进行的特异性免疫类型有_____________________；研究人员还发现该病毒在全基因组水平上与SARS冠状病毒有79．5%的相似性，与一种蝙蝠冠状病毒相似度高达96%，表明蝙蝠可能是该冠状病毒的来源。“全基因组水平”的相似性从分子的角度指的是__________________________。

（4）中国陈薇院士团队研究的“重组疫苗”已经进入临床试验，同时在治疗过程发现使用治愈者的血清注射可以明显降低患者肺部细胞阴影面积和病毒含量，从免疫学角度来看二者的区别是_________________________________________________________________。

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某科研团队研制了一种针对某新型病毒A的生物疫苗Ⅹ，欲通过实验检测疫苗X对实验动物抵抗新型病毒A攻击的保护效力，进行以下实验研究：

实验材料与药品：实验用仔猪若干只，1mL医用注射器若干，含ⅠL的磷酸盐缓冲液（ⅠL·为某种白细胞介素），不含ⅠL的磷酸盐缓冲液，疫苗ⅹ，新型病毒A制剂（要求与说眀：磷酸盐缓冲液的配制方法不作要求；仔猪鼻腔分泌物中病毒含量、血清中抗新型病毒A抗体含量的具体测量方法不作要求。）

（1）实验操作步骤

①选取 __________ 的健康仔猪若干只，平均分为4组，并编号为a、b、c、d。

②___________________淘汰阳性个体并确保每组剩余个体数相同。

③各组处理情况，a组仔猪肌肉注射：疫苗Ⅹ+含ⅡL的磷酸盐缓冲液（1mL/只）；b组仔猪肌肉注射：疫苗Ⅹ十不含ⅡL的磷酸盐缓冲液（lmL/只）；c组和d组伃猪肌肉注射：不含IL的磷酸盐缓冲液（1mL/只）；按照上述处理方式对各组仔猪肌肉注射相关药品。7天后，对a、b、c三组仔猪做__________处理，d组不做此项处理。

④步骤③完成后，各组仔猪给予相同且适宜的环境培养，后续⑧天每天分别检测每组仔猪鼻腔分泌物病毒含量与血清中抗新型病毒A抗体，并计算平均值。

⑤对所得的数据进行相关分析统计，并得出结论

（2）实验结果预测：请在坐标轴上用曲线图绘制出a、b、c三组仔猪血清中抗新型病毒A抗体变化的预期实验结果__________（假设注射疫苗X3天后开始产生抗体，各组仔猪实验检测期间不出现死亡个体）

（3）分析与讨论：

Ⅰ．根据所学知识尝试解释a组仔猪和b组仔猪抗体水平平均值差异的原因可能是 __________________________________________ 。　

Ⅱ．经检测发现，后续8天a组和d组仔猪鼻腔分泌物中全程无新型病毒A出现，b组仅在第10天和第11天检出极少量病毒，c组在第9天后即可检岀大量病毒，且病毒量后续有増长趋势。α组和b组出现上述结果的原因是疫苗X注射后可以刺激机体产生________________说明疫苗X对仔猪抵抗新型病毒A攻击具有较好的保护效力。

Ⅲ．若某地岀现了此种新型病毒A感染疫情，请用相应的生物学知识提岀两种可行的快速检测此新型病毒A的方法__________（仅书写检测方法，具体操作不作要求）。

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