科研工作者拟将人胰岛素基因导入大肠杆菌的质粒保存，图示质粒中含有氨苄青霉素抗性基因和LacZ基因。回答下列有关问题：
（1）PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因。PCR每一次循环包含_______、_______和______三个阶段。以一个分子的目的基因为例，一般要在第3次循环后才会得到完整的目的基因，至此共消耗______个引物分子。Taq聚合酶耐高温的特点在对于PCR链式反应的自动进行的意义是_____________。
（2）构建上图所示的表达载体过程中，所用的限制酶酶切位点位于质粒的_______基因中。重组质粒载体的构建还需要__________将目的基因与质粒相连
（3）LacZ基因编码的半乳糖苷酶可以将无色的X—ga l分解，产生蓝色物质，将重组质粒导入大肠杆菌后，为识别大肠杆菌是否成功导入表达载体，培养基中应加入__________和________，出现_______色菌落表明成功导入表达载体。
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科研工作者拟将人胰岛素基因导入大肠杆菌的质粒保存，图示质粒中含有氨苄青霉素抗性基因和LacZ基因。回答下列有关问题：
（1）PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因。PCR每一次循环包含_______、_______和______三个阶段。以一个分子的目的基因为例，一般要在第3次循环后才会得到完整的目的基因，至此共消耗______个引物分子。Taq聚合酶耐高温的特点在对于PCR链式反应的自动进行的意义是_____________。
（2）构建上图所示的表达载体过程中，所用的限制酶酶切位点位于质粒的_______基因中。重组质粒载体的构建还需要__________将目的基因与质粒相连
（3）LacZ基因编码的半乳糖苷酶可以将无色的X—ga l分解，产生蓝色物质，将重组质粒导入大肠杆菌后，为识别大肠杆菌是否成功导入表达载体，培养基中应加入__________和________，出现_______色菌落表明成功导入表达载体。
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利用转基因技术可以生产出更多廉价的胰岛素，斜土为转基因实验过程示意图，其中数字表示相应过程。
天然大肠杆菌质粒一般含有LacZ基因而不含氨苄青霉素抗性基因；人工合成的大肠杆菌puc118质粒中除含有LacZ基因外，还含有氨苄青霉素抗性基因。
若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷酶能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有puc118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落。此实验方法可以用于鉴别转基因实验是否获得成功。
（1）过程①②一般需要的限制性内切酶主要是从____________分离纯化出来的；过程③④需要______酶。
（2）检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒。培养一段时间后出现三种类型：蓝色菌落、白色菌落、无菌落形成。成功导入重组质粒的菌落的表现是________________。
（3）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需营养成分外，还应加入____________等物质，用于筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（4）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_____________处理细胞，使细胞处于一种____________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将____________与感受态细胞混合，在一定的温度下完成转化。
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科研人员从云杉卷叶蛾越冬幼虫中分离出一种超强的抗冻活性基因sbwAFP，并导入番茄植株中，使番茄植株获得抗冻性，下图表示重组质粒的构建和筛选过程。请回答下列问题：（AmpF为氨苄青霉素抗性基因，TetF为四环素抗性基因）
（1）对获得的sbwAFP基因通常用__________技术以扩增数量。分析图示，构建重组质粒时，应选择限制酶__________和______________切割目的基因和质粒。
（2）将重组质粒导入大肠杆菌前，应用_________处理大肠杆菌,以制备感受态细胞，为了筛选将重组质粒，可将大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，成功导入重组质粒的大肠杆菌在两种培养基的生长状况为__________________________________。
（3）将成功导入了目的基因的番茄细胞培育成完整植株幼苗所采用的技术是_____________，从细胞的角度分析，所依据的生物学原理是_____________________。
（4）如何从个体水平检测目的基因是否成功表达？__________________________。
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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制性核酸内切酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。右图表示转基因操作过程。下列说法错误的是
A．作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选
B．若大肠杆菌的菌落为白色，则有质粒导入大肠杆菌
C．选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素
D．应选择蓝色菌落的大肠杆菌进行扩大培养
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大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制性核酸内切酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。右图表示转基因操作过程。下列说法错误的是
A．作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选
B．若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌
C．选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素
D．应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养
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大肠杆菌PUC19质粒如下图所示。LacZ基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解X-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRI构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因）并进行检测。下列叙述错误的是
A．应用涂布法将受体菌群接种在培养基表面
B．培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal
C．挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌
D．应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养
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如图所示为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因(能使含该基因的大肠杆菌菌落呈蓝色)。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请据图分析并回答问题：
（1）若需获得图中目的基因，可选用________限制酶。
（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列叙述错误的有________(填字母)。
a．该图中含有两个密码子
b．图中③和④代表两个不同的脱氧核苷酸
c．若只用该片段中的3个碱基对，可以排列出43种片段
d． DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用中①处
（3）图中最适合作为目的基因运载体的质粒是B，而A、C两种质粒不能作为运载体的理由分别是________。
（4）用目的基因和质粒B构建重组质粒后用EcoRⅠ完全酶切并进行电泳观察，可出现长度为1．1 kb和________kb，或者________kb和________kb的片段。(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计)
（5）将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，并进行导入大肠杆菌受体细胞的操作之后，从菌落的颜色和对抗生素抗性的角度分析，受体细胞的类型有________种。若菌落表现为具有氨苄青霉素抗性、不呈蓝色，说明导入对应受体细胞的DNA为_______________________。
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如图1表示某质粒，该质粒含有抗氨苄青霉素抗性基因（amp＇）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，该酶能将白色底物X-Gal转化为蓝色产物，图2表示含目的基因的DNA片段，实验小组利用该质粒为载体将目的基因导入大肠杆菌，并筛选成功导入重组质粒的受体细胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位点）。请回答下列问题：
（1）构建基因表达载体的目的是_________。在构建基因表达载体时应选用的限制酶是__________。
（2）将重组质粒导入大肠杆菌时，应用__________处理大肠杆菌，制备感受态细胞，实验室选用微生物作为受体细胞的优点是_________。
（3）重组质粒导入大肠杆菌后，应将大肠杆菌置于以X-Gal为底物，并添加_______________的培养基上培养，挑选出__________（填“白色”或“蓝色”）菌落。
（4）检测目的基因是否成功导入受体细胞常用的方法是__________，该方法依据的原理是__________。
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生物·选修3：现代生物科技专题
科研人员将病毒外壳蛋白(CP)基因转移到甜椒体内，培育出的抗病毒甜椒具有很好的抗病毒效果。请回答下列有关抗病毒甜椒培育过程的问题：
(1)获取含氨苄青霉素抗性基因的质粒：先在含_________________的培养基上培养细菌，然后从菌体中分离出含氨苄青霉素抗性基因的质粒。
(2)获取CP基因：从感染病毒的植物体内获得_____，然后用反转录的方法获得___（填“基因组”或“cDNA”）文库。基因组文库与cDNA文库相比，两者最显著的区别是____。
(3)构建基因表达载体：经反转录获得的目的基因的两端是平末端，需要用________连接酶将其与含平末端的载体连接。
(4)导入受体细胞：甜椒为双子叶植物，科研人员常用__________法导入，然后将受感染的组织细胞培育成愈伤组织，再经___________培育成转基因甜椒。
(5)目的基因的裣测与鉴定：目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键___________。
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研究人员通过将生长激素基因导入大肠杆菌内来表达人生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，目的基因要插入到B基因中，大肠杆菌不带有任何抗性基因。下列叙述错误的是（ ）
A.为提高重组成功率常用两种限制酶同时酶切质粒和生长激素基因
B.重组质粒可通过农杆菌介导导入大肠杆菌细胞内
C.上述过程中生长激素基因通常通过逆转录法获得
D.符合生产要求的工程菌可在含链霉素的培养基中生长
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