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Ⅰ．回答下列制作澄清果汁的相关问题：
（1）壳聚糖本身是一种多孔网状天然高分子颗粒材料，对蛋白质有显著的亲合力，可将果胶酶通过吸附-交联法固定在壳聚糖载体上，再将固定化酶的载体装到反应柱中（见下图）。固定化酶的好处有________________________、________________________；但固定化酶的活性与未固定前相比较，其活性可能不变，也可能会发生________________________。
（2）壳聚糖一般先进行________________________处理，然后再与果胶酶混合，使其能固定化更多的果胶酶。固定化酶柱应先倒入一定量的蒸馏水，洗掉________________________，然后再倒入浑浊的果汁。
（3）果胶是植物细胞壁以及________________________的主要组成成分，浑浊的果汁在反应柱中从上部流到下部的过程中果胶最终被彻底水解成可溶性的________________________，从而使流出的果汁变的澄清。若以透光率作为实验指标，可变因素是浑浊果汁从上部流到下部的时间，则实验结果最可能为________________________。
Ⅱ．抗生素滥用导致
耐药性目前已成为一个严重的公共健康问题，近年来，“超级细菌”等事件的发生更显示出这一问题的严重性。抗菌肽（AMPs）是一类具有广谱抗菌性，而且其不易产生耐药性。为了改善抗菌肽的抗菌功能，常利用基因工程技术使抗菌肽在不同来源的宿主细胞内进行蛋白的重组表达。β-防御素是一种抗菌肽。构建β-防御素（β-defensin130）表达载体在大肠杆菌中表达。结合已知条件回答下列问题：
如图为表达载体（PET-28a）和含有目的基因β-防御素（defensin130）的片段。（说明：Kanr和Ampr分别表示卡那霉素和氨苄青霉素抗性基因；promoter表示基因的启动部位）
（1）获得含有目的基因的重组DNA分子，需用________________________和________________________两种酶分别切割表达载体和含有目的基因的片段，并用________________________酶将它们连接。
（2）把构建好的重组DNA分子导入到受体细胞，用适宜浓度的氯化钙处理受体细胞增加细胞壁的通透性的目的是________________________。3×β-defensin130
（3）筛选含有目的基因β-防御素（β-defensin130）的受体细胞，先将菌液涂布在含有________________________（抗生素）的培养基中培养，然后将所有菌落转移至含有________________________（抗生素）的培养基中培养，最后挑选出目的菌落。
（4）在无菌操作下将目的单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面培养基上，37°C培养24小时后，置于________________________中保存。
（5）若受体细胞为双子叶植物，常用________________________法将目的基因导入植物体细胞，再将体细胞进行组织培养，得到转基因植物。
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回答下列制作澄清果汁的相关问题：
（1）壳聚糖本身是一种多孔网状天然高分子颗粒材料，对蛋白质有显著的亲合力，可将果胶酶通过吸附-交联法固定在壳聚糖载体上，再将固定化酶的载体装到反应柱中（见下图）。固定化酶的好处有___________、___________；但固定化酶的活性与未固定相比较，其活性可能不变，可能会发生___________。
（2）壳聚糖一般先进行___________处理，然后再与果胶酶混合，固定化更多的果胶酶。固定化酶柱应先倒入一定量的蒸馏水，洗掉___________，然后再倒入浑浊的果汁。
（3）果胶是植物细胞壁以及___________的主要组成成分，浑浊的果汁在反应柱中从上部流到下部的过程中果胶最终被分解成可溶性的___________，从而使流出的果汁变的澄清。若以透光率作为实验指标，可变因素是浑浊果汁从上部流到下部的时间，则实验结果最可能为___________。
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苹果除可直接食用外，还可将其制成饮品，如苹果汁、苹果酒、苹果酯等。回答下列问题
（1）在制作苹果汁时，为了提高出汁率和澄清度，常添加果胶酶，这是分解果胶的一类酶的总称，包括_______________、_____________和果胶酯酶等。
（2）从微生物培养的角度分析，苹果汁能够为酵母菌的生长提供的成分有_____________。苹果汁发酵产生苹果酒的过程不需要严格的消毒处理，原因是________________________。
（3）醋酸菌常用于苹果醋的制作，在分离优质醋酸菌时，若想对醋酸菌进行计数，则应用稀释涂布平板法在培养基上进行接种，平板划线法一般不用于活菌计数的原因是_________。计数时，通常以菌落数在30～300的稀释度来计算细菌含量，原因是________________。
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回答下列与果汁、果酒、果醋制作相关的问题：
（1）实验室制作果酒、果醋。
①用果汁制作果酒：将果实打成匀浆后，加果胶酶将果胶分解成__________等物质，再用果胶甲酯酶处理得到较澄清的果汁，装入发酵瓶中。另外，将适量的__________作菌种，用温水加入少量蔗糖制成悬液，活化后加到果汁中混匀，发酵制酒。
②用果酒制作果醋：获得保存在试管LB固体__________培养基的醋杆菌菌种，用_________（填仪器）取菌体放入三角瓶的液体培养基中，置于摇床上振荡培养48小时，使其_________后，用于醋酸发酵。
（2）工业化制作果汁的过程中，对果胶酶需求量很大，目前较好的解决办法是将果胶酶用物理或__________的方法固定在某种介质上，具体是以海藻酸钠为“网格”载体，戊二醛为交联剂，即采用__________两种方法将酶固定化，以实现__________，从而减少对果胶酶的需求。
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水果可以用来加工制作果汁、果酒和果醋等。回答下列问题：
（1）制作果汁时，可以使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、________（答出2种即可）。纤维素酶可以分解植物______________（填细胞膜或细胞壁）中的纤维素。
（2）用果胶酶处理果泥时，为了提高出汁率，需要控制反应的温度，原因是__________________。
（3）现有甲乙丙三种不同来源的果胶酶，某同学拟在果泥用量、温度、pH等所有条件都相同的前提下比较这三种酶的活性。通常，酶活性的高低可用_____________来表示。
（4）获得的果汁（如苹果汁）可以用来制作果酒或者果醋，制作果酒需要__________________菌，这一过程中也需要O2，O2的作用是__________________。制作果醋需要醋酸菌，醋酸菌属于_____________（填好氧或厌氧）细菌。
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请回答下列相关问题：
（1）用苹果加工成果汁的过程中，需要加入果胶酶，果胶酶可以将果胶分解成_____，使浑浊的果汁变得澄清。
（2）进行果酒的发酵生产，通常先分离纯化酵母菌，然后扩大培养、固定化酵母细胞，最后才接种、发酵。制备固定化酵母细胞：细胞多采用_____法固定化，酵母细胞固定前需要进行活化，原因是_____。如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠_____，固定的酵母细胞数目较少。
（3）在提取胡萝ト素的实验中，需要对胡萝卜进行干燥处理，干燥时，_____会导致胡萝卜素分解。萃取时，萃取的效率主要取决于_____。
（4）血红蛋白的提取和分离一般分为四步：_____、纯化和纯化的鉴定。在凝胶色谱法制作过程中，装填凝胶柱时，不得有气泡存在，原因是_____。
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下列关于“果汁中的果胶和果胶酶”实验的叙述，正确的是
A.果胶是一种能使植物细胞粘合在一起的蛋白质
B.加热后果汁澄清度增大的原因是果胶在高温下水解
C.果胶酶在果汁制作中的作用效果可用乙醇进行检验
D.果胶的彻底水解产物是半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯
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制作果酒与果醋的基本工艺流程及装置如下图所示。回答下列问题：
（1）制作果汁时用纤维素酶和果胶酶处理，可以提高果汁的__________（答出2点）。
（2）为选育出酒精耐受强、产香能力高的菌株，将天然酵母菌制备成原生质体进行培养，用____________照射培养液一段时间，采用涂布分离法将原生质体接种到特定培养基上培养，进行______，然后鉴定筛选优良菌株。与普通的酵母菌培养基相比，培养原生质体的培养基中特有成分是一定浓度的山梨醇，推测山梨醇的作用主要是___________。
（3）对甲罐中进行的果酒发酵工艺进行优化，可以优化的项目包括发酵菌种的选育、发酵设备的改进、发酵条件的控制以及__________。乙罐中加入刨花的作用是___________，与不加刨花相比，这样操作的优点有__________。
（4）好的葡萄酒要储存几年到几十年，原因是在较长的储存时间内，酒中的物质会发生一些转化，如__________，两者又生成酯，酯类物质越多，酒味越香醇。
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果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁更容易，也使得浑浊的果汁变得澄清。回答下列问题：
(1)果胶是由______聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、__________________等。
(2)有同学做了以下实验：
①用搅拌器制苹果泥；②取6个烧杯编号1、2、3、4、5、6，依次注入适量30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃的水，恒温水浴；③每一烧杯中放入分别装有等量苹果泥和果胶酶的试管，保温3min；④向每组烧杯的苹果泥中加入相应的等量果胶酶，振荡试管，反应一段时间；⑤过滤，比较获得苹果汁的体积。
a.此实验的实验目的是____________________________________________。
b.该实验____________（填“是”或“否”）需要一组果汁和蒸馏水相混合的对照实验。
c．若继续探究pH值对果胶酶活性的影响，则实验过程中的自变量是________，其中无关变量有__________________________(列举三条)等因素。
(3)由霉菌发酵生产的果胶酶是食品加工业中使用量较大的酶制剂之一，可通过固定化霉菌细胞生产果胶酶。固定化细胞技术一般采用包埋法固定化，原因是__________。
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回答下列（一）、（二）小题：
（一）苹果可以制作成苹果汁、苹果酒和苹果醋等多种产品，深受大众喜爱。
（1）在榨取苹果汁时，往往添加适量的黑曲霉提取液，其中含有的_________可水解果胶，从而使果汁澄清。在纯化所需黑曲霉时，采用平板划线法接种培养一段时间后，发现第一划线区域上都不间断长满菌落，第二划线区域几乎无菌落，此现象出现的原因可能是_______________。纯化得到的菌种可用划线法接种于_______，培养一定时间后保存。
（2）制备好的的苹果汁可用于制作苹果酒。发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面_______，说明发酵基本完毕。果酒酿造过程中，即使含有醋杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为醋，理由是____________。
（3）苹果酒可用于制备苹果醋，在制备果醋时使用了优良菌种，且流入发酵罐的苹果酒质量很好，但是生产的苹果醋产量和质量不够高，排除温度和 PH 以外的原因可能是 ____（写二点）。
（4）下列关于果酒、果醋制作的叙述，错误的是（____）
A． 制作果酒过程中，发酵罐放气的频率呈先升高后降低的趋势
B． 控制好温度和酸碱度既有利于目的菌的繁殖，又可抑制杂菌的生长
C． 制作果酒和果醋的微生物呼吸类型不完全相同
D． 发酵过程中所有材料都需要进行严格的灭菌处理，以免杂菌污染
（二）如图所示为质粒B和一个含目的基因的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因（能使含该基因的大肠杆菌菌落呈蓝色）。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请据图分析并回答问题：
（1）外源基因在受体细胞中能启动表达的关键是载体上具有_________识别和结合的部位。
（2）将用限制酶_____切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，导入大肠杆菌。为了便于筛选，作为受体细胞的大肠杆菌自身______（含/不含）lacZ基因和_____（有/没有）氨苄青霉素抗性。导入后应从_____________两个角度对受体细胞进行筛选。
（3）将获得的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切并进行电泳观察，若出现长度为 3．1 kb 和____kb的片段，则载体和目的基因反向连接。若出现长度为_____kb 和___kb的片段，则载体和目的基因正向连接。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）
耐药性目前已成为一个严重的公共健康问题，近年来，“超级细菌”等事件的发生更显示出这一问题的严重性。抗菌肽（AMPs）是一类具有广谱抗菌性，而且其不易产生耐药性。为了改善抗菌肽的抗菌功能，常利用基因工程技术使抗菌肽在不同来源的宿主细胞内进行蛋白的重组表达。β-防御素是一种抗菌肽。构建β-防御素（β-defensin130）表达载体在大肠杆菌中表达。结合已知条件回答下列问题：