通过生物工程生产胰岛素的两条途径如图所示，图中EcoRI、BamHI和Sau3AI为限制性...

通过生物工程生产胰岛素的两条途径如图所示，图中EcoRI、BamHI和Sau3AI为限制性核酸内切酶。

请回答：

（1）该过程中构建重组质粒时，最好选用限制酶_____________。

（2）途径1构建重组质粒时须把胰岛素基因与_____________的启动子等调控组件重组在一起。早期胚胎一般培养到_____________时期再移入代孕母牛体内，胚胎能在代孕母牛子宫内存活的生理学基础是_____________。

（3）途径2要筛选出含重组质粒的大肠杆菌，需把转化后的大肠杆菌培养在含_____________的固体培养基中，待菌落长出后再“印”到含_____________的固体培养基中，培养一段时间后，对比两种培养基上菌落的分布，挑出符合需要的菌落。

（4）与途径2相比，通过途径1获得胰岛素的优势是_____________。

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如图是将某抗原基因导入大肠杆菌内制备“工程菌”的示意图，图中BamHI、EcoRI、SmaI、HindⅢ分别代表相应的限制酶。回答下列问题：

（1）获得抗原基因的途径可以是以抗原蛋白的mRNA为模板，在______酶的催化下，获得所需基因。

（2）利用质粒作为运载体时，常常需要对天然质粒进行改造，若图中P为启动子，它是_____的位点；青霉素抗性基因和四环素抗性基因可作为____基因，其作用是_____。

（3）利用PCR技术扩增抗原基因时，需要在反应体系中添加的物质有_____、成对的_______、4种dNTP和热稳定性DNA聚合酶等，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（4）构建重组质粒时，一般使用BamH I和HindⅢ对含抗原基因的DNA片段和质粒分别进行切割，而不单独使用EcoR I切割，是由于BamH I和HindⅢ共同切割可以防止_____。筛选该工程菌时应进行两次筛选，先在添加____的培养基中选出导入质粒的大肠杆菌单菌落，将单菌落分别接种到液体培养基中，培养一段时间后，取菌液在添加_____的平板上划线，将导入重组质粒的工程菌筛选出来。

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图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）．

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有___．

A、能自我复制　　　　　　　　　　　　　　　　　　 B、具有标记基因　

C、能启动外源目的基因的转录和翻译　　　　　 D、含有多个酶切位点

（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因___（多选题）．

A．消化道黏膜上皮细胞     B．胰岛A细胞

C．胰岛B细胞    　　　　　　 D．造血干细胞

（3）经BamHI酶切割得到的目的基因___（能、不能、）与图乙所示质粒被Sau3AI酶切后的产物连接，理由是__________．

（4）将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有___的培养基进行初步筛选．目的基因成功表达的标志是___．

（5）已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0kb和4.2kb（1kb=1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为___．

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限制酶是一群核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。如图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BgIⅡ的辨识序列：

箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端，可以互补结合其正确的末端互补序列为

A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT—

B. BamHI和BgIⅡ；末端互补序列—GATC—

C. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—

D. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—

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哺乳动物产生的凝乳酶是一种重要的商用酶。图1是利用生物工程技术快速生产凝乳酶的过程；图2是图1中过程⑤合成的含有目的基因的DNA[片段，HindⅢ、EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图2中箭头所指为三种限制酶的切点；图3表示某种大肠杆菌的质粒中含有β半乳糖苷酶α片段序列，大肠杆菌的DNA分子中则含有β半乳糖酶ω片段序列，由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有Xgal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，Xgal底物不能转变成蓝色产物。图4是大肠杆菌中的质粒放大图。

（1）图1中所示通过①②③过程获取目的基因的方法为______________________。

（2）能否在该哺乳动物的唾液腺细胞中获得相关的mRNA，为什么？______________。

（3）将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有Xgal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为__________________。

（4）应选用的限制性内切酶是____________，选择的依据是____________。

（5）图中的引物是RNA分子片段，由过程②设计该引物的原理依据是________。

（6）过程⑩的基本环节如下图：

酶蛋白沉淀的方法有_____________，提纯酶的方法常用_____________。

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图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRI、BamHI、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是

A.如果用EcoRI对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种

B.如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRI酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRI酶切点有1个

C.为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理

D.如果要将重组DNA导入大肠杆菌细胞，则用氯化钙处理大肠杆菌可以增加其细胞壁的通透性，利于重组DNA的导入

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限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？（    ）

A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT—

B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—

C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—

D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—

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限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？(    )

A .BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT—

B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—

C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—

D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—

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限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何                                                           （    ）

A．BamHI和EcoRI； 末端互补序列—AATT—

B．BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—

C．EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—

D．BamHI和BglII； 末端互补序列—GATC—

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限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？

A．BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT—

B．BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—

C．EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—

D．BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—

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