图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的...

图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）．

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有___．

A、能自我复制　　　　　　　　　　　　　　　　　　 B、具有标记基因　

C、能启动外源目的基因的转录和翻译　　　　　 D、含有多个酶切位点

（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因___（多选题）．

A．消化道黏膜上皮细胞     B．胰岛A细胞

C．胰岛B细胞    　　　　　　 D．造血干细胞

（3）经BamHI酶切割得到的目的基因___（能、不能、）与图乙所示质粒被Sau3AI酶切后的产物连接，理由是__________．

（4）将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有___的培养基进行初步筛选．目的基因成功表达的标志是___．

（5）已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0kb和4.2kb（1kb=1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为___．

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（六）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。

利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素，图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

1.质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_______________________。

2.可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因　　　　　　 （多选题）。

A. 消化道黏膜上皮细胞　　 B. 胰岛A细胞

C. 胰岛B细胞　　 D. 造血干细胞

3.经BamH I酶切割得到的目的基因可以与图乙所示质粒被_____________酶切后的产物连接，理由是_______________。连接后的重组质粒_____（能、不能、不一定）被BamH I切割。

4.将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有___________的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是________________。

5.已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8 kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为　　　　 。

A. 2.8　　 2.0　　 2.2　　 B. 1.8　　 2.0　　 2.2

C. 4.0　 1.8　　 1.0　　 D. 2.0　　 0.8　　 4.2

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图（a）中的三个DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。

（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是______。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。

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图（a）中的三个DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。

（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。

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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：

（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。

（2）图3中的A、B、C、D为与目的基因两端配对的四种单链DNA片段，在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。

（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段，三种方法总共可以形成________种不同的片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有______种。

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图甲中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种基因表达载体示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素时，需用到图乙所示质粒以及图甲所示的有关酶。请回答下列问题：

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_________________(多选题，填序号）。

①能自我复制　 ②具有标记基因　 ③能启动外源目的基因的转录和翻译　 ④含有多个酶切位点

（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因____________（多选题，填序号）。

①消化道黏膜上皮细胞　 ②胰岛A细胞　 ③胰岛B细胞　 ④成熟红细胞

（3）经BamHⅠ酶切割得到的目的基因__________(填“能”或“不能”）与图乙所示质粒被Sau3AⅠ酶切后的产物连接，理由是______________________。

（4）将人胰岛素基因与图乙所示质粒所拼接的重组质粒导入到大肠杆菌的常用方法是__________，检测目的基因是否导入成功，可用含有___________的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是_______。

（5）已知图乙所示质粒经EcoRⅠ和Sau3AⅠ联合酶切后形成2.0kb和4.2kb(lkb=1000对碱基)两种DNA片段。若将0.8kb的单个基因插在质粒的Sau3AⅠ位点处，所形成的重组质粒用EcoRⅠ和Sau3AⅠ联合酶切后，能形成的DNA片段长度分别为___________________。

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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体的示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamH I酶切得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。

（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。

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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。

（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。

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限制性内切酶是—种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图依次为四种限制酶．BanHI，EcoRI，HindⅢ以及BgIⅡ的切割位点和辨识序列。为防止酶切后含目的基因的DNA片段自身连接成环状，下列不能同时切割目的基因的是

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某线性DNA分子共含2000个碱基，其中腺嘌呤占30%，用限制性核酸内切酶BamHI，识别序列为G↓GATCC，完全切割该DNA分子后产生3个片段，则下列有关叙述中，正确的是

A．BamHI也可识别序列GATC并进行切割

B．含BamHI的溶液中加入双缩脲试剂A震荡后即出现紫色

C．一个该DNA分子连续复制2次，共需游离的胞嘧啶脱氧核苷酸1600个

D．一个该DNA分子经BamHI完全切割后产生的片段，共含有6个游离的磷酸基团

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