枯草杆菌广泛分布于土壤及腐败的有机物中,某工厂为生产耐高温的淀粉酶,开展了枯草杆菌菌株的筛选、酶的固定化分析研究。请回答下列问题:
(1)本实验利用的培养基需用______________法进行灭菌,无菌技术处理除了防止实验室培养物被其他外来微生物污染外,还可______________和______________。
(2)为了酶的重复利用和节约成本,除了利用固定化酶技术之外,还可利用固定化细胞技术,与固定化酶相比,固定化细胞的优势是_____________________。固定化细胞常用的方法是______________ ,操作过程中的海藻酸钠作用是____________________________。
(3)为了分离纯化菌种,可以选择的接种方法是________(答一种方法),为了保持菌种的纯净,可以采用________的方法长期保存该菌种。
高三生物综合题中等难度题
枯草杆菌广泛分布于土壤及腐败的有机物中,某工厂为生产耐高温的淀粉酶,开展了枯草杆菌菌株的筛选、酶的固定化分析研究。请回答下列问题:
(1)本实验利用的培养基需用______________法进行灭菌,无菌技术处理除了防止实验室培养物被其他外来微生物污染外,还可______________和______________。
(2)为了酶的重复利用和节约成本,除了利用固定化酶技术之外,还可利用固定化细胞技术,与固定化酶相比,固定化细胞的优势是_____________________。固定化细胞常用的方法是______________ ,操作过程中的海藻酸钠作用是____________________________。
(3)为了分离纯化菌种,可以选择的接种方法是________(答一种方法),为了保持菌种的纯净,可以采用________的方法长期保存该菌种。
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回答下列(一)、(二)小题。
(一)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂,开展了该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究,其流程如下图所示。请回答下列问题:
(1)土壤悬液首先经80℃处理15分钟,其目的是筛选出_______________。
(2)在无菌条件下,将经过处理的土壤悬液进行______________,然后涂布在含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到______________,其周围出现透明水解圈,______________比值大小与该菌所产植酸酶数量多少、活性强弱相关。
(3)筛选获得的菌株经鉴定后,将优良菌株进行液体扩大培养,培养时需要振荡,其主要目的是______________。
(4)常用固定化植酸酶处理饲料,其主要优点有________________________和可连续处理等。在建立和优化固定化植酸酶处理工艺时,除考虑_________________________、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外,还需考虑的主要有固定化的方法和固定化________________。
(二)人类在预防与诊疗传染性疾病过程中,经常使用疫苗和抗体。已知目前全世界流行的新型冠状病毒为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,其疫苗生产和单克隆抗体制备的流程之一如图所示。请据图分析并回答下列问题:
(1)在基因工程中,图中A蛋白基因属于__________基因。
(2)图示B淋巴细胞来自__________(填器官),小鼠骨髓瘤细胞可以通过动物细胞培养形成不死性的____________________。
(3)过程③采用的实验技术是__________,获得的X是__________。
(4)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图中基因工程生产的__________所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分离病毒,与已知病毒进行____________________比较,或用图中的____________________进行特异性结合检测。
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【加试题】回答下列(一)、(二)小题:
(一)请回答与“固定化酶”实验有关的问题:
(1)—淀粉酶可以通过培养枯草杆菌来生产, 是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用 培养基进行扩大培养。
(2)利用物理或化学的方法将—淀粉酶固定后,成为 且又有酶活性的制剂。若用吸附法固定时,在装柱后需要用 缓慢冲洗,直至流出液不使淀粉-碘混合液发生 为止。
(3)将淀粉溶液以一定流速从反应柱上端滴入,再在下端接取少量流出液进行KI-I2颜色测试,结果不呈现红色。对此现象的解释错误的是
A.反应柱中没有—淀粉酶被固定
B.流速过快淀粉未被水解
C.接取的流出液是蒸馏水
D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖
(二)欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中,以期利用小鼠生产出人胰岛素,请回答:
(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因,则需要从人体相应的 细胞中提取mRNA,获得的人胰岛素基因经过相应处理后,再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中,下列最不适合作为受体细胞的是
(A.受精卵B.胚胎干细胞C.第一次卵裂形成的细胞D.第三次卵裂形成的细胞)
(2)为获得更多的受体细胞,可先对成年雌鼠注射激素进 处理,将获得的卵母细胞培养成熟,与经 处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。
(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助 、 等技术才能成为转基因小鼠。
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请回答与“固定化酶”实验有关的问题:
(1)—淀粉酶可以通过培养枯草杆菌来生产,_______是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用__________培养基进行扩大培养。
(2)利用物理或化学的方法将—淀粉酶固定后,成为_______且又有酶活性的制剂。若用吸附法固定时,在装柱后需要用_________缓慢冲洗,直至流出液不使淀粉-碘混合液发生___________为止。
(3)将淀粉溶液以一定流速从反应柱上端滴入,再在下端接取少量流出液进行KI-I2颜色测试,结果不呈现红色。对此现象的解释错误的是___________
A.反应柱中没有—淀粉酶被固定
B.流速过快淀粉未被水解
C.接取的流出液是蒸馏水
D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖
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(一)请回答利用枯草杆菌生产α-淀粉酶及酶固定化实验的有关问题:
(1)筛选高表达菌株的最简便方法之一是:___________。 一般通过_______两种手段实现。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用_________培养基进行扩大培养。
(2)利用物理或化学的方法将 α-淀粉酶固定在_______的介质上成为固定化酶。
(3)实验过程中涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作, 所用的蒸馏水体积为装填体积的________,第二次洗涤的目的是除去________。
(4)从反应柱下端接取少量流出液进行 KI-I2 颜色测试,结果未呈现红色。下列有关此现象 的解释错误的是:________。
A.反应柱中没有α-淀粉酶被固定
B.流速过快淀粉未被水解
C.接取的流出液是蒸馏水
D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖
(二)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF-Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图:
(1)转基因过程用到的工具酶有______和________。
(2)在过程②中,用_______处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚,因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的_________,在培养过程中,应将培养瓶置于________中培养。
(3)若要获得多只相同的转基因山羊, 可对图中早期胚胎进行______后进行胚胎移植。
(4)下列有关基因工程的叙述,正确的是_______________。
A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端,必须用相同的核酸内切酶
B.基因工程的原理是基因重组,其核心是上图中的过程④
C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物
D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点
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反硝化细菌能将硝态氮(如N03-)转化为氮气(2N03-+l0e-+12H+→N2+6H20),广泛用于污水处理。科研人员开展好氧反硝化细菌的筛选和固定化研究,主要过程及结果如下。请回答:
步骤1菌株初筛、纯化和鉴定将1g活性污泥稀释成不同浓度的溶液,各取50μL稀释液均匀涂布到含有溴麝香草酚蓝(BTB)的初筛培养基上(BTB是一种酸碱指示剂,在弱酸性溶液中呈黄色,弱碱性溶液中呈蓝色,中性溶液中呈绿色,初筛培养基呈绿色),在适宜条件下培养获得单菌落,再进行纯化和遗传鉴定。
步骤2制备固定化细菌配制海藻酸钠等溶液并灭菌。在无菌条件下制备固定化小球,用无菌水冲洗并保存。
步骤3不同C/N(碳氮比)对反硝化效率的影响研究配制不同C/N的培养液,每种培养液分两组,分别加入100粒固定化小球和0.8mL的菌液,在30下振荡培养48h后,测定培养液中NO3-的去除率,结果如图。
(1)步骤1中,初筛培养基中的氮源应是____。在细菌培养过程中,需要放置未接种的培养基一起培养,其目的是____。初培结束时,选择的目标菌落周围应呈____色。
(2)步骤2中,海藻酸钠等溶液的灭菌方法是____。制作的凝胶球不宜过大,否则会使小球的____减小,影响小球内外物质交换.进而影响反硝化效率。
(3)步骤3中,若每个固定化小球包埋的细菌数量为19×l06个,则实验接种的菌液中反硝化细菌的密度约为____(保留一位小数)个•mL-1。实验结果表明,固定化会使细菌的反硝化效率略有下降,可能的原因是____。
(4)用反硝化细菌进行污水处理过程中,有时需要向污水中加入少量淀粉。结合实验结果分析,添加淀粉的主要目的是____。
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自生固氮细菌能独立完成固氮作用,在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮细菌菌株,并对其固氮能力进行了研究。请回答下列问题:
(1)要从土壤样品中分离出自生固氮细菌,在获得土壤浸出液后,将浸出液加入到_________(选择、鉴定)培养基中培养,目的是___________,然后再吸取适量的培养液,采用稀释涂布平板法涂布于_________(选择、鉴定)培养基上继续培养。
(2)为了进一步筛选高效固氮细菌,研究人员将上述获得的等量的四种固氮细菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后,对固氮菌进行计数并定量测定培养液中的含氮量,结果如表:
甲菌 | 乙菌 | 丙菌 | 丁菌 | |
菌量(个/ml) | 2.1×105 | 2.5×105 | 1.8×105 | 2.0×105 |
含氮量(K) | 3.32 | 4.38 | 5.34 | 5.32 |
由上述结果可知,_________菌的固氮效率最高,原因是___________________。
(3)固氮基因重组到水稻、小麦等经济作物细胞中,让植物本身直接固氮,这样可以免施或少施氮肥。这样就要先提取出固氮细菌的DNA,某研究小组甲同学设计了一个提取DNA的方案:破碎细菌细胞,将初步过滤的细菌细胞匀浆加入到2mol/LNaCl溶液中,过滤,则DNA留在___________(填“沉淀”或“滤液”)中。经过一系列操作后,析出的DNA可用_____________试剂进行鉴定。
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自生固氮菌可不与其它植物共生,能独立完成固氮作用,在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株,并对其固氮能力进行了研究。请回答下列问题:
(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中,下列选项不需要的是________(填序号)
①酒精灯 ②接种环 ③高压蒸汽灭菌锅 ④棉塞
(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌,在获得土壤浸出悬液后,可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。
(3)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是_________________________________。
(4)涂布培养四天后,可通过观察________的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。
(5)为了进一步筛选高效固氮菌,研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后,对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量,结果如下表:
甲菌 乙菌 丙菌 丁菌
菌量(个/mL) 2.1×105 2.5×105 1.8×105 2.0×105
含氮量(K) 3.32 4.38 5.34 5.32
①培养过程中需不断振荡的目的是__________________________________________________。
②可以采用________方法对固氮菌进行计数,假设计数室长和宽均为1mm,深0.1 mm,每个小方格中平均有7个固氮菌,则10mL培养液中有固氮菌的数量为________个;如果小方格中固氮菌的数量太多,无法数清,则应________。
③由上述结果可知,________菌的固氮效率最高。
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自生固氮菌可不与其它植物共生,能独立完成固氮作用,在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株,并对其固氮能力进行了研究。
请回答下列问题:
(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中,下列选项不需要的是________(填序号)
①酒精灯 ②接种环 ③高压蒸汽灭菌锅 ④棉塞
(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌,在获得土壤浸出悬液后,可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。
(3)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是_______________________。
(4)涂布培养四天后,可通过观察________的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。
(5)为了进一步筛选高效固氮菌,研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后,对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量,结果如下表:
甲菌 | 乙菌 | 丙菌 | 丁菌 | |
菌量(个/mL) | 2.1×105 | 2.5×105 | 1.8×105 | 2.0×105 |
含氮量(K) | 3.32 | 4.38 | 5.34 | 5.32 |
①培养过程中需不断振荡的目的是________________________。
②可以采用________方法对固氮菌进行计数,假设计数室长和宽均为1 mm,深0.1 mm,每个小方格中平均有7个固氮菌,则10 mL培养液中有固氮菌的数量为________个;如果小方格中固氮菌的数量太多,无法数清,则应________。
③由上述结果可知,________菌的固氮效率最高。
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自生固氮菌可不与其它植物共生,能独立完成固氮作用,在农业生产中具有广泛的用途。研究人员欲从土壤中筛选高效的自生固氮菌株进行研究。请回答下列问题:
(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中,下列选项不需要的是________(填序号)。
①酒精灯 ②接种环 ③高压蒸汽灭菌锅 ④棉塞
(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌,在获得土壤浸出悬液后,可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。在下图所示的四种菌落分布图中,不可能是用该方法得到的是_______。
(3)稀释涂布平板法还可用于检验土壤中自生固氮菌的含量,上图中用该方法得到的菌落分布图中,最符合计数要求的是图中的_________。用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组?__________。为什么?______________________________________。
(4)分别取0.1mL、已稀释103倍的土壤浸出液,分别涂布到3个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到自生固氮菌的菌落平均数为130。则每g土样中自生固氮菌为__________。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是____________。
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