PCR扩增过程示意图如下，核心要素包括引物设计、温度控制和模板DNA的获得。请回答下列问题...

PCR扩增过程示意图如下，核心要素包括引物设计、温度控制和模板DNA的获得。请回答下列问题：

（1）欲构建抗利尿激素的cDNA文库，应从________(组织)中提取________，通过________获得cDNA用于PCR扩增。

（2）设计一对与抗利尿激素基因两端序列互补配对的引物时(引物1和引物2)，一般在引物的________端需要增加适当的限制酶切割位点，其目的是____________________________。

（3）PCR设计的引物序列一般介于20～30 bp，若引物序列太长带来的影响主要是______________________________________。

（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度的设定主要与________________有关。

（5）如果模板DNA完全正常，但PCR反应得不到任何扩增产物，其原因可能为____________、____________。

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PCR扩增时，引物的设计和退火温度的设定是非常重要的。下列有关叙述正确的是

A. 为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的限制酶切位点

B. 设计引物时，若引物长度过短，则引物与模板链结合的特异性较差

C. 若退火温度过高，则会破坏引物与模板的碱基互补配对

D. 长度相同但GC含量高的引物需要设定的退火温度较低

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科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，回答下列问题：

（1）若要体外获得大量的人生长激素基因，可采用PCR技术进行扩增，该技术中，对设计的引物之间的碱基对要求是________________。若该目的基因循环扩增3次，理论上需要消耗________个引物。

（2）在构建基因表达载体过程中，一般情况下质粒和目的基因需用________进行切割。构建的重组质粒上启动子的本质和作用是__________________________________________

（3）将重组质粒通过________法导入小鼠的受体细胞时，常选用受精卵作为受体细胞的原因是_____________________________________________。

（4）人的生长激素基因能在小鼠膀胱上皮细胞中表达的原因是__________。在转基因小鼠体内人的生长激素基因只在膀胱上皮细胞中表达的优点是__________。

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(1)PCR是一种DNA体外扩增技术。1988年，PCR仪问世，并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。如图是PCR技术示意图，请回答下列问题。

①引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段________________________________________________________________。

②将双链DNA________________，使之变性，从而导致____________________________________________________________________。

③引物延伸需提供________________作为原料。

(2)红细胞含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。请回答下列有关问题：

①样品处理，它包括红细胞的洗涤、________、分离血红蛋白溶液。

②收集的血红蛋白溶液在透析袋中经过透析，这就是样品的粗分离。透析的目的是________________。透析的原理是_________________________________________________。

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(1)PCR是一种DNA体外扩增技术。1988年，PCR仪问世，并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。下图是PCR技术示意图，请回答下列问题:

①引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段_　　　 。

②将双链DNA　　　　　 ，使之变性，从而导致　　 __.

③引物延伸需提供　　　　　 作为原料。（1分)

(2)红细胞含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。请回答下列有关问题:

①样品处理，它包括红细胞的洗涤、　　　　　　　　 、收集血红蛋白溶液。

②收集的血红蛋白溶液在透析袋中经过透析，这就是样品的粗分离。透析的目的是　　　　　 。透析的原理是　　　　

③通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是　　　　　　　　　　

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金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过___________获得___________用于PCR扩增。

（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的____________位点。设计引物时需要避免引物之间形成____________，而造成引物自连。

（3）图中步骤1代表变性，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏____________的碱基配对。

（4）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有____________ （填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。

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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。

（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。

（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。

（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度　　 ②降低退火温度　　 ③重新设计引物）。

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（8分）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。

（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。

（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。

（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。

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下列对PCR扩增实验的描述错误的是（    ）

A．实验中通过加热使目的基因DNA解旋，没有加入解旋酶和ATP

B．在设计2种引物时，需要让引物和引物之间的碱基序列互补

C．缓冲溶液中要提供DNA模板、引物、原料、耐热的DNA聚合酶

D．为避免外源DNA污染，实验中的枪头、缓冲液等在使用前必须高压灭菌

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PCR扩增时需考虑高质量的基因组DNA模板以及反应体系中各种成分的优化组合，相关叙述错误的是（　　 ）

A.反应体系中模板DNA的量和纯度影响PCR的成功与否

B.设计引物时需考虑引物的长度、碱基序列和GC含量

C.Taq酶的浓度过低会引起非特异性扩增产物量的增多

D.目标DNA的获得取决于引物在模板DNA上的结合位置

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