尿素作为主要的化肥种类之一，也是一种重要的化工原料。目前处理含尿素废水的方法有3种：化学热...

尿素作为主要的化肥种类之一，也是一种重要的化工原料。目前处理含尿素废水的方法有3种：化学热力学水解法、微生物水解法及脲酶水解法。某研究小组欲从土壤中筛选能高效分解尿素的细菌（目标菌）。回答下列问题。

（1）给农作物施用尿素，主要是为了给植物提供___________元素，过量施用随水土流失后易造成水体污染，这种现象叫水体富营养化。为了筛选能分解尿素的细菌， 在配制培养基时需要添加KH2PO 4和Na2HPO4， 其作用有___________（答出两点即可），运用固定化脉酶技术处理含尿素废水时应采用___________法对脲酶进行固定化。

（2）要从土壤中分离目标菌，关键的实验思路是___________。理由是___________。

（3）为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入酚红试剂，若菌落周围出现___________，可以初步鉴定该种细菌为目标菌，其原理是___________。现上述变化，选出分解尿素能力强的菌种的思路是___________。

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苯酚是重要的化工原料，被广泛应用于酚醛树脂、炼油、焦碳、染料等的生产中，并成为这些工业废水中的主要污染物。水溶液中的苯酚可被皮肤吸收而引起中毒，含酚废水可使水中生物大量死亡。微生物作为废水处理中活性污泥的主体，是有毒物质分解转化的主要执行者。回答下列问题：

（1）欲选出高效分解苯酚的菌株，应从__________中取样，接着在__________（填固体或液体）培养基中选择培养，以增大高效分解苯酚菌的浓度。对培养基进行灭菌处理时，应采用__________法。

（2）某同学采用稀释涂布平板法对高效分解苯酚的菌株进行计数，其原理是__________。

（3）在4个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为103的稀释液0．1mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为：45、108、114和120，因此可得出1mL菌液中的活菌数为__________个。使用血细胞计数板计数时，为了区分活菌和死菌可采用台盼蓝染色，对活菌计数时应选择视野中__________的细胞进行计数。

（4）微生物对苯酚的降解是在酶的参与下完成的，该酶经分离纯化，可用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，该方法可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子的大小，其原因是__________。

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幽门螺旋杆菌（简称Hp）是已知能够在人胃中生存的唯一微生物种类，可引起胃炎、消化道溃瘍等。尿素呼气实验是目前诊断Hp感染准确性最单的方法，受试者口服13C标记的尿素胶囊后，尿素在Hp产生的脲酶作用下水解为NH3和13CO2，通过测定受试者吹出的气体是否含有13CO2作出判断。下列叙述错误的是（　　 ）

A.绝大多数微生物不能在人胃内生存是因为不适应强酸环境

B.检测Hp用了同位素标记法，所用13C对人体应该是无害的

C.脲酶可降低尿素水解反应的活化能

D.Hp细胞内，脲酶需要在内质网和高尔基体中进行加工

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硝基苯酚（PNP)呈黄色，是一种工业污染物，可被微生物降解为无色物质。目前最有前途的处理方法是用高效PNP降解菌处理含PNP的废水。请回答下列问题：

（1）欲获得PNP降解菌，所选用的固体培养基中应加入_______________做为唯一碳源，从功能上看该培养基属于______________培养基。

（2）将含PNP降解菌的培养液接种在此固体培养基止，常釆用的方法有_________________________，PNP降解菌的降解效率可通过___________________鉴别。

（3）实验操作中获得纯净培养物的关键是______________；实验室中常用到的灭菌方法有__________(至少答出两项）。

（4）若某同学培养的菌落数明显低于班级平均值,原因可能是_____________________________。

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水是“生命之源”，其含量随生物种类、植物组织以及外界环境条件的不同而变化。下列有关水的相关描述正确的是

A. 水可作为光合作用和许多有机物水解的原料，但不参与细胞呼吸

B. 代谢较慢的生物体内，其自由水与结合水的比值也应该相对较低

C. 尿液形成中的滤过作用及表示水发生滤过

D. 成熟植物细胞发生质壁分离，与液泡的吸水直接相关

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回答下列(一)、（二）小题：

(一）脲酶是催化尿素分解的特异性水解酶。该酶主要从刀豆等豆科植物提取，现被广泛应用于尿素废水的净化过程。请分析回答以下问题：

(1)脲酶可以催化尿素分解为_______，其中碱性物质可以使酚红指示剂变为______________。

(2)为了提高脲酶的利用效率，可以釆用固定化酶技术将其固定。酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和___________________。

(3)实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是___________________________。

(4)脲酶除了从植物获取外，还可以来源于土壤中的微生物。为了从土壤中分离以尿素为氮源的微生物,采用的分离方法操作最简便的是_____________。下列有关该分离方法的操作叙述错误的是____________。

A.必须使用固体培养基　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

B.必须在酒精灯火焰旁接种

C.必须将接种后的培养皿倒置培养

D.必须将接种前的培养皿、培养基、土壤悬浮液等进行灭菌处理

(二）人血淸蛋白（HSA)具有重要的医用价值。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

(1)如果HSA基因序列未知，可以采用____________的方法获取该目的基因，为了使目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存，通常要先构建_____________后才能导入宿主细胞。

(2)方框中的“？”一般选用的生物是________,为了提高II过程的导入成功率，通常用________处理大肠杆菌。

(3)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性，所以，选择_____途径（填I或II)获取rHSA更有优势。

(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用_____________方法来进行检验。

A.检验HSA莛因是否导入　　　　　　　　　　 B.检验细胞中是否产生相应的mRNA

C.抗原、抗体杂交　　　　　　　　　　　　　　 D.检测是否有标记基因

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脲酶是催化尿素分解的特异性水解酶。该酶主要从刀豆等豆科植物提取，现被广泛应用于尿素废水的净化过程。请分析回答以下问题：

(1)脲酶可以催化尿素分解为_______，其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为______________。

(2)为了提高脲酶的利用效率，可以釆用固定化酶技术将其固定。酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和___________________。

(3)实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是___________________________。

(4)脲酶除了从植物获取外，还可以来源于土壤中的微生物。为了从土壤中分离得到队尿素为氮源的微生物,采用的分离方法操作最简便的是_____________。下列有关该分离方法的操作叙述错误的是____________。

A.必须使用固体培养基　　　　

B.必须在酒精灯火焰旁接种

C.必须将接种后的培养皿倒置培养

D.必须将接种前的培养皿、培养基、土壤悬浮液等进行灭菌处理

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下列有关生物学实验过程中的操作，描述正确的是（　　 ）

A.探究土壤微生物的分解作用时，土壤不做处理的一组为实验组，高温处理的一组为对照组

B.采用样方法来调查某草地植物种类时，需要取各样方的平均值作为调查结果

C.探究酵母菌种群数量变化的实验过程中不需要另外设置对照组

D.探究植物细胞吸水和失水的实验过程中，必须在低倍镜下找到物像后，再换成高倍镜观察

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焚烧和填埋是传统的垃圾处理方式，极易造成环境污染与资源浪费。目前我国正在大力推行垃圾分类管理，对不同种类的垃圾采取不同方式的回收利用，如利用厨余垃圾进行生物堆肥（利用微生物使垃圾中的有机物发生生物化学反应而降解）、生产饲料等，以实现废物的资源化利用。下列有关叙述正确的是（　　 ）

A.可采用样方法对垃圾填埋场中小动物类群的丰富度进行调查

B.垃圾分类管理有利于实现物质的循环再生和能量的循环利用

C.生物堆肥时要充分考虑垃圾性质、引入的微生物种类等因素

D.利用厨余垃圾进行生物堆肥过程中涉及的微生物属于消费者

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生物乙醇是汽油的良好替代品，美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮，不与粮争地”的原则，利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料，其主要技术流程为：

秸秆→秸秆颗粒反应罐水解压滤出渣酒精发酵蒸馏

（1）过程①加入了微生物，其作用是把秸秆颗粒分解。从土壤中获取①所需微生物的过程 称为微生物的_________，选择培养基应以__________为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液用_______法或　　　　　　　　　　　　 法接种到培养基上。

（2）酒精发酵阶段接种的微生物是______________，生产酒精要控制的必要条件是　　　　　　　　 。

（3）在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是________________、__________________。

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