黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人...

黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。

（1）获得CMV的RNA后，需在__________酶的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。

（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌Ti质粒的__________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。

（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员据此确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，你认为他们做出以上判断的理由是____________________。愈伤组织经__________长出小芽后还需要转入__________诱导生根。

（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行__________实验。

（5）研究人员用强致病力的CMV分别感染转基因番茄与__________，通过对照发现转基因番茄具有较好的抗CMV能力。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3 ：1，由此可以得出的结论是____________________；___________________（答出两点）。

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黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。

（1）获得CMV的RNA后，需在___________酶的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。

（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌Ti质粒的　　 ___________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。

（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，愈伤组织经___________长出小芽后还需要转入生根培养基诱导生根。

（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行___________实验。

（5）研究人员用强致病力的CMV分别感染转基因番茄与___________，通过对照发现转基因番茄具有较好的抗CMV能力。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3∶1，由此可以得出的结论是___________；（答出两点）。

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黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。

（1）获得CMV的RNA后，在__________的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。

（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌的__________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。

（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员据此确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，你认为他们做出以上判断的理由是_________________。

（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行____________实验。

（5）若要验证转基因番茄具有较好的抗CMV能力，请写出实验设计思路__________。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3 ：1，由此可以得出的结论是_________（答出两点）。

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基因工程为培育抗病毒植物开辟了新途径，下图为研究人员培育转花叶病毒外壳蛋白基 因（CMV-CP基因，长度为740个碱基对）番茄的主要过程示意图(Kanr为卡那霉素抗性基因)。请回答：

（1）将CMV-CP基因导入番茄细胞后，培育的番茄植株具有抗CMV感染能力，这种现象属于植物的特异性免疫，该免疫过程中抗原是____。

（2）过程①接种的农杆菌细胞中，Kanr及CMV-CP基因应整合在Ti质粒的T-DNA内部，这是由于 __。使用液体培养基培养农杆菌的目的是____。

（3）为确定用于筛选的Kan适宜浓度，研究人员进行实验，结果如右表。最终确定过程③④加入的Kan浓度为35mg·L-1，该浓度既可___，又不至于因Kan浓度过高影响导入重组DNA细胞的生长发育。

（4）过程③、④所需的培养基为 __（填“固体”或“液体”）培养基。过程⑤再生植株抗性鉴定时，引物序列设计的主要依据是_____，引物序列长度及G+C比例直接影响着PCR过程中_______（填“变性”或“退火”或“延伸”）的温度。

（5）过程⑤电泳结果如图，其中l号为标准参照，2号为重组Ti质粒的PCR产物，3-6号为抗性植株DNA的PCR产物，可以确定3—6号再生植株中 ____号植株基因组中整合了CMV-CP基因。

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烟草花叶病毒（TMV）是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因（CP基因）导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：

（1）含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行　　 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有　　 序列。

（2）将CP基因导入土壤农杆菌质粒的　　 ，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前，对烟草叶的处理要求是　　　　　　　　　　　　　 。

（4）共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须　　　　 （有光或避光）。

（5）在配置诱导芽、根的培养基时，要注意在不同的培养阶段需调整　　　 　 　　 的比例。最终检测转基因是否成功，可用　　　　　　 方法进行检测。

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烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：

(1)含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行　　 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有　　 序列。

(2)将CP基因导入土壤农杆菌质粒的　　 ，其原因是__________________________

_________________________________________________________________ 。

(3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养过程中，对烟草叶的处理要求是 ________________________________________。

(4)用含重组质粒的土壤农杆菌感染烟草叶成功后，共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须　　　　　　　　 。

(5)在诱导芽、根的培养基中需添加　　　　　　 才能进行筛选，并要注意在不同的培养阶段需调整　　　　 的比例。

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烟草花叶病毒由RNA和蛋白质外壳组成，主要侵染叶肉细胞，导致叶片出现病斑。某实验小组用烟草花叶病毒感染某种烟草叶片，其光合速率下降，实验结果如下表所示。请回答有关问题：

（1）烟草花叶病毒的蛋白质合成的部位是__________。

（2）依据表格数据与正常叶相比，感染叶叶肉细胞中C3含量__________（填“较高或“较低”），原因是____________________。

（3）现欲探究烟草花叶病毒感染烟草叶片的成分是RNA还是蛋白质。依据题中信息，简要写出两种实验思路（结果预测不作要求）。

思路1：__________________。

思路2：__________________。

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下图中，烟草花叶病毒（TMV）与车前草病毒（HRV）的结构如 A、B，侵染作物叶片的症状如C、D。回答：

（1）E是由A的蛋白质外壳和B的RNA重组的病毒。用E去侵染叶片F时，在叶片F上所患病的症状

与___________相同

（2）F上的病毒，蛋白质外壳是以___________为模板，以___________为场所合成的。

所需的氨基酸、酶和ATP均来自___________。

（3）本实验证明_________________________________

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植物像人一样也会生病，引起植物生病的微生物称为病原微生物，主要有病毒、真菌和细菌等。烟草由于受到烟草花叶病毒的侵染而减产。我国科学家利用基因工程技术成功地培育出抗烟草花叶病毒的烟草。下图是转基因烟草培育过程示意图，据图分析回答下列问题：

(1)质粒是基因工程中常用的载体，质粒是一种裸露的、结构简单、具有自我复制能力的很小的___________分子，至少有一个至多个___________位点。载体除质粒之外还可以用___________、___________等。

(2)基因表达载体导入烟草细胞常用的方法是___________。

(3)作为目的基因载体的质粒往往要带有一个抗生素抗性基因，该抗性基因的作用是____________________________________________。

(4)转基因工程改良动植物品种最突出的优点是___________________。

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（10分）大豆花叶病毒（RNA病毒）是世界性大豆病害，是造成大豆减产的重要原因。某科研小组制备了大豆花叶病毒的空衣壳蛋白（CP蛋白），生产过程大致如下，请回答问题：

（1）图中的①是指　　　　　　　　　　 。

（2）过程II中应用的酶是　　　　　　　　　　　　 。此过程中，先要在大豆花叶病毒的基文库查找　　 的核苷酸序列，以便合成特异性引物。

（3）在上述生产流程中，　　　　　　 （填序号）是基因工程生产CP衣壳蛋白的核心步骤。为检测样液中是否含有有效成分，在VII可使用　　　　　　　　　　 进行检测。

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