某同学在做微生物实验时，不小心把硝化细菌和酵母菌混在一起，他欲通过实验将两种微生物分离。回...

某同学在做微生物实验时，不小心把硝化细菌和酵母菌混在一起，他欲通过实验将两种微生物分离。回答下列问题：

（1）微生物生长所需的营养物质类型除氮源外还有____________________（答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有__________、__________等。

（2）培养基常用__________灭菌；玻璃和金属材质的实验器具常用__________灭菌。

（3）该同学配制了无碳培养基，用于筛选出__________，其实验原理是__________。

（4）在微生物培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑__________（答出两点即可）和渗透压等条件。

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（15分）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起，得到混合菌。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题：

（1）主要步骤：

①制备两种培养基：一种是____________培养基，另一种加__________的培养基。分别分成两份，依次标上A，A’和B，B’，备用。

②分别向A、B培养基中接种____________。

③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。

④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A’、B’培养基中。

⑤接种后，把A’、B’培养基放入恒温箱中培养3～4天。

（2）回答问题：

在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有对培养基进行_______________、将____________在酒精灯火焰上灭菌、接种过程在__________________附近进行。第④⑤两个步骤的目的是获得_______________________________________________。

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某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌（可利用空气中Ｎ２合成含氮有机物）和酵母菌混合在一起，得到混合菌。请你完成得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的分离实验

步骤，并回答有关问题：

（１）主要步骤：

①制备两种培养基：一种是　　　　　　 培养基，另一种是加　　　　　　 的培养基。分别分成

两份，依次标上Ａ，Ａ′和Ｂ，Ｂ′，备用。

②分别向Ａ、Ｂ培养基中接种　　　　　　　　　 。

③接种后，放在恒温箱中培养３～４天。

④分别从Ａ、Ｂ培养基生长良好的菌落中挑取菌种，按照Ａ→Ａ′，Ｂ→Ｂ′的方式进行接种。

⑤接种后，把Ａ′、Ｂ′培养基放入恒温箱中培养３～４天。

（２）回答问题：

在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有：对培养基进行　　　　

　　　　；将　　　　　　　　 在酒精灯火焰上灭菌；接种过程在　　　　　　　　　　 附近进行。

第④⑤两个步骤的目的是获得　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　。

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某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

（1）实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。

（2）材料用具：（略）

（3）实验步骤

①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。

②____________________________________，并在25℃条件下培养_____天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。

（4）请问答

①对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_________________。

②本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是_____培养基，B、b是_______培养基，根据上述原理配制的培养基属于_____培养基。

③根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意_________。

④实验步骤中第③步的目的是___________。

⑤圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为______________。

⑥青霉素抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是______________。

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某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起，请你设计实验分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

(1)实验原理：

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)材料用具：配制培养基所需要的各种原料、无菌操作箱、接种环等。

(3)简述主要步骤：

①制备两种培养基，一种是________培养基；另一种是________培养基。分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用。

②分别向A、B培养基中接种混合菌。

③接种后，放在恒温箱中培养3～4 d。

④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌，分别接种到a、b培养基中。

⑤接种后，把a、b培养基再放入恒温箱中培养3～4 d。

(4)实验结果：在a、b培养基上获得的分别是________、________。

(5)回答问题：

步骤④、⑤的目的是

________________________________________________________________________。

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某校生物兴趣小组的同学对洞庭湖水体中的微生物种类进行了调查，并且分离出了一种能分解芦苇纤维素茎秆的细菌，对细菌培养后进行了计数，请据所学知识回答下列问题：

(1)培养基中一般含有微生物生长所需的水、无机盐、____________等；培养基灭菌时采用的方法是______________________，接种时要对接种环进行__________。

(2)从众多细菌中筛选出能分解芦苇纤维素的细菌，应选择以________________________的培养基，对芦苇纤维素分解菌计数时，常采用的方法是　 ______________。

(3)当芦苇纤维素分解菌数量较少时，可采用________增加其数量；在稀释度数为106倍下涂布了三个平板(每次取0.1　 mL)，统计菌落数分别为240、250、260，则稀释前1　 mL菌液中所含细菌数为________个。

(4)获取芦苇纤维素分解菌后如要临时保存，可将其接种在______________________上，等长出菌落后放在______的冰箱中保存。

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请回答下列有关微生物的问题。

（1）在微生物分离、鉴定实验中，通常在配置固体培养基时需在培养基中加入___（物质）。

（2）采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿____培养。

（3）下表为探究抗生素对微生物抑制作用的实验处理。先将大肠杆菌接种于培养基上，然后将培养皿置于37℃条件下培养2~3天，观察、测量并记录_______________情况。如果实验所用抗生素的浓度关系为A< C < B，则编号1、2、3、4的抑菌效果从大到小依次为__________________________________。

编号	1	2	3	4
圆纸片   实验处理	圆纸片浸在
浓度A抗生素	浓度B抗生素	浓度C抗生素	蒸馏水

（4）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。

根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是________。

（5）某同学在做微生物实验时，不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起，请你帮助该同学完善实验步骤，将自生固氮菌和酵母菌分离开来：

①制备两种培养基，对两种培养基的处理方式分别是：一种是，另一种是 ________，将两种培养基各自分成两份，依次标上A，a和B，b。

②分别向A、B培养基中接种 ________菌，适宜条件下培养3-4天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中，适宜条件下培养3-4天。其目的是 ________ 。

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（9分）请回答下列有关微生物的问题。

（1）在微生物分离、鉴定实验中，通常在配置固体培养基时需在培养基中加入___（物质）。

（2）采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿____培养。

（3）下表为探究抗生素对微生物抑制作用的实验处理。先将大肠杆菌接种于培养基上，然后将培养皿置于37℃条件下培养2~3天，观察、测量并记录_______________情况。如果实验所用抗生素的浓度关系为A< C < B，则编号1、2、3、4的抑菌效果从大到小依次为__________________________________。

编号	1	2	3	4
实验处理	圆纸片浸在
浓度A抗生素	浓度B抗生素	浓度C抗生素	蒸馏水

（4）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。

根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是________。

（5）某同学在做微生物实验时，不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起，请你帮助该同学完善实验步骤，将自生固氮菌和酵母菌分离开来：

①制备两种培养基，对两种培养基的处理方式分别是：一种是，另一种是 ________，将两种培养基各自分成两份，依次标上A，a和B，b。

②分别向A、B培养基中接种 ________菌，适宜条件下培养3-4天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中，适宜条件下培养3-4天。其目的是 ________ 。

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自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答有关问题。

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_______________________的培养基进行分离，这种培养基属于______培养基（按功能分类）。可在培养基中加入_________指示剂对该类微生物鉴别。

（2）若取土样6g，应加入_______mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101～107不同浓度的土壤溶液。将103～107倍的稀释液分别吸取0.2mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接种方法称为_______________。将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计菌落数，结果如下表，其中_______倍的稀释比较合适，由此计算出每克土壤中的菌落数为__________ 。这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目_______（低/高）。

（3）若研究尿素分解菌的群体生长规律，可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_______________________。将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行计数。若以一个大方格（体积为0.1mm3）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102 ，那么原菌液的菌群密度为________个/mL。

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自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答有关问题。

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_______________________的培养基进行分离，这种培养基属于______培养基（按功能分类）。可在培养基中加入_________指示剂对该类微生物鉴别。

（2）若取土样6g，应加入_______mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101～107不同浓度的土壤溶液。将103～107倍的稀释液分别吸取0.2mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接种方法称为_______________。将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计菌落数，结果如下表，其中_______倍的稀释比较合适，由此计算出每克土壤中的菌落数为__________ 。这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目_______（低/高）。

（3）若研究尿素分解菌的群体生长规律，可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_______________________。将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行计数。若以一个大方格（体积为0.1mm3）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液的菌群密度为________个/mL。

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