白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的...

白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。

（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用_____________________技术，但前提是必须知道基因的已知序列，目的是__________________________________________。

（2）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________________处理酵母菌，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_____________________。在表达过程中，启动子需与_____________________识别和结合，从而驱动转录过程。

（3）在体液免疫过程中，白细胞介素是由_____________________细胞分泌的，为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。

（4）在分泌型表达载体和白细胞介素基因所在的DNA分子上均有多个限制酶的酶切位点，图示过程获得有效表达的重组栽体使用了EcoRl和EcoR52两种限制酶，比使用单一的限制酶，其优点是__________________________________________。

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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母菌细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。

（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用___________________技术，但前提是必须知道该基因的部

分核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________________。

（2）为便于鉴别受体细胞中是否含有外源基因，携带外源基因的质粒上应有___________，还应有____________________，以利于外源基因的表达。

（3）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________处理酵母菌细胞，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_________。在表达过程中，启动子需与____________________识别和结合，从而驱动转录过程。

（4）为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。

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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母菌细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。

（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用___________________技术，但前提是必须知道该基因的部

分核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________________。

（2）为便于鉴别受体细胞中是否含有外源基因，携带外源基因的质粒上应有___________，还应有____________________，以利于外源基因的表达。

（3）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________处理酵母菌细胞，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_________。在表达过程中，启动子需与____________________识别和结合，从而驱动转录过程。

（4）为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。

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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的人白细胞介素。

（1）目的基因获取和扩增：

①从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37℃培养48h，提取细胞总RNA，经　　　　　　　　 作用生成cDNA。

②根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是　　　　 （至少写出两种）。

（2）重组载体的构建：由图中可知：酶切载体和目的基因用的是___________酶，经DNA连接酶处理，形成重组载体。重组载体的化学本质是　　　　　　　　

（3）将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人的白细胞介素对于　　　　　　　　 的作用。

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（18分）白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性人白细胞介素。

（1）在体液免疫过程中，白细胞介素是由＿＿＿细胞分泌的，可作用于受到抗原刺激的B细胞，使B细胞增殖，分化、形成＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿细胞。

（2）目的基因获取：从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37°C培养48h，提取细胞总RNA，生成eDNA。根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成eDNA时所加反应物不同的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 。

（3）重组载体的构建：用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿酶处理，形成重组载体。该载体与细胞膜上载体的化学本质分别是＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。

（4）将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，收集菌液离心取＿＿＿＿＿＿（上清液/菌体）进行产物鉴定。若要统计培养液中酵母菌的活菌数目，常用的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（5）利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人白细胞介素对于＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 的作用。

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人白细胞介素是一种重要的免疫活性调节因子。科研人员将人白细胞介素基因导入衣藻细胞的叶绿体基因组中并高效表达，该技术被称为叶绿体基因工程。请回答下列问题：

（1）质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒作为运载体须具备的条件是___________（需答出两点）。基因工程的操作工具中，除了运载体外，还需要___________。

（2）在构建基因表达载体时,应将目的基因插入______________________之间，表达载体上标记基因的作用是___________。

（3）植物叶肉细胞中能使目的基因表达的细胞器除了叶绿体外还有____________。从基因工程与环境安全的角度分析，叶绿体基因工程的优点是____________。

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人外周血单核细胞能合成白细胞介素-2（IL-2）。该蛋白为淋巴因子，可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，在酵母菌中表达出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白。技术流程如图。请回答：

（1）从健康人外周血分离得到的单核细胞，应置于________气体环境中，并在适宜温度和pH条件下培养48h。培养液中通常要加________等天然成分。提取细胞总RNA生成cDNA。图中PCR过程的模板是________，该过程使用的酶是________。

（2）表达载体1中的位点a应含有图中________酶的识别序列，才能成功构建表达载体2。

（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有________密码，才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白。

（4）将表达载体2导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后离心，取________（上清液／菌体）进行产物鉴定。鉴定方法是________。

（5）若希望白细胞介素-2（IL-2）在体内不易被降解，则需要通过________工程手段对合成白细胞介素-2的相关目的基因进行设计，该工程是一项难度很大的工程，目前成功的例 子不多，主要原因是________。

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白细胞介素是人体重要的淋巴因子，具有免疫调节、抑制肿瘤等多种功能。近年来科学家将药用蛋白转向植物生产，如图是将人的白细胞介素基因导入马铃薯中，培养生产白细胞介素的过程。（tsr为一种抗生素—硫链丝菌素的抗性基因）

（1）提取人的白细胞介素基因适宜选用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。

（2）除图示方法外，也可从利用___________法构建的cDNA文库中获取目的基因。获得目的基因后可采用PCR技术大量扩增，需提供Taq酶和___________等。

（3）将目的基因导入马铃薯细胞常采用___________法，其原理是将目的基因导入Ti质粒上的___________。

（4）为筛选出含目的基因的马铃薯细胞，需要在培养基中添加___________。最终为了检测目的基因是否在马铃薯中表达，可通过____________方法进行分子水平的检测。

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将人体基因X表达载体导入T细胞，可促进T细胞的增殖分化，促进淋巴因子分泌，增强效应T细胞的杀瘤活性。回答下列问题。

（1）基因工程中使用的载体，除质粒外，还有________________、________________等。

（2）构建的基因X表达载体的组成有基因X、复制原点、________________（答出3点）等，将基因X表达载体导入T细胞常采用的方法是________________。

（3）检测基因X在T细胞中是否翻译出蛋白X，可采用__________法，若出现__________，则成功翻译。

（4）研究表明，正常机体T细胞导入基因X表达载体后抗体数量明显增多，原因是____________。

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[生物——选修3：现代生物科技专题]癌胚抗原（CEA）是一种位于肿瘤细胞膜表面的蛋白，白细胞介素（IL-2）是一种淋巴因子。研究人员利用质粒plRES、CEA基因、IL-2基因，分别构建了重组质粒plRES-CEA、plRES-IL-2和plRES-CEA- IL-2。将实验小鼠分成6组，每隔5天进行一次肌肉注射，共3次。最后一次注射完成7天后，检测小鼠体内CEA含量、NK细胞（即自然杀伤细胞，可杀伤肿瘤细胞，而不破坏自身组织细胞）活性等指标，结果如下表。

请回答问题：

（1）构建重组质粒需要用到的工具酶有　　　　　　　　 　　　 。要保证重组质粒能够在细菌中大量扩增，重组质粒必须具有　　　　　　 　　　　　　 。

（2）注射plRES-CEA- IL-2后，小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过　　　　　　 和　　　　　　　 形成的。

（3）NK细胞的活性不依赖于抗原刺激，能自发地溶解多种肿瘤细胞和被病毒感染细胞，属于人体免疫的第　　　　　　 道防线。

（4）从实验结果看，第　　　　 组具有最好的特异性免疫效果。对比第3组和第　　　　　　 组结果可以说明IL-2有促进　　　　　　　　　　　　　　 的作用。

（5）第1，2，4组小鼠均可产生CEA抗体，各组之间无显著性差异，但与第3组、空载体及空白对照组相比有显著性差异，说明　　　　　　　　　　　　 。

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