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人白细胞介素是一种重要的免疫活性调节因子。科研人员将人白细胞介素基因导入衣藻细胞的叶绿体基因组中并高效表达，该技术被称为叶绿体基因工程。请回答下列问题：
（1）质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒作为运载体须具备的条件是___________（需答出两点）。基因工程的操作工具中，除了运载体外，还需要___________。
（2）在构建基因表达载体时,应将目的基因插入______________________之间，表达载体上标记基因的作用是___________。
（3）植物叶肉细胞中能使目的基因表达的细胞器除了叶绿体外还有____________。从基因工程与环境安全的角度分析，叶绿体基因工程的优点是____________。
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（18分）白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性人白细胞介素。
（1）在体液免疫过程中，白细胞介素是由＿＿＿细胞分泌的，可作用于受到抗原刺激的B细胞，使B细胞增殖，分化、形成＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿细胞。
（2）目的基因获取：从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37°C培养48h，提取细胞总RNA，生成eDNA。根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成eDNA时所加反应物不同的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 。
（3）重组载体的构建：用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿酶处理，形成重组载体。该载体与细胞膜上载体的化学本质分别是＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
（4）将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，收集菌液离心取＿＿＿＿＿＿（上清液/菌体）进行产物鉴定。若要统计培养液中酵母菌的活菌数目，常用的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（5）利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人白细胞介素对于＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 的作用。
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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。
（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用_____________________技术，但前提是必须知道基因的已知序列，目的是__________________________________________。
（2）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________________处理酵母菌，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_____________________。在表达过程中，启动子需与_____________________识别和结合，从而驱动转录过程。
（3）在体液免疫过程中，白细胞介素是由_____________________细胞分泌的，为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。
（4）在分泌型表达载体和白细胞介素基因所在的DNA分子上均有多个限制酶的酶切位点，图示过程获得有效表达的重组栽体使用了EcoRl和EcoR52两种限制酶，比使用单一的限制酶，其优点是__________________________________________。
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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母菌细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。
（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用___________________技术，但前提是必须知道该基因的部
分核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________________。
（2）为便于鉴别受体细胞中是否含有外源基因，携带外源基因的质粒上应有___________，还应有____________________，以利于外源基因的表达。
（3）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________处理酵母菌细胞，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_________。在表达过程中，启动子需与____________________识别和结合，从而驱动转录过程。
（4）为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。
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白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母菌细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。
（1）为增加白细胞介素基因的数量，可使用___________________技术，但前提是必须知道该基因的部
分核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________________。
（2）为便于鉴别受体细胞中是否含有外源基因，携带外源基因的质粒上应有___________，还应有____________________，以利于外源基因的表达。
（3）在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用_____________处理酵母菌细胞，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为_________。在表达过程中，启动子需与____________________识别和结合，从而驱动转录过程。
（4）为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因是_____________________。
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抗菌肽通常是由短氨基酸序列构成的小分子肽，具有广谱抗菌活性，对病毒和癌细胞都有一定的杀伤力，科研人员将抗菌肽基因导入大肠杆菌细胞内获得了能高效表达抗菌肽的工程菌。请回答下列问题。
（1）利用PCR技术扩增抗菌肽基因时，设计的引物之间不能________，以避免引物自连。反应体系中，使模板DNA解旋的操作方法是________，加入的Taq酶所起的作用是________。
（2）大肠杆菌含有许多蛋白酶，在制备抗菌肽目的基因表达载体时宜选用分泌型载体。分泌型载体能将抗菌肽在信号序列的指引下运出细胞外，使用分泌型载体的突出优点是________。将基因表达载体导入大肠杆菌前，需要用________处理大肠杆菌制备________细胞。
（3）抗菌肽本身对大肠杆菌具有一定的杀伤性，对抗菌肽的分子构造进行改造，可得到对大肠杆菌杀伤性小的抗菌肽，该改造技术直接改造的对象是________。
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白细胞介素是人体重要的淋巴因子，具有免疫调节、抑制肿瘤等多种功能。近年来科学家将药用蛋白转向植物生产，如图是将人的白细胞介素基因导入马铃薯中，培养生产白细胞介素的过程。（tsr为一种抗生素—硫链丝菌素的抗性基因）
（1）提取人的白细胞介素基因适宜选用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。
（2）除图示方法外，也可从利用___________法构建的cDNA文库中获取目的基因。获得目的基因后可采用PCR技术大量扩增，需提供Taq酶和___________等。
（3）将目的基因导入马铃薯细胞常采用___________法，其原理是将目的基因导入Ti质粒上的___________。
（4）为筛选出含目的基因的马铃薯细胞，需要在培养基中添加___________。最终为了检测目的基因是否在马铃薯中表达，可通过____________方法进行分子水平的检测。
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鸡干抗素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①-④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_____________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了______________和_____________序列，以便于后续的剪切和连接。
(2)步骤②所构建的基因表达载体中末标注出的必需元件还有_______________________，步骤③中需先用__________________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是_________________________。
(4)用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数(植物受病毒侵染的严重程度)为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79，说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有_______________________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是_________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了________和________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是：Ti质粒内，每种限制酶有________个切割位点，酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列_______(相同/不相同)
(2)步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有________，步骤③中需先用________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
(3)步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是________________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）表格中的限制酶EcoRⅠ切割DNA分子后形成的黏性末端是_________________。
（2）步骤①是利用PCR技术扩增鸡干扰素基因，进行PCR的前提是___________。
（3）图中选用两种限制酶分别处理鸡干扰素基因和农杆菌Ti质粒，这样做的优点有_________。
（4）步骤②所构建的基因表达载体中启动子的作用是 ____________。
（5）步骤③中需先用____________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（6）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过逆转录获得DNA，再通过PCR扩增制备探针，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________________。
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