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回答下列有关基因工程的问题。（14分）
（1）．基因工程中使用的限制酶，其特点是________。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
（2）．将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有________。（可多选）
A．X－1 B．X－2 C．X－3 D．X－4
（3）．若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有________。
（4）．如果X－1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X－2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为________对碱基。
（5）．若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的X－1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X－4的细胞数与含X－1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？________。原因是________。
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回答下列有关基因工程的问题。
(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）
A．X－1
B．X－2
C．X－3
D．X－4
(3)若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
(4)如果X－1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X－2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为＿＿＿＿＿＿＿＿＿对碱基。
(5)若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的X－1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X－4的细胞数与含X－1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
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分析有关基因工程的资料，回答问题。（8分）
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
58、一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后，含有________个游离的磷酸基团。
59、用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是
。
60、为了获取重组质粒，应将________与________混合，并加入________酶。
61、重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。
62、若外源DNA中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则其连续复制4次，至少需要提供胸腺嘧啶________个。
63、利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可能直接饮用治病。如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于________。
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回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。（9分）
如图A所示，质粒pZHZ9上含有X抗生素抗性基因（XR）和Y抗生素抗性基因（YR）。其中XR内部含有限制酶KasI识别序列，YR内部含有限制酶FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV识别序列，五种酶的识别序列如图B（▼表示切割位点），且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列。
（1）若要将结构如图C所示的目的基因直接插入到YR内形成重组质粒pZHZ10，则pZHZ9需用限制酶_____切开。
（2）将上述切开的质粒溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作。之后，受体细胞的类型（对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S）包含_____（多选）。
A．XR、YR B．XR、YS C．XS、YR D．XS、YS
（3）若用KasI和FseI联合酶切重组质粒pZHZ 10（只含单个目的基因），则可能产生的酶切片段数为____（多选）。
（4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是________。
A．受精卵能使目的基因高效表达 B．受精卵可发育成动物个体
C．受精卵基因组更易接受DNA的插入 D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
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[生物——选修3:现代生物科技专题]质粒常作为基因工程的运载体，下图为某质粒及限制酶酶切图谱，Ampr为氨苄青霉素抗性基因。请回答下列问题：
(1)在基因工程中使用的载体除质粒外，还包括_________、______________。
(2)若将人生长激素基因插入到该质粒中，应该选用限制酶__________对质粒进行切割。不能用HindⅢ酶切割质粒的原因是______________。
(3)质粒中Ampr的化学本质是___________，其作用是___________________________。
(4)常用___________技术将重组质粒导入动物的受精卵中。
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根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和 ．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 ．
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶．
（4）反转录作用的模板是 ，产物是 ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术．
（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体．
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 ．
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根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和 ．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 ．
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶．
（4）反转录作用的模板是 ，产物是 ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术．
（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体．
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 ．
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将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、 耐酸的醋酸菌，用于果醋生产。请分析回答下列问题：
（1）对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过 酶连接形成重组质粒。
为获得耐酸的醋酸菌，用 法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选。将筛选纯化的菌种用
的方法长期保存。
（2）下图表示温度、乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响。
①醋酸菌能将乙醇转变为 ，再将其转变为醋酸。
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为 ℃，如温度过高，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是 。
③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到 左右才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是 。
（3）为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释100倍后，分别取0．1mL稀释菌液均匀 涂布在4个平板上；经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为 个/mL。
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将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产。请分析回答下列问题：
（1）对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过 酶连接形成重组质粒。 为获得耐酸的醋酸菌，用 法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选。将筛选 纯化的菌种用 的方法长期保存。
（2）下图表示温度尧乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响。
② 醋酸菌能将乙醇转变为 ，再将其转变为醋酸。
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为 ℃，如温度过高， 醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是 。
③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到 左右 才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是 。
（3）为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1mL稀释菌液均匀 涂布在4个平板上曰经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为124、139、140、141，据此可得 出每毫升发酵液中的活菌数为 个/mL。
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下图表示利用基 因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：
（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别下列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶Ⅱ切割质粒，用限制酶Ⅰ切割抗虫基因，这样处理的原因是________ 。 ①过程在________（体内/体外）进行。
（2）将通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有________的培养基上，能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。
（3）在基因操作中，将重组质粒导入大肠杆菌的目的是________。
（4）经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，并表现出抗虫性状，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的________。（5）⑤过程所用技术称为 ，从遗传 学角度来看，根本原因是根细胞具有 ________。
