[生物——选修3:现代生物科技专题]质粒常作为基因工程的运载体，下图为某质粒及限制酶酶切图...

[生物——选修3:现代生物科技专题]质粒常作为基因工程的运载体，下图为某质粒及限制酶酶切图谱，Ampr为氨苄青霉素抗性基因。请回答下列问题：

(1)在基因工程中使用的载体除质粒外，还包括_________、______________。

(2)若将人生长激素基因插入到该质粒中，应该选用限制酶__________对质粒进行切割。不能用HindⅢ酶切割质粒的原因是______________。

(3)质粒中Ampr的化学本质是___________，其作用是___________________________。

(4)常用___________技术将重组质粒导入动物的受精卵中。

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[生物——选修3：现代生物科技专题]下图表示利用羊生产抗凝血酶的过程，图中ampR表示氨苄青霉素抗性基因，tetR表示四环素抗性基因，BamH I、Hind Ⅲ、Sma I为三种限制酶及酶切位点，据图回答问题：

（1）通常采用_______技术来扩增获得抗凝血酶基因，其原理是_________，需要_______酶。据图分析，可将目的基因插入________抗性基因中。

（2）质粒的化学本质是______，除质粒外，还有______（至少写出两种）也可以充当载体。

（3）过程①可采用______的方法将重组质粒导入羊受精卵中，可采用_____技术来检测抗凝血酶基因是否转录成功。

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【选修3：现代生物科技专题】

人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：

（1）①过程常采用的方法是_____________________________。

（2）构建基因表达载体时，需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和__________________ 之间，这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达。

（3）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是___________。

（4）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含________________ （填“四环素”或“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_____________。

（5）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为__________________________，对于该部位，这两种酶_____________________（“都不能”或“只有一种能”）切开。

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[生物——选修3:现代生物科技专题]

下图1所示为用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因及其上DNA片段示意图；图2所示为三种质粒示意图。图中AP为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。EcoRⅠ、PvuⅠ等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，是指质粒在受体细胞中复制时的起点。

（1）组成片段D的基本骨架与细胞膜的基本骨架相同的元素是___________。

（2）图2中质粒A、质粒C能否作为目的基因运载体最理想的质粒？_________　　 (填“能”或“否”），请说明理由________________。　　

（3）重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅在10-7，用质粒B构建重组质粒，为了筛选出导入了重组质粒的大肠杆菌，在导入完成后，将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是____________，可能性最大的是_____________。

（4）若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需要将重组质粒导入至山羊的_________（细胞）中。

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【生物—选修3：现代生物科技专题】下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有_________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。

（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了____________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。

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【生物—选修3：现代生物科技专题】下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有_________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。

（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了____________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。

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生物·选修3：现代生物科技专题

科研人员将病毒外壳蛋白(CP)基因转移到甜椒体内，培育出的抗病毒甜椒具有很好的抗病毒效果。请回答下列有关抗病毒甜椒培育过程的问题：

(1)获取含氨苄青霉素抗性基因的质粒：先在含_________________的培养基上培养细菌，然后从菌体中分离出含氨苄青霉素抗性基因的质粒。

(2)获取CP基因：从感染病毒的植物体内获得_____，然后用反转录的方法获得___（填“基因组”或“cDNA”）文库。基因组文库与cDNA文库相比，两者最显著的区别是____。

(3)构建基因表达载体：经反转录获得的目的基因的两端是平末端，需要用________连接酶将其与含平末端的载体连接。

(4)导入受体细胞：甜椒为双子叶植物，科研人员常用__________法导入，然后将受感染的组织细胞培育成愈伤组织，再经___________培育成转基因甜椒。

(5)目的基因的裣测与鉴定：目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键___________。

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【生物一选修3:现代生物科技专题】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是________________。

（2）在构建重组质粒时，应选用__________和__________两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否己含有目的基因？

__________(是/否)。为什么？_________________________________________________。

（4）愈伤组织经__________形成完整植株，这一过程需要再转接到___________培养基上进行培养，该过程的实质是__________________。

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（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图，图二为质粒限制酶酶切图谱。鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列，Ampr为抗氨苄青霉素基因，其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）获取鱼的抗冻蛋白基因途径主要有　　　　　 。为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的　　　　　 之后 。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的　　　　　 过程。

（2）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。该酶的特点　　　 。在此实例中，应该选用限制酶　　　　　 切割。

（3）要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有　　　　　 作为标记基因。

（4）研究人员通常采用　　　　　 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用　　　　　 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

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基因工程需要用到多种工具，质粒就是一种常见的工具——运载体，某一质粒载体如图所示,外源DNA插入Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后,与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应。

（1）用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果可能将会得到___类大肠杆菌（大致类型，不进行数量、基因长度区分）。

（2）要筛选导入了含有目的基因的重组质粒的大肠杆菌，其特点是能抗_____而不能抗_____；要挑选出目的菌，必须在___（物理性质）培养基上进行。

（3）图中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点,经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被______酶切后的产物连接,理由是_________。

（4）重组质粒导入动物细胞方法一般是______，最后该动物细胞生长发育为转基因动物,进入泌乳期后,可以通过分泌乳汁来生产所需要的药品,这些药品的化学本质大多为。

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