荧光定量 PCR 技术可定量检测样本中某种 DNA 含量,其原理是：在PCR反应体系中每加...

荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是：在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。相关叙述错误的是（　　 ）

A.引物与探针均具特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则

B.Taq酶可以催化子链沿着5'→3'方向延伸，需dNTP作为原料

C.反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关

D.若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因的转录水平

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荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是：在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。相关叙述错误的是（　　 ）

A.引物与探针均具特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则

B.Taq酶可以催化子链沿着3'→5'方向延伸，需dNTP作为原料

C.若循环次数相同则反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关

D.若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因的转录水平

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荧光定量 PCR 技术可定量检测样本中某种 DNA 含量,其原理是：在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当 Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。相关叙述错误的是（　　 ）

A.引物与探针均具特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则

B.Taq 酶可以催化子链沿着 3'→5'方向延伸，需 dNTP 作为原料

C.反应最终的荧光强度与起始状态模板 DNA含量呈正相关

D.若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因的转录水平

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荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。相关叙述错误的是（　　 ）

A.引物与探针均具特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则

B.反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关

C.若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因的转录水平

D.Taq酶催化DNA的合成方向总是从子链的3’端向5’端延伸

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2019年底，新型冠状病毒肺炎（COVID-19）爆发，其病原体与2003年引起SARS爆发的冠状病毒相似，世界病毒学会将其定名为SARS-COV-2。目前已有累计超过450万人被确诊，死亡人数超过30万人，这一数字仍在快速增长。目前核酸检测依然是患者临床确诊和康复出院的重要依据。请回答：

（1）下图表示SARS-CoV-2病毒检测的部分流程。科学家以病毒的RNA为模板通过①_______过程合成cDNA，再对cDNA进行PCR扩增，这项技术称为RT-PCR。

（2）进行RT-PCR需要加入的酶是__________________，要从cDNA中扩增出新冠病毒特有的基因序列ORF1ab和核壳蛋白基因N关键在于要加入__________、dNTP及所需的酶一起构成反应体系。

（3）RT-PCR加入Taqman荧光探针可以通过测定荧光强度来检测产物浓度，原理如下：Taqman荧光探针为一段与_____________互补的核苷酸单链，两端分别连接一个荧光基团R和一个淬灭基团Q。探针结构完整时，R发射的荧光被Q吸收；而PCR扩增时结合在模板链上的探针被切断，使R和Q分离，R基团发射的荧光不被淬灭，这样通过对荧光信号强弱的监测就可实现对产物的检测。一个DNA经PCR技术扩增n次，需要消耗引物_________个。

（4）一次核酸检测历时需16小时，为快速检测可采用抗原-抗体杂交技术，这一技术的关键是要生产出能与新冠病毒结合的特异性抗体．请写出生产这种抗体的思路：____________________________________________________________。

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实时荧光RT-PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是：在PCR复性过程中探针 和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发岀的淬灭基团，新链 延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发岀荧光。利用 RT-PCR进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是（　　 ）

A.RT-PCR技术需要用到逆转录酶和Taq酶

B.PCR过程中需加入两种引物和4种dNTP

C.引物和探针都需与目的基因进行碱基互补配对

D.若检测结果没有荧光发岀，说明被检测者感染了病毒

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目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如图所示。下列说法错误的是（　　 ）

A.与该mRNA结合的引物，可以是A也可以是B

B.引物A与引物B的基本单位都是脱氧核苷酸

C.过程Ⅱ通过控制温度的变化实现目标序列的循环扩增

D.该反应体系中应加入逆转录酶、Taq酶等物质

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利用PCR技术可以快速扩增特定基因，下列有关PCR技术的叙述正确的是

A.需要加入解旋酶使模板DNA序列解旋

B.需要不断加入作为引物的核苷酸序列

C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应体系中

D.反应必须在相对稳定的温度条件下进行

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新型冠状病毒是一种单链 RNA 病毒，新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光 PCR 鉴定。

（1）首先，从样本中提取病毒RNA，经_____酶作用生成cDNA。然后以cDNA为模板 进行实时荧光PCR扩增，测定样品中病毒核酸量。

（2）通过实时荧光PCR扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针（一小段单链DNA，可与目的基因中部序列特异性结合）。当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到（如图 1）。

① 当样本中有目的基因时，引物和探针与目的基因退火，通过形成_____而特异性结合。

② 在 PCR 循环的_____阶段，TaqDNA 聚合酶催化子链的合成并水解探针。检测到的荧光强

（3）在通过实时荧光 PCR 检测新型冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图 2 所示。

① 与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，原因有_____。

② Ct 值的含义：在 PCR 扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。因此，当样本中初始模板越多时，Ct 值就_____。

③ 某新型冠状病毒核酸检测说明书标明，Ct≤37 判定为阳性，Ct>40 或无 Ct 值判定为阴性。图 2 所示新型冠状病毒核酸检测结果应判定为_____。

（4）阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染。可能产生假阴性的因素有_____。

a．取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光 PCR 检测阈值

b．样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解

c．病毒发生变异

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新型冠状病毒的检测可以采用实时荧光RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）的方法，RT-PCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是（　　 ）

A.过程①以mRNA为模板合成单链DNA

B.过程②③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上需要n个引物B

C.该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度

D.游离的脱氧核苷酸只能从引物的3＇端开始连接

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