酵母菌细胞壁的主要成分是几丁质。酿酒酵母产酒精能力强，但没有合成淀粉酶的能力；糖化酵母能合...

酵母菌细胞壁的主要成分是几丁质。酿酒酵母产酒精能力强，但没有合成淀粉酶的能力；糖化酵母能合成淀粉酶，但酒精发酵能力弱。科研人员通过两种途径改良酵母菌种，实现以淀粉为底物高效生产酒精的目的。下列叙述正确的是

A. 途径Ⅰ需用纤维素酶处理酵母菌，再利用PEG诱导融合

B. 途径Ⅱ需要以淀粉酶基因作为目的基因构建表达载体

C. 途径Ⅰ和途径Ⅱ最终获得的目的酵母菌染色体数目相同

D. 以淀粉转化为还原糖的效率作为最终鉴定目的菌的指标

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）我国南方多地有利用糯米制作红曲酒的传统。其基本过程是大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用酿酒酵母进行酒精发酵得到新鲜红曲酒。回答下列问题

（1）蒸煮大米的目的除了使淀粉糊化和挥发掉杂味外，还具有_________作用。落缸之前通常需要用________对菌种进行活化，并需对蒸煮过的米饭进行________处理。

（2）红曲霉富含淀粉酶和蛋白酶，其分泌的淀粉酶和蛋白酶水解大米中的淀粉和蛋白质分别为酿酒酵母提供________。

（3）红曲酒的产量受发酵条件的影响，同时还与________（答2点即可）有关。

（4）若要长期保存红曲酒，需要将红曲酒加热煮沸，其目的是________，因此煮沸后应该________装坛保存，原因是________。

（二）回答下列与培育转基因大豆有关的问题

（1）若要获得未知序列的抗虫基因，可从________中获取。形成重组DNA时，若目的基因反向插入会引起目的基因反向表达和________。为了避免目的基因的反向插入，可选择使用________的两种限制性核酸内切酶。

（2）利用农杆菌将目的基因导入大豆细胞所选用的农杆菌菌液浓度不能过大的原因是________。若选择显微注射法导入目的基因，需要将目的基因注射到大豆细胞的________。利用显微注射导入的目的基因整合到受体细胞的基因组中，具有________（答出2点即可）等特征。

（3）大豆外植体经培养基中适当配比的________的诱导，发生脱分化形成愈伤组织，再分化可形成再生植株。若愈伤组织中缺乏________，将无法再生形成植株。

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某酒厂把糖化后的淀粉加入发酵罐，接种酵母菌后，酒精产量明显减少，检测发现发酵罐密闭不严，试分析反应的其他结果是

A. 酵母菌量减少

B. 糖化淀粉的消耗量减少

C. CO2的释放量减少

D. 酵母菌量、CO2的释放量、糖化淀粉的消耗量都增加

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）酿酒酵母代谢类型是　　　　　 无氧呼吸的反应式为　　　　　　　　　　　　　　　

（2）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用　　　　　 法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。在葡萄酒酿造过程中，葡萄也需要冲洗，其主要目的是　　　　　　　　　　 。

（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到　　　　　 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经PCR技术获得目的基因，PCR技术获得同一种目的基因的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（5）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）酿酒酵母代谢类型是　　　　　 无氧呼吸的反应式为　　　　　　　　

（2）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用　　　　　 法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。在葡萄酒酿造过程中，葡萄也需要冲洗，其主要目的是　　　　　　　　　　 。

（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到　　　　　 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经PCR技术获得目的基因，PCR技术获得同一种目的基因的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（5）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

(1)为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________。

(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到____℃左右时，才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。

(4)取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min，再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是__________________________________________。

(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方，请指出其中的明显不足之处________。

(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能____________________，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

（1）为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿　　　　　　 。右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是 　　　　　　 。

（2）在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同　　　　 一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

（3）用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你可以用　　　　　　 办法来估计培养基的此温度。

（4）取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0．1%　　　　　 水溶液中进行表面消毒5min，再用　　　　 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序是依次是　　　　　 。（用编号表示）。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配置的培养基配方，请指出其中的明显不足之处　　　　　　 。

（6）再将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏　　　　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

（7）将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能　　　　　　　 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

(1)为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________。

(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到____℃左右时，才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。

(4)取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min，再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是__________________________________________。

(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方，请指出其中的明显不足之处________。

(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能____________________，即说明所需菌株培育成功。

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（6分）常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用________法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到________的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因。

（3）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

（4）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以________和________为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 ，即说明所需菌株培育成功。

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精，但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程，请分析回答下列问题。

(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用　　　　 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中的液体经适当稀释后，用　　　　 (方法)接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌　　　　　　　 。从存活的酵母菌中提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。

(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含　　 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏　　　　 能力的酿酒酵母作为受体菌。

(4)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示：

据图分析，将转基因酿酒酵母接种在以　　　　 为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的　　 糖被快速消耗，随着发酵继续进行，转基因酿酒酵母能够　　　　　　　　　 ，说明所需菌株培育成功。

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