成熟的番茄果实中，由于PG基因表达使果实变软，而不利于保鲜。科学家们将PG基因反向接到Ti...

成熟的番茄果实中，由于PG基因表达使果实变软，而不利于保鲜。科学家们将PG基因反向接到Ti质粒上（可转录PG基因正常时不转录的链），导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图所示。请据图回答下列问题:

（1）PG基因可从____________中获取，也可通过化学方法直接____________。若已获取PG的mRNA，可通过____________法获取PG基因，PG基因可利用____________技术进行扩增。

（2）重组质粒转移到大肠杆菌前，先用Ca2+处理细胞，使其成为____________细胞。用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有____________的培养基进行筛选。之后，还需将其置于质量分数为25%的蔗糖溶液中，通过观察细胞____________现象来鉴别细胞壁是否再生。

（3）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与____________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。从个体水平上看，若____________，则可确定转基因番茄培育成功。

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多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：

(1)若已获取PG的mRNA，可通过_____方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_____，以便根据这一序列合成引物。

(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和_____。

(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_____的培养基进行筛选。如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞_____现象进行判断。

(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_____互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长。

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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟过程中PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：

（1）基因工程的核心是_____________。若已获取PG的mRNA，可通过__________法获取PG基因。在该基因上游添加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有_______________的识别和结合位点。

（2）构建PG反义质粒的过程中需要用到的工具酶有_____________、________________。

（3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______________的培养基进行筛选，培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞______________现象来鉴别细胞壁是否再生。培养再生植株过程依据的原理是________________。

（4）导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄________，则可确定转基因番茄成功。

（5）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用_____________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。若想培育出一种地上结番茄，地下长马铃薯的植株，可以利用__________技术。

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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟

中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少

PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到

番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：

（1）   提取目的基因：①若已获取PG的mRNA，

可通过获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反向

转录，结构A上应具有的结合

位点。得到的目的基因两侧需人工合成

BamHI黏性末端。

已知BamHI的识别序列如图甲所示，请在图乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。

③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是。

（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，除营养物质外还需在培养基中加入。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生现象，鉴别细胞壁是否再生。

（3）由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄，则可确定转基因番茄成功。

（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用________技术，使子代保持转基因的优良性状。

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番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答：

在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“剪刀”是__________________________；基因“针线”是________________________；基因的“运输工具”是___________________，其中包括病毒和______________。

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番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答：

（1）促进果实成熟的重要激素是＿＿＿＿，因此这一基因工程的目的基因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“手术刀”是＿＿＿＿＿＿＿＿，基因的“缝合针”是＿＿＿＿＿＿＿＿，基因的“运输车”是＿＿＿＿＿＿＿＿。

（3）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

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番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答：（每空2分，共10分）

(1)促进果实成熟的重要激素是。

(2)在培育转基因番茄的基因操作中，所用的“分子手术刀”是________，“分子缝合针”是________,“分子运输车”是________。

（3）基因工程又称为________

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（2015·新课标全国卷Ⅱ）某基因的反义基因可抑制该基因的表达，为研究番茄中的X基因和Y基因对其果实成熟的影响，某研究小组以番茄的非转基因植株（A组，即对照组）、反义X基因的转基因植株（B组）和反义Y基因的转基因植株（C组）为材料进行实验，在番茄植株长出果实后的不同天数（d），分别检测各组果实的乙烯释放量（果实中乙烯含量越高，乙烯的释放量就越大），结果如下表：

回答下列问题：

（1）若在B组果实中没有检测到X基因表达的蛋白质，在C组果实中没有检测到Y基因表达的蛋白质。可推测，A组果实中与乙烯含量有关的基因有_____________________________，B组果实中与乙烯含量有关的基因有____________________________。

（2）三组果实中，成熟最早的是____________组，其原因是________________________________________________________________________。如果在35天时采摘A组与B组果实，在常温下储存时间较长的应是________组。

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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培养转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是

A. 可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因

B. 利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞

C. 利用选择性培养基对构建的基因表达载体直接筛选

D. 在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄植株

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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培养转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是（　　 ）

A.可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因

B.利用选择性培养基对构建的基因表达载体直接筛选

C.利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞

D.在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄植株

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