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目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示。
（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于 。
（2）pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端 。
（3）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复 键，即获得了重组质粒。
（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是 ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是 。
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目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示。
(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于。
(2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。
________
(3)pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复___ ___ 键，成功的获得了重组质粒。
(4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________________ ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是_____________。
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目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示：
（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于___________________。
（2）对目的基因进行扩增的常用方法是PCR，该技术所依据的原理是__________________，PCR扩增某目的基因时需要引物___________种，扩增时，每个循环一般需要经过“变性、退火、延伸”三个过程，其中______过程的温度设定是扩增成败的关键。PCR中用到的酶为 _____________ 酶。
（3）若用噬菌体替代质粒作为运载体构建基因表达载体的过程中，是否需要利用CaCl2处理大肠杆菌，制备感受态细胞_______（需要 不需要） ，原因是_______________ 。
（4）用BamHI处理目的基因和质粒后用DNA连接酶连接获得重组质粒，为了检测该重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布放到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布放到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是 _____________________________图三结果显示，少数大肠杆菌导入的是 ______________ 。
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pBR322是一个由普通质粒经过人工添加许多限制酶识别序列而构建的重要质粒，有万能质粒之称，图甲是pBR322结构示意图（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。图乙表示几种限制酶识别序列及其切割位点。回答下列问题：
（1）质粒是基因工程中常用的工具，其作用是____________________。人工构建pBR322过程中需要的酶是__________________________________________________。
（2）为扩增目的基因可采用PCR技术，该技术利用了_________原理，该技术的前提是需要根据________合成引物。
（3）由图乙可知，经Sau3AⅠ酶切割得到的目的基因可以与被__________酶切割的pBR322连接成重组质粒，原因是____________________。将切割后的目的基因与pBR322质粒混合，加入相应酶反应后，用得到的混合物直接转化处于感受态的大肠杆菌，感受态是指____________________的生理状态。
（4）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，需要进一步鉴定才能筛选出含有目的基因的大肠杆菌的单菌落，原因是____________________。
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pBR322是一个由普通质粒经过人工添加许多限制酶识别序列而构建的重要质粒，有万能质粒之称，图甲是pBR322结构示意图（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。图乙表示几种限制酶识别序列及其切割位点。回答下列问题：
（1）质粒是基因工程中常用的工具，其作用是____________________。人工构建pBR322过程中需要的酶是__________________________________________________。
（2）为扩增目的基因可采用PCR技术，该技术利用了_________原理，该技术的前提是需要根据________合成引物。
（3）由图乙可知，经Sau3AⅠ酶切割得到的目的基因可以与被__________酶切割的pBR322连接成重组质粒，原因是____________________。将切割后的目的基因与pBR322质粒混合，加入相应酶反应后，用得到的混合物直接转化处于感受态的大肠杆菌，感受态是指____________________的生理状态。
（4）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，需要进一步鉴定才能筛选出含有目的基因的大肠杆菌的单菌落，原因是____________________。
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(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：
(1)过程②为 ________，质粒上的抗性基因作用是 ________。
(2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出 ________(不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有________。
(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共 ________种；为提高⑤过程成功率，常用 ________溶液处理大肠杆菌。
(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有 ________基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌 ________。
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Ⅰ．下图a表示基因工程中经常选用的载体——pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检查载体是否导人原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上。得到如图b的结果（黑点表示菌落）。再将灭菌的绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含圆环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并网答下列问题：
（1）pBR322质粒的基本组成单位是_________。该基因工程中，质粒上的Ampr、Tetr称为____________基因。
（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型可以推知，目的基因插入了_______中。
Ⅱ．下图是转基因大豆的培育过程，据图回答下列问题：
（3）重组质粒构建过程中，需要的酶有________________。
（4）据图可知，将目的基因导入大豆细胞的方法是_________。该法将外源基因插入到_________上，转入农杆菌，最终，插入到大豆细胞中染色体的DNA上。科学家通过PCR技术可获得大量该外源目的基因。该技术操作流程的三个重要步骤是_______________。
（5）可采用________技术，检测转基因大豆染色体的DNA上是否插入了图的基因；也可以采用____________的方法，检测目的基因是否翻译成蛋白质。
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下列关于基因表达载体的描述错误的是（ ）
A．用于基因表达载体的质粒都是由天然质粒人工改造过来的
B．基因表达载体的构建包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分
C．目的基因都是指编码蛋白质的结构基因
D．能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控程序是启动子
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下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：
（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶是_________。
（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入________酶用以催化互补链的合成。
（3）过程④所用的酶是___________________________。
（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含__质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是______。
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下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：
（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶是_________。
（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入________酶用以催化互补链的合成。
（3）过程④所用的酶是___________________________。
（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含__质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是______。