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神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。
（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用____________技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。 给小鼠注射重组的人____________蛋白后，将小鼠产生免疫反应的B细胞与__________融合，制备杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养， 吸取培养孔中的__________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用____________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得 NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 Mab）。
（2）提取正常组织细胞和MCF7细胞的总蛋白，设置空白对照，加入NRP-1 Mab进行蛋白质免疫印迹（将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到膜上，然后用特异性抗体检测抗原的技术），实验结果如下：
该实验结果说明了____________________________________。
（3）将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的肿瘤体积，如下图所示。
对照组注射________，从上图中可以看出________________________。
（4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 Mab抑制肿瘤的作用机理是________。
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研究发现:免疫细胞释放的MIF分子能抑制表皮生成因子受体蛋白（EGFR）的活性；EGFR的激活能够促进多种肿瘤的增长；癌细胞能释放降解MIF分子的酶MMP13。下列相关叙述正确的是
A．免疫细胞通过释放MIF分子来实现相应的防卫功能
B．MIF分子通过抑制表皮生长因子的活性，进而抑制肿瘤的增长
C．癌细胞能释放酶MMP13,是其易扩散和转移的主要原因
D．癌细胞被患者服用的抗癌药物杀死属于细胞凋亡
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肿瘤的生长依赖于新生血管，血管内皮生长因子(VEGF)是目前公认最关键的促血管形成因子。为研究促性腺激素释放激素(GnRH)类似物(药物甲)、“顺铂”(一种化疗药物乙)及其联合作用对卵巢癌动物血管生成的影响，研究人员以卵巢癌细胞为研究对象，检测细胞中血管内皮生长因子的mRNA和蛋白质的含量。
材料与用具：3 mg/L顺铂、10－7 mol·L－1 GnRH类似物、胰蛋白酶、12孔细胞培养板(每个孔可进行细胞培养)、卵巢癌细胞、细胞培养液、CO2培养箱。
(要求与说明：不考虑加入顺铂和GnRH类似物对体积的影响；VEGF的mRNA和蛋白质含量的具体检测步骤不作要求；实验条件适宜)
(1)实验思路：(其中药物加入设计画在下面的12孔细胞培养板示意图中即可，无需再文字说明；药物可用甲、乙表示；药物作用3天，每24 h检测一次，无需前测；重复实验不要求)
____________________________________
(2)若GnRH类似物、顺铂都能抑制血管生成，且联合作用效果更佳。请画出药物作用48 h时血管内皮生长因子的mRNA和蛋白质相对含量的柱形图。
__________________________________
(3)实验分析：
①促性腺激素释放激素由________产生。
②如果已得到上述第(2)小题中的实验结果，为了进一步在活体水平上验证这两种药物及其联合作用的影响，下一步你将选用身体状况一致的________动物，随机均分后，分组进行药物处理，观察__________。
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细胞的癌变受多种致癌因子的作用，TGF-β1-Smads是一条抑制肿瘤的信号传递途径。研究表明，胞外蛋白TGF-β1与靶细胞膜上受体结合，激活胞内信号分子Smads，生成复合物转移到细胞核内，诱导靶基因的表达，阻止细胞异常增殖，抑制恶性肿瘤的发生。下列叙述错误的是
A. 恶性肿瘤细胞膜上糖蛋白减少，因此易分散转移
B. 病毒致癌因子的作用原理是它们含有病毒致癌基因以及与致癌有关的核酸序列
C. 从功能来看，复合物诱导的靶基因属于抑癌基因
D. 没有患癌症的人体细胞染色体上没有与癌变有关的基因
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图1为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）和信号分子VEGF-C的表达。VEGFR-3形成反馈环路，抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。
（1）细菌或细菌脂多糖 LPS在免疫学上相当于_______，TLR4的本质是________。
（2）过度或持续性的 TLR4 活化引起过度炎症反应、败血症，在VEGF-C的刺激下，通过活化PI3K-Akt1通路，促进____________，从而抑制 NF-kB 活性，降低败血症的发生。
（3）该细胞能够产生溶菌酶直接杀死病原菌，该过程属于________免疫。
（4）抗原激发的体液免疫应答有两类：第一类是大多数抗原必须有T细胞参与下才能完成；第二类是有少数抗原物质，单独刺激B细胞即可完成．为了探究细菌脂多糖LPS属于哪一类免疫应答，可以选择年龄、性别等相同的小鼠进行LPS接种处理（如表）。据表分析，实验组是________组小鼠，如果___________________则该抗原属于第二类。
| 处理胸腺 | 是否产生相应浆细胞 | 是否产生相应的抗体 |
| 甲组小鼠 | 切除 | | |
| 乙组小鼠 | 不切除 | | |
（5）一般情况下，接受抗原刺激的B细胞会增殖分化为_____，科学家用LPS分先后两次接种小鼠，并检测相应的抗体的产生量，如图2所示：该实验结果说明LPS____________。
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科学家研究发现，肿瘤细胞能释放一种叫“微泡”的泡状结构，其携带一种特殊的“癌症蛋白”。当“微泡”与血管上皮细胞融合时，“癌症蛋白”作为信号分子促进新生血管异常形成，并向着肿瘤方向生长。下列与此相关的叙述不合理的是（ ）
A.肿瘤细胞与正常细胞相比，细胞内的多个基因会发生基因突变
B.肿瘤细胞与正常细胞相比，多种酶活性降低，细胞核的体积增大
C.“微泡”与血管上皮细胞融合的过程体现了生物膜结构的统一性
D.新生血管向着肿瘤方向生长后其上皮细胞的细胞周期会变短
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研究发现，蛋白X是细胞膜上的一种受体，由原癌基因X编码，在一些肿瘤细胞中，原癌基因X过量表达会持续激活细胞内的信号转导，启动细胞DNA的复制，导致细胞异常增殖。利用动物细胞融合技术制备的单克隆抗体，可用于诊断和治疗原癌基因X过量表达的肿瘤，请回答下列问题：
(1)通过检测原癌基因X的_____和_____可判断其是否转录和翻译。检测成人多种正常组织后，发现原癌基因X只在乳腺、呼吸道等上皮细胞中有微弱表达，这说明_______。
(2)根据以上信息，可以推测原癌基因的主要功能是__________。
(3)制备单克隆抗体的原理是__________，制备单克隆抗体用到的动物工程技术手段有______、_____，单克隆抗体是由_______细胞产生的。
(4)制备单克隆抗体时，免疫动物的抗原可以是________。
(5)制备单克隆抗体时，将通过选择培养得到的杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，应用_____技术进行抗体阳性检测。经过多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
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内皮素（ET）是一种多肽，它有强烈血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联内皮素主要通过靶细胞膜上内皮素受体而发挥生物学效应。ETA是内皮素主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA在细胞中髙效表达，为后期体外研究以及拮抗剂筛选、活性评价等奠定基础。其过程如下（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaI识别序列为C↓CCGGG,限制酶XhoI识别序列为C↓TCGAG）。请分析回答：
（1）完成过程①、④所需酶分别是 ，过程②相比，过程①特有碱基配对方式是 。
（2）过程③中，限制酶Xho I切割DNA,使 键断开，形成的黏性末端是 ，与只使用限制酶XhoI相比，用两种限制酶切割获得的优点在于：既能防止 ,还能保证目的基因定向连接到载体上。
（3）过程⑥中，要用 预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA感受态。
（4）基因工程的核心是图中过程 （填标号），重组质粒中氨苄青霉素抗性基因的作用是 ；利用SNAP与因结合构成融合基因，目的是可以检测 。
（5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上受体后，会刺激黑色素细胞分化、增殖并激活酪氨酸酶活性，从而使黑色素急剧增加，美容时可以注射ETA达到美白祛斑效果，原因是ETA与内皮素结合， ，抑制了黑色素细胞的增殖和黑色素的形成。
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内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽，它有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用。研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建基因表达载体，实现ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础。其过程如下(图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为CCC↓GGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG)。请分析回答：
(1)完成过程①需要的酶是________，过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_____________键断开，形成的黏性末端是________________。用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是_____________________________________________________。
(2)过程⑥中，要用_____________预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态。
(3)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是________________________。
(4)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释：______________________________。
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融合蛋白是通过DNA重组技术将两个或多个基因的编码区首尾连接，由同一调控序列控制合成的蛋白质。人的表皮生长因子受体（EGFR）是影响癌症发生发展的重要因素，它在肺癌、脑肿瘤等实体瘤中均有大量表达。天花粉蛋白（TCS）是重要天花粉的有效成分，具有抗肿瘤作用。下图是通过基因工程方法将人表皮生长因子基因（EGF）和TCS基因连接起来，利用大肠杆菌生成人表皮生长因子—天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图。请回答：
（1）为了建立含有EGF的cDNA文库，应从健康人体的________细胞中提取总mRNA，通过________法合成cDNA。从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF短。利用________技术可以大量扩增EGF，该技术所利用的原理是________。
（2）在①过程中，应使用的限制酶是________，在融合蛋白基因的首端还应
插入________ ，它是________识别和结合的位点。
（3）在②过程中，首先用_________________处理大肠杆菌，使其转变为_________________细胞。
（4）应用____________________________技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白。
（5） 单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微，而人表皮生长因子——天花粉蛋白融合蛋白疗效显著，其原因是________。
（6）某同学为了筛选插入目的基因的表达载体，将处理过的载体分别置于含有氨苄青霉素和四环素的培养基上培养，观察其增殖和表达情况。此设计方案是否合理，________请说明理由________。