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获取目的基因是实施基因工程的第一步，获取的方式也多种多样。从基因文库中直接获取和利用PCR技术扩增就是两种常用的方式，回答下列问题：
（1）基因文库中cDNA文库与基因组文库相比，前者较小，原因是_________。
（2）PCR过程所依据的原理是_______________，扩增过程需要加入_______________酶。
（3）构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有________，它的作用是___________。
（4）将目的基因导入到植物细胞中有多种方法，请写出两种_________________________。
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获取目的基因是实施基因工程的第一步，获取的方式也多种多样。从基因文库中直接获取和利用PCR技术扩增就是两种常用的方式，回答下列问题：
（1）基因文库中cDNA文库与基因组文库相比，前者较小，原因是_________。
（2）PCR过程所依据的原理是_______________，扩增过程需要加入_______________酶。
（3）构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有________，它的作用是___________。
（4）将目的基因导入到植物细胞中有多种方法，请写出两种_________________________。
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下列获取目的基因的方法中，需要模板的是
①从基因组文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③构建cDNA文库 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因
A.②③ B.①② C.③④ D.②④
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请利用所学知识回答基因工程胚胎工程、细胞工程和生态工程的有关问题。
（1）目的基因的获取方法有：从基因文库中获的、______________、利用PCR技术扩增。扩增的过程是：DNA在______________℃下变性、引物与单链相应互补序列结合、子链延伸，如此重复循环多次。
基因工程核心步骤的名称是：__________________________________________。
（2）胡萝卜的组织培养的实验中要注意将外植体进行______________（消毒或灭菌）。愈伤组织形成后，要将生长良好的愈伤组织转接到______________（脱分化或分化）培养基上，一段时间后诱导出试管苗再移栽大田，培养成正常植株。
（3）对于小鼠兔和家畜可用______________处理使其排出更多的卵子，这种获得卵母细胞的方法叫______________。
（4）“三北”防护林在最初阶段单一种植了大片的樟子松，导致偶然滋生的松毛虫肆虐一时，原因是没有遵循生态工程的______________理。
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下图表示科学家培育耐寒生物的过程，请回答：
（1）从cDNA文库中获取的目的基因_____________（有/无）启动子。实现①过程常用PCR技术扩增。该技术的原理是__________________________。在PCR反应体系中应含有扩增缓冲液、4种原料、模板DNA、引物及__________________________。
（2）②表示_____________，其中标记基因的作用是__________________________。
（3）若要培育抗冻能力强的转基因羊，可将鱼的抗冻蛋白基因导入羊的_____________中，该过程常用的方法是_____________，培育该转基因羊的最后一道“工序”是胚胎工程的_____________技术。
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获取目的基因的方法有多种，下列不属于目的基因获取方法的是
A．从基因组文库中获取 B．cDNA文库中获取
C．从含目的基因生物细胞中获取 D．利用PCR技术获取
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下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是：
A.同种生物的基因组文库大于cDNA文库
B.③表示PCR技术，用来扩增目的基因
C.从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取
D.只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取
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基因工程的第一步是筛选获取目的基因，利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段。图示某DNA分子经切后，DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程。
（1）PCR与生物体内DNA复制过程不同，解旋时不需要_______________酶催化而是通过_______________实现的，因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是_______________的。
（2）如果在某基因组中定位了一个目的基因X，其碱基序列未知，但已知X临近区域的一段DNA序列，此时可利用图示方法进行目的基因的筛选和扩增。作用于图示多个酶切点的限制酶种类应_______________（相同/不同）。操作时根据图中的_______________设计引物，将含有目的基因的DNA片段克隆出来，为便于目的基因与载体结合，可在_______________添加特定的限制酶识别序列。
（3）实践中也常用RT-PCR技术扩增目的基因，这种技术是以RNA为模板。若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，应选择_______________细胞提取RNA。
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利用PCR技术扩增目的基因是目的基因获取的常用方法之一。现有目的基因“X基因”，它是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示。
（1）获取目的基因是实施基因工程的第一步，基因工程的核心步骤是________，基因工程的原理是________。目的基因的获取除利用PCR技术扩增外，还可以从基因文库中获取。基因文库包含____和____等类型，前者的基因中含有启动子。。
（2）PCR的原理是____。PCR扩增的过程一般是：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的____，该过程在细胞内也可利用____酶实现。复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠________完成。在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是
________。
（3）至少需要循环一～轮，图2所示的五种不同的DNA分子在产物中才都会出现。经4轮循环后，图中④、⑤所示的DNA分子数分别占DNA分子总数的比例为________和________。
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根据以下植物基因工程的操作步骤，回答有关问题。
（1）利用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因（基因序列未知），需根据相应蛋白质的氨基酸序列设计多种引物，原因是____________，基因表达载体中目的基因上游的____________是RNA聚合酶的识别位点。
（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是____________。
（3）下图是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入植物受体细胞的示意图。图中质粒含CRISPR基因和Cas9基因，CRISPR基因转录的sgRNA可以特异性识别细胞核DNA分子中的特定序列，Cas9基因表达的Cas9酶能切割被sgRNA识别的DNA序列。重组片段中的目的基因，能通过DNA损伤修复和被切割的DNA序列连接。
sgRNA通过____________特异性识别细胞核DNA分子中的有关序列，sgRNA、Cas9酶和基因工程中的基本工具____________作用相似。不同基因工程中利用的CRISPR/Cas9质粒有差异，这些质粒中所含的CRISPR基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的，所含的Cas9基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的。
（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入受体细胞与“（2）”中使用的方法相比，优点是____________。
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