为探究大叶木姜子多糖的抑菌效果，研究人员将下列4种菌分别用无菌水稀释成菌悬液，于固体培养基...

为探究大叶木姜子多糖的抑菌效果，研究人员将 4种菌分别用无菌水稀释成菌悬液，在固体培养基上制成含菌平板，在平板上放置经不同浓度大叶木姜子多糖溶液浸泡2~3h的滤纸片，培养一段时间后，测定各供试菌的抑菌圈直径如下表所示， 相关叙述错误的是（　　 ）

A.金黄色葡萄球菌与另外三种菌的主要区别是没有核膜

B.制备含菌平板可用稀释涂布平板法或平板划线法

C.在每个多糖浓度、每种菌均重复多次，将数据取平均值

D.大叶木姜子多糖对黑曲霉的抑制效果最差

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为探究大叶木姜子多糖的抑菌效果，研究人员将下列4种菌分别用无菌水稀释成菌悬液，于固体培养基上制成含菌平皿，在平皿上放置经不同浓度大叶木姜子多糖溶液浸泡2-3小时的滤纸片，培养一段时间后，测定各供试菌的抑菌圈直径，结果如下表。相关叙述，错误的是

大叶木姜子多糖的抑菌效果（mm）

A.金黄色葡萄球菌与另外三种菌的主要区别是没有核膜

B.制备含菌平皿可用稀释涂布平板法或平板划线法

C.每个浓度每种菌重复多次实验，所得数据取平均值

D.大叶木姜子多糖对黑曲霉抑制效果最差

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灵芝多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗衰老、降血糖等多种生物活性。科研人员欲探究灵芝多糖对不同菌种的抑菌效果，请回答以下相关问题

（1）实验中需配制___________培养基培养枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、大肠杆菌，还需配制______培养基培养指状青霉、黑曲霉、黑根霉（填“MS”、“马铃薯琼脂”或“牛肉膏蛋白陈”）。

（2）对供试菌的处理：先将（1）中6种供试菌活化培养然后利用显微镜结合___________（工具）对它们计数，最后用___________稀释，使6种供试菌浓度相同。

（3）采用纸片琼脂法检测抑菌效果：将浸有___________的滤纸片，3片间隔一定距离贴在含菌平板上，并用______________________作为对照组。每种菌重复实验3次，目的是___________。在相同且适宜温度下培养，测量抑菌圈的直径。

（4）实验结果：比较各组抑菌圈直径大小，若抑菌直径越大表明______________________。

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在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素（浓度相同）的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如下图。以下判断错误的是

A.a处抑菌效果小于b处

B.b处的滤纸片没有沥干

C.c处抗生素无效

D.d为对照

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在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素（浓度相同）的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图。以下判断错误的是

A．a处抑菌效果小于b处

B．b处的滤纸片没有沥干

C．c处抗生素无效

D． d为对照

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为了研发高效抑菌洗手液，科研入员检测了A、B、C、D四种抑菌物质对常见细菌的抑制效果。

（1）前期准备：配置 ___（填“牛肉膏蛋白胨”或“麦芽汁琼脂”）固体培养基，同时将若干相同大小的圆形滤纸片放入培养皿，采用____方法灭菌。

（2）实验步骤：从下列选项中选择合适的操作，并排序。____。

a将用抑菌物质或无菌水浸泡过的滤纸片放入平板中央

b用平板划线法接种细菌

c用稀释涂布平板法接种细菌

d将培养皿倒置放入恒温培养箱，37℃培养24小时

e测量抑菌圈的直径

（3）实验结果与

注：阴性对照为无菌水

①本实验设置阴性对照的目的是____。

②根据实验结果判断，____物质的抑菌效果最好，理由是____。为进一步确定该物质在洗手液中的最佳添加浓度，请设计实验进行探究（写出实验思路即可）。____。

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）平板浇注法是常用的菌种分离纯化方法，是将待分离的样品用无菌水作梯度系列稀释后，取合适稀释度的少量菌悬液加至无菌培养皿中，立即倒入融化的固体培养基，经充分混匀后，置室温下培养。下图是研究人员用平板浇注法从土壤样品中分离以工业废甲醇为碳源的酵母菌，并进行大量培养的操作流程，请回答下列问题：

（1）为分离培养该酵母菌，配制培养基时应以___________为唯一碳源，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，及时对培养基进行分装，并进行_____________灭菌。

（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约__________（在25℃、50℃或80℃（3个中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。经培养，可在培养基的 _____________部位出现许多单菌落。

（3）挑取平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线分离。下列叙述不合理的是_______。

A．为保证无菌操作，接种环使用前必须进行灼烧灭菌

B．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落

C．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量

D．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株

（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和____________供应。为监测酵母的细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，用25×16（2mm×2mm×0．lmm）型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，细胞的个数应不少于_____________，才能达到每毫升至少含2×109个细胞的预期密度。

（二）回答与基因工程及其应用有关的问题：

（1）博耶（H．Boyer）和科恩（S．Coben）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_____________________（答出两点即可）。

（2）体外重组的质粒可通过Ca2+参与的方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与_________组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是___________。

（3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，产生出的蛋白质可能会被降解。为防止大肠杆菌内的蛋白质被降解，在实验中应选用___________的大肠杆菌作为受体细胞。在提取纯化蛋白质的过程中应添加________，防止目的蛋白质被降解。

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下列高中生物的实验中必须使用无菌水的是

A．将大肠杆菌培养液进行系列梯度稀释

B．破碎鸡血细胞获得含有DNA的滤液

C．配制培养大肠杆菌的固体培养基

D．冲洗葡萄榨取制作果酒的葡萄汁

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（2013•徐州模拟）下列高中生物的实验中必须使用无菌水的是（　 ）

A.将大肠杆菌培养液进行系列梯度稀释

B.破碎鸡血细胞获得含有DNA的滤液

C.配制培养大肠杆菌的固体培养基

D.制备固定化酵母细胞时活化干酵母

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（2013•顺义区二模）下列高中生物的实验中必须使用无菌水的是（　 ）

A.将大肠杆菌培养液进行系列梯度稀释

B.破碎鸡血细胞获得含有DNA的滤液

C.配制培养大肠杆菌的固体培养基

D.冲洗葡萄榨取制作果酒的葡萄汁

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