回答下列与基因工程相关的问题：
（1）科学家利用基因工程手段培育抗干旱的转基因烟草。获得大量抗干旱基因可用PCR技术来扩增，需要用到的酶有______。在培育转基因抗干旱烟草过程中，常需将重组质粒导入土壤农杆菌，该操作过程中首先必须用__________；然后将____________在缓冲液中混合培养完成转化过程。
（2）该抗干旱的转基因烟草中含有抗除草剂基因，作为标记基因的抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是______。经检测成功后，抗除草剂基因已经没有用途，若继续留在植物体内，则可能会造成的安全性问题是___________。
（3）科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因植物细胞内的抗除草剂基因，有关过程如下：
可通过Cre酶处理，质粒中的两段loxP序列被切开，可得到如上图右侧的两个DNA分子。抗除草剂基因不再表达的原因是________________。删除除草剂基因，所以Cre酶可改变质粒产生的结果就相当于可遗传变异中的______________。
高三生物综合题困难题
回答下列与基因工程相关的问题：
（1）科学家利用基因工程手段培育抗干旱的转基因烟草。获得大量抗干旱基因可用PCR技术来扩增，需要用到的酶有______。在培育转基因抗干旱烟草过程中，常需将重组质粒导入土壤农杆菌，该操作过程中首先必须用__________；然后将____________在缓冲液中混合培养完成转化过程。
（2）该抗干旱的转基因烟草中含有抗除草剂基因，作为标记基因的抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是______。经检测成功后，抗除草剂基因已经没有用途，若继续留在植物体内，则可能会造成的安全性问题是___________。
（3）科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因植物细胞内的抗除草剂基因，有关过程如下：
可通过Cre酶处理，质粒中的两段loxP序列被切开，可得到如上图右侧的两个DNA分子。抗除草剂基因不再表达的原因是________________。删除除草剂基因，所以Cre酶可改变质粒产生的结果就相当于可遗传变异中的______________。
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下图是科学家培育能生产人血清白蛋白乳腺生物反应器的过程，请回答相关问题：
（1）要获取人血清白蛋白基因，可采用PCR技术进行大量扩增，前提是____________。
（2）过程①获得的产物是____________。过程②需对卵细胞供体母牛进行____________处理。过程③常采用____________方法。过程④通常将受精卵培养至____________阶段。并在进行过程⑤之前对胚胎进行筛选，选择____________胚胎进行移植。
（3）若转基因母牛只有一条染色体上含有人血清白蛋白基因，该母牛与普通公牛杂交，产下转基因母牛的概率是____________。
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科学工作者利用基因工程技术获得苏云金芽抱杆菌的抗虫基因，导入棉花中，培育出了抗虫棉。请回答下列问题：
（1）获取抗虫基因的常用方法有_______和人工合成两种。在利用PCR技术扩增抗虫基因时，Taq酶所起的作用是________________。
（2）获得抗虫基因后，要构建基因表达载体，此时需要_______酶把抗虫基因与载体连接起来。基因表达载体除了具有目的基因外，还必须有启动子、终止子以及__________等。
（3）把抗虫基因导入棉花细胞中，常用的方法是__________。要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体水平上需要做_______实验。将已经成功接收基因表达载体的棉花体细胞培育成一个新的植株所依据的生物学原理是_____________________。
（4）我国西北的一些地区年降雨量很小，只适宜种植少数的草本植物，但却被硬性规定种植转基因的抗虫棉，结果造成减产。这个案例主要违背了生态工程的________________原理。
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科学工作者利用基因工程技术获得苏云金芽抱杆菌的抗虫基因，导入棉花中，培育出了抗虫棉。请回答下列问题：
（1）获取抗虫基因的常用方法有_______和人工合成两种。在利用PCR技术扩增抗虫基因时，Taq酶所起的作用是________________。
（2）获得抗虫基因后，要构建基因表达载体，此时需要_______酶把抗虫基因与载体连接起来。基因表达载体除了具有目的基因外，还必须有启动子、终止子以及__________等。
（3）把抗虫基因导入棉花细胞中，常用的方法是__________。要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体水平上需要做_______实验。将已经成功接收基因表达载体的棉花体细胞培育成一个新的植株所依据的生物学原理是_____________________。
（4）我国西北的一些地区年降雨量很小，只适宜种植少数的草本植物，但却被硬性规定种植转基因的抗虫棉，结果造成减产。这个案例主要违背了生态工程的________________原理。
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科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答：
(1)①过程获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，该技术必须用________酶，所需的原料是______________。
(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表：
| 限制酶 | BamHⅠ | HindⅢ | EcoRⅠ | SmaⅠ |
| 识别序列 及切割位点 | G↓GATCC CCTAGG↑ | AA↓GCTT TTCGAA↑ | GA↓ATTC CTTAAG↑ | CCCG↓GG GGGC↑CC |
用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ酶切割，原因是______________________________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用____________________酶对外源DNA、质粒进行切割。
(3)图中⑤、⑥依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的________、________过程。
(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是_____________________________________
___________________________________________________________________________________。
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烟草在受到烟草花叶病毒的侵染后．产量会大大降低，我国科学家利用基因工程技术成功培育出抗烟草花叶病毒的烟草。下图是转基因烟草培育过程示意图。
(1)PCR扩增的前提是要有一段已知_____________的核苷酸序列。以便合成引物I、Ⅱ。
(2)构建基因表达载体时，需将抗烟草花叶病毒基因插入到Ti质粒的_____________上，然后通过农杆菌的转化作用。将其插入到烟草细胞的_____________上，使抗烟草花叶病毒的性状能得以稳定维持和表达。
(3)图中过程②依据的原理是_____________,②过程中细胞增殖的主要方式是_____________。
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我国科学家通过精心设计，利用Bt毒蛋白基因培育出了拥有自主知识产权的转基因抗虫棉。回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增Bt毒蛋白基因的原理是__________。PCR扩增时若退火温度过高，会破坏_________的碱基配对。构建重组质粒时用到的DNA连接酶的作用是将断开的两个DNA片段连接起来，形成_________键。
（2）Bt毒蛋白基因进入棉花细胞内，并在细胞内维持稳定和表达的过程，称为_________在基因表达过程中，识别启动子的是_________酶。
（3）可用于转基因植物的抗虫基因中，_________（填“蛋白酶”或“蛋白酶抑制剂”）基因的产物可使昆虫消化不良，或刺激昆虫分泌过量的消化酶，引起厌食反应。
（4）目的基因导入受体细胞后，需对其遗传特性进行检测和鉴定，可通过_________以确定抗虫特性及抗性程度。传统棉花育种往往受制于有限的种质资源，而科学家引入转基因技术的优势在于_________。
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转基因抗虫棉是将从苏云金芽孢杆菌中分离出来的Bt毒蛋白基因转入植物细胞培育获得，回答下列相关问题。
（1）从苏云金芽孢杄菌获得Bt毒蛋白基因后，可通过PCR技术进行扩增，该过程需要有________作为引物，该技术中所用的酶是________。
（2）将Bt毒蛋白基因导入植物细胞常用________法，该方法中需将Bt基因插入到Ti质粒的________上，其原因是________________________。
（3）检测Bt毒蛋白基因是否导入植物细胞，可以用________________________________作为探针进行检测，导入成功的标志是________________________________。将含有Bt毒蛋白基因的植物细胞培育成抗虫植株需通过________技术。
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中国科学家成功将肝再生增强因子（hALR）的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊,其乳汁含有hALR。回答下列问题：
（1）在体外,可通过PCR技术扩增hALR基因,该技术依据的原理是 。为了保证PCR反应的进行,反应体系需要加入耐高温 酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、 等。
（2）将外源hALR基因导入乳腺上皮细胞常用的方法是 ，检测其染色体上是否整合了hALR基因,可采用 技术；将乳腺上皮细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,对受体卵母细胞的处理是 。
（3）与转基因工程菌（大肠杆菌）相比,利用羊乳腺生产出的hALR有生物活性，其原因可能是 。
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科学家成功制备出“嫁接”了人胰岛素基因的工程菌，它能大量合成人胰岛素，用来治疗糖尿病，使胰岛素的生产成本大大降低。回答相关问题：
（1）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有_________、热稳定性DNA聚合酶、引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸。已知DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸，利用PCR技术以上图的DNA片段为模板扩增目的基因，需使用引物________（从A、B、C、D四种单链片段中选择）。
（2）利用某人的胰岛B细胞为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是_______________________________________。
（3）人的基因中有内含子，转录后内含子对应的RNA序列会被切除，而大肠杆菌没有相应机制。故想让大肠杆菌表达出人胰岛素，应从________（填“cDNA文库”或“基因组文库”）中获得人胰岛素基因。
（4）分别从DNA重组和基因的表达角度分析基因工程能够成功的两个原因_______________________________、_________________________。
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