纤维素酶在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。目前，利用微生物提高纤维素酶产量是主要发展方向。如下图，用紫外线照射含有纤维素分解菌的土样，分离、培养，再检测各菌株的纤维素酶的产生量。请回答下列相关问题：
（1）从自然界获取纤维素分解菌，采集土样时应选择 的环境。
（2）紫外线照射的目的是 ，A0组未经紫外线处理，其作用是作为 。
（3）经高压灭菌锅灭菌的培养基，需要冷却后才能用来倒平板。常用于估计培养基已冷却到50℃左右的简便方法为 。
（4）上述培养皿中的培养基除含有水和无机盐、酵母膏、水解酪素、琼脂等外，还应有 ，目的是选择纤维素分解菌。
（5）上述检测结果如图所示。由图可知，A5组酶活力与Ao组相同，最可能的原因是 。
（6）若用刚果红染色法比较纤维素分解菌产生纤维素酶的量的多少，可通过观察平板培养基上以纤维素分解菌为中心的透明环（如图）来比较。其中与A1对应的是图中的 。
（7）若要保证上右图透明圈中均为单个细胞形成的菌落，操作要求是 。
高三生物综合题困难题
纤维素酶在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。目前，利用微生物提高纤维素酶产量是主要发展方向。如下图，用紫外线照射含有纤维素分解菌的土样，分离、培养，再检测各菌株的纤维素酶的产生量。请回答下列相关问题：
（1）从自然界获取纤维素分解菌，采集土样时应选择 的环境。
（2）紫外线照射的目的是 ，A0组未经紫外线处理，其作用是作为 。
（3）经高压灭菌锅灭菌的培养基，需要冷却后才能用来倒平板。常用于估计培养基已冷却到50℃左右的简便方法为 。
（4）上述培养皿中的培养基除含有水和无机盐、酵母膏、水解酪素、琼脂等外，还应有 ，目的是选择纤维素分解菌。
（5）上述检测结果如图所示。由图可知，A5组酶活力与Ao组相同，最可能的原因是 。
（6）若用刚果红染色法比较纤维素分解菌产生纤维素酶的量的多少，可通过观察平板培养基上以纤维素分解菌为中心的透明环（如图）来比较。其中与A1对应的是图中的 。
（7）若要保证上右图透明圈中均为单个细胞形成的菌落，操作要求是 。
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[生物—选修1：生物技术实践专题]纤维素酶是将纤维素水解成葡萄糖的一种复合酶，在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。图示纤维素酶的相关提取过程，请回答：
（1）从土壤中获取纤维素分解菌时，应选择______________的环境采集土样。
（2）筛选纤维素分解菌，可采用_________法。下列关于该培养基制备的叙述错误的有_________（双选）
A.配制固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂
B.平板冷凝后需倒置的原因是让培养皿盖上的冷凝水充分落入培养基
C.操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
D.培养基中能够为菌体的生长提供碳源的是淀粉和纤维素粉
（3）实验时，加入染色剂的方法有两种，方法一是先培养微生物，再加入染色剂，方法二是在_____时就加入染色剂。两种方法中会出现“假阳性反应”的是_________________。
（4）在对纤维素分解菌进行计数时，为选出菌落数符合要求的平板，常需要在涂布前用______对样品进行稀释。若培养基被杂菌污染，通常会导致统计结果比实际数目____________（填“高”或“低”），为检测培养基是否被污染，可对其进行____________________________。
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目前栽培的主要香蕉品种是三倍体或多倍体,不结种子,因此无性繁殖成了主要种植方式.长期以来,香蕉生产遭受病害的严重威胁,制约了其发展.为提高其产量,某生物小组利用转基因技术培育抗病香蕉.培育过程如图所示:
(1)获得抗病基因后,常利用____________________技术进行扩增,该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成____________.该技术需要的酶是________________酶．
(2)将目的基因导入植物细胞常用的方法有多种,图中所示方法为________________.欲检测转基因香蕉的DNA上是否插入了目的基因,可采用________________________技术.
(3)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,应使基因表达载体A中含有________________________,作为标记基因.
(4)香蕉的抗病性状主要存在野生的二倍体香蕉品种中,但绝大多数香蕉抗病性状的分子背景尚不清楚.小组同学认为还可以利用________________________________技术将三倍体香蕉体细胞与二倍体香蕉体细胞进行融合培育抗病香蕉．
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（18分，每空2分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得 ，接种用的平板培养基 （是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有 的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述2位同学的假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取 ，再逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因。
②构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用 限制酶。
③研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有 。
a. 蛋白质的结构设计 b. 蛋白质的结构和功能分析
c. 蛋白质结构的定向改造 d. 凝乳酶基因的定向改造
e. 将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞 f. 将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力，操作过程如图所示。请分析回答：
（1）图所示紫外线照射的原理是________，接种用的平板培养基________（是、不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10％脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U），凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图所示，酶催化能力最强的是________组。
②A2、A5组酶活力单位与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测。
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，因为基因突变具有________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是________________。为了验证上述2位同学的假设，可采用________________技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取________________，再反转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因，有时需要在引物的起始端设计________（限制酶、DNA连接酶、RNA聚合酶）识别序列，以便构建重组DNA分子。
②构建重组DNA分子（如图所示）最好选用________________限制酶（填酶的名称），理由是________________。
③工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉生产，毛霉作为受体细胞的优势是___________________________________________________________________。
④研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤依次有________。
a．蛋白质的结构设计
b．蛋白质的结构和功能分析
c．蛋白质结构的定向改造
d．凝乳酶基因的定向改造
e．将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞
f．将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产
凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1所示的b过程的目的是为获得______，接种用的平板培养基______（是/不是）选择培养基。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是______组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：
同学甲：A2、A5组芽孢杆菌未发生基因突变，而其他组发生的变化说明基因突变具有___________的特点。
同学乙：A2、A5组芽孢杆菌发生基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是______。
（3）从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。构建重组DNA分子（如图3所示）最好选用______限制酶。
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（16分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌，分离、培养，并检测各菌株所产生的凝乳酶活力。操作过程如图1所示。请分析回答：
（1）图1的a过程目的是获得 ，b的接种方法为 。
（2）在一定温度下（35℃），一定时间内（ 通常为40分钟），凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位（U）。凝乳酶活力检测结果如图2所示。
①据图2所示，酶催化能力最强的是 组。
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，有人对此做出了推测：A2、A5组芽孢杆菌虽发生了基因突变，但凝乳酶蛋白未改变，其依据的理由是 。为了验证上述假设，可采用 技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。
③将凝乳酶催化能力最强的菌株分离纯化后进行扩大化培养，尽管培养基成分合适、操作正确、培养温度和pH适宜，但凝乳酶的产量比预期偏低。对此，研究人员展开了讨论，认为还有其他因素，如 ，请设计一个实验方案对此因素进行探究（实验方案用表格的形式呈现）。
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长春花植物中含有复杂的生物碱，其中长春花碱是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一，提取方法如下：长春花干燥粉碎→纤维素酶处理→加入pH为4.0的酸中→恒温水浴→加碱调pH至8.0→四氯化碳萃取。回答下列问题：
（1）纤维素酶是一类复合酶，包括____________，实验室常用________________________ 法鉴别微生物是否产生纤维素酶。
（2）长春花干燥粉碎后再用纤维素酶处理的原因是________________________。
（3）长春花碱微溶于水，易溶于酸中，由此推测，后续提取加碱的目的是_______________________。
（4）本实验中纤维素酶在不同pH和温度处理后，提取得到的长春花碱含量如图所示，a、b、c曲线最大值对应的温度均为50℃，原因是________________________，长春花碱粗品的鉴定方法是____________。
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长春花植物中含有复杂的生物碱，其中长春花碱是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一，提取方法如下：长春花干燥粉碎→纤维素酶处理→加入pH为4.0的酸中→恒温水浴→加碱调pH至8.0→四氯化碳萃取。回答下列问题：
（1）长春花干燥粉碎后再用纤维素酶处理的原因是增大________，提髙纤维素的_________。
（2）纤维素酶是一类复合酶，实验室常用___________法鉴别微生物是否产生纤维素酶。
（3）长春花碱微溶于水，易溶于酸中，由此推测，后续提取加碱的目的是________________。
（4）四氯化碳的熔沸点为76.8℃，长春花碱的熔沸点为211-216℃，由此推测，四氯化碳萃取后，除去四氯化碳获得纯净的长春花碱的方法是加热至__________℃之间的某温度，蒸发除去四氯化碳。
（5）本实验中纤维素酶在不同pH和温度处理后，提取得到的长春花碱含量如图所示，a、b、c曲线最大值对应的温度均为50℃，原因是在不同pH条件下，该温度下_______________，提取的长春花碱含量最多；从酶的功能特性考虑，为了提取更多的长春花碱，需要提供的条件是______________________________（至少回答出3点）
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长春花植物中含有复杂的生物碱，其中长春花碱是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一，提取方法如下：长春花干燥粉碎→纤维素酶处理→加入pH为4.0的酸中→恒温水浴→加碱调pH至8.0→四氯化碳萃取。回答下列问题：
（1）长春花粉碎后再用纤维素酶处理的原因是______________________。
（2）纤维素酶是一类复合酶，包括C1酶和_________， __________。实验室常用___________法，通过观察菌落是否产生_________鉴别微生物是否产生纤维素酶。
（3）长春花碱微溶于水，易溶于酸中，由此推测，后续提取加碱的目的是______________________。
（4）四氯化碳的溶沸点为76.8℃，长春花碱的溶沸点为211-216℃，由此推测，四氯化碳萃取后，除去四氯化碳获得纯净的长春花碱的具体操作是______________________。
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