补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。
某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列（图2），大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列（图1），由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图3中箭头所指为三种限制酶的切点。
⑴要能筛选出转基因菌种，应选用的限制性内切酶是________，选择的依据是________。
⑵限制酶作用于DNA的部位是________
A.氢键 B.糖苷键 C.磷酸二酯键 D.肽键
⑶控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为________。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为________。
高三生物综合题中等难度题
补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。
某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列（图2），大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列（图1），由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图3中箭头所指为三种限制酶的切点。
⑴要能筛选出转基因菌种，应选用的限制性内切酶是________，选择的依据是________。
⑵限制酶作用于DNA的部位是________
A.氢键 B.糖苷键 C.磷酸二酯键 D.肽键
⑶控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为________。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为________。
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利用转基因技术可以生产出更多廉价的胰岛素，斜土为转基因实验过程示意图，其中数字表示相应过程。
天然大肠杆菌质粒一般含有LacZ基因而不含氨苄青霉素抗性基因；人工合成的大肠杆菌puc118质粒中除含有LacZ基因外，还含有氨苄青霉素抗性基因。
若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷酶能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有puc118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落。此实验方法可以用于鉴别转基因实验是否获得成功。
（1）过程①②一般需要的限制性内切酶主要是从____________分离纯化出来的；过程③④需要______酶。
（2）检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒。培养一段时间后出现三种类型：蓝色菌落、白色菌落、无菌落形成。成功导入重组质粒的菌落的表现是________________。
（3）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需营养成分外，还应加入____________等物质，用于筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（4）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_____________处理细胞，使细胞处于一种____________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将____________与感受态细胞混合，在一定的温度下完成转化。
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利用基因工程等生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子Ⅳ，用于血友病的治疗。请回答下列问题：
（1）目的基因的获取方法不是唯一的，若以mRNA为材料人工合成获得凝血因子Ⅳ基因。其具体方法是___________，构建的基因表达载体应该包括启动子，终止子、____________等。
（2）将含有目的基因的表达载体导人奶山羊受精卵后，需要进行鉴定和检测来确定基因的表达情况。检测奶山羊乳汁中是否含有人凝血因子Ⅳ，可采用__________法。除了分子检测外，有时还需要进行________水平的鉴定。
（3）已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶的作用下构建重组质粒，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端_________ （填“能”或“不能”）连接，理由是_____________。
（4）若最终转基因奶山羊乳汁中成功表达出人凝血因子Ⅳ，其中涉及的生物技术有___________________
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大肠杆菌的质粒上含有LacZ基因，其编码的产物β半乳糖苷酶在x-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程，回答下列问题：
(1)在基因工程中，大肠杆菌质粒通常作为___________,除此以外，基因工程操作还需要___________和___________两种工具。
(2)基因工程的核心操作步骤是______________________。
(3)本题中将目的基因导入受体细胞的方法是___________，目的基因在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为___________。
(4)加入了X-gal和IPTG培养基被称为___________培养基，能够筛选出含目的基因的菌落是___________(填“①”“②”或“③”)，颜色是___________。
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大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程，请据图回答下列相关问题：
（1）图中切割目的基因时用到________种限制酶，而切割质粒时用到的限制酶是______________。
（2）在基因工程的“四步曲”中，_________是基因工程的核心步骤，________的阶段没有碱基互补配对现象。
（3）图中的受体细胞是___________，其作为受体细胞的优点是___________(至少答出两点）。
（4）在培养基中加入X-gal和IPTG的目的是___________；结合题干信息，菌落①②③的颜色分别是__________、__________、____________。
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请分析回答下列关于基因工程的问题：（10分）
某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列（图4），大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列（图3），由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图5中箭头所指为三种限制酶的切点。
（1）要能筛选出转基因菌种，应选用的限制性内切酶是 ，选择的依据是 。
（2）控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为 。如果F8基因表示人生长激素基因，则相应的mRNA可以从人体 （下丘脑细胞/垂体细胞/下丘脑和垂体细胞/所有体细胞）中获取。
（3）重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如下图。
在筛选时应该先用选择培养基 （A/B）。
（4）将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为 。
（5）控制F8的基因能在大肠杆菌细胞内得到表达，其遗传学基础是 。
（6）如果控制F8的基因长度为3000碱基对(bp)，用限制性核酸内切酶酶切后进行凝胶电泳，使降解产物分开。用酶A单独酶切，结果如下图l。用 酶B单独酶切，结果如下图2。用酶A和酶B同时酶切，结果如下图3。请画出该基因同时用酶A和酶B酶切时的作用位点示意图（并标注好酶切后碱基片断的长度）： 。
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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′基因（内含EcoRI的酶切位点），其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal 和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图所示。请据图回答：
（1）限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是-G↓AATTC-，SmaⅠ的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是_____________。
（2）转化过程中，大肠杆菌应先用_____________处理，使其成为 细胞。
（3）菌落①②③中颜色为白色的是__________，原因是________________________________。
（4）菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_____________。
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如图1表示某质粒，该质粒含有抗氨苄青霉素抗性基因（amp＇）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，该酶能将白色底物X-Gal转化为蓝色产物，图2表示含目的基因的DNA片段，实验小组利用该质粒为载体将目的基因导入大肠杆菌，并筛选成功导入重组质粒的受体细胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位点）。请回答下列问题：
（1）构建基因表达载体的目的是_________。在构建基因表达载体时应选用的限制酶是__________。
（2）将重组质粒导入大肠杆菌时，应用__________处理大肠杆菌，制备感受态细胞，实验室选用微生物作为受体细胞的优点是_________。
（3）重组质粒导入大肠杆菌后，应将大肠杆菌置于以X-Gal为底物，并添加_______________的培养基上培养，挑选出__________（填“白色”或“蓝色”）菌落。
（4）检测目的基因是否成功导入受体细胞常用的方法是__________，该方法依据的原理是__________。
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在含有X-gal和IPTG物质的培养基上，大肠杆菌质粒上的lacZ‘基因如表达出产物β-半乳糖苷酶，则能使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞。’请据图回答：
（1）限制酶EcoRI的识别序列和酶切位点是-G↓,AATTC-，SmaI的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-，图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是______________。限制酶EcoRI在质粒上的酶切位点在lacZ‘基因中，故该基因工程中，lacZ‘基因的作用为_____________基因。
（2）获取目的基因后，常利用__________技术在体外将其大量扩增，此过程需要一种特殊的酶叫______。
（3）转化过程中，大肠杆菌应先用_____________处理，使其成为_________________细胞。
（4）颜色为白色的是含有目的基因的菌落，原因是____________。
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[生物—选修3：现代生物科技专题]利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗。请回答下列问题：
（1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用 技术获取并扩增基因。构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是 ，该基因表达载体中，凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分别 。
（2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是 。受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和 。
（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的 进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是 。
（4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在 等细胞器上进行的。人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是___________________。
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