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金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过___________获得___________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的____________位点。设计引物时需要避免引物之间形成____________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表变性，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏____________的碱基配对。
（4）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有____________ （填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。
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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。
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（8分）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。
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金属硫蛋自(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋自，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。请回答下列问题：
(1)在进行基因工程操作时，需要从高表达的MT蛋白的生物组织中提取mRNA，提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是____________________，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是____________________________。
(2)PCR之前，需要设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，两种引物之间不能存在互补配对序列，原因是____________________________________。
(3)在PCR反应体系中，除具备缓冲液、模板DNA分子和引物外，还应有__________(选填编号)。
①Taq酶，②dNTP(dCTP、dATP、dGTP和dTTP)，③四种碱基，④ATP，⑤氨基酸。
(4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_______的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_______的引物需要设定更高的退火温度。
(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_______(填序号：①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物)。
(6)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________(答出两点即可)。
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如图是获得药用乳腺生物反应器转基因小鼠的流程图。回答下列问题：
(1)图中在Ⅰ过程前提取mRNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是___。
通过PCR扩增目的基因的过程中，两个引物是___的结合位点，也是子链延伸的起点。
(2)图中Ⅱ过程在构建基因表达载体时，有时需要使用两种限制酶切割目的基因所在的片段，同时也用这两种限制酶切割质粒，这样做的优点是___。
(3)图中Ⅲ过程获得的小鼠Es细胞在饲养层细胞上培养，Es细胞表现为__的特点。Ⅳ过程中要将含外源基因的Es细胞导入囊胚的，然后进行胚胎移植。若要一次获得多只相同性状的后代，胚胎移植前应采用___技术，通常选择发育良好、形态正常的囊胚或进行操作。
(4)若获得的已整合药用蛋白基因的转基因小鼠分泌的乳汁中检测不到药用蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是__。
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如图是获得药用乳腺生物反应器转基因小鼠的流程图。回答下列问题：
(1)图中在Ⅰ过程前提取mRNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是___。
通过PCR扩增目的基因的过程中，两个引物是___的结合位点，也是子链延伸的起点。
(2)图中Ⅱ过程在构建基因表达载体时，有时需要使用两种限制酶切割目的基因所在的片段，同时也用这两种限制酶切割质粒，这样做的优点是___。
(3)图中Ⅲ过程获得的小鼠Es细胞在饲养层细胞上培养，Es细胞表现为__的特点。Ⅳ过程中要将含外源基因的Es细胞导入囊胚的，然后进行胚胎移植。若要一次获得多只相同性状的后代，胚胎移植前应采用___技术，通常选择发育良好、形态正常的囊胚或进行操作。
(4)若获得的已整合药用蛋白基因的转基因小鼠分泌的乳汁中检测不到药用蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是__。
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PCR技术是基因工程中获得外源基因的一个有效手段，该项技术就是在体外通过酶促反应成百万倍地扩增一段目的基因。用PCR仪扩增抗棉铃虫基因时，PCR反应体系中必须加入的酶是 （ ）
A．限制性内切酶 B．DNA连接酶 C．解旋酶 D．DNA聚合酶
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(2010届莱芜期末)下图表示在生物体外获取DNA(或目的基因)的两种方式。
图一表示经PCR技术扩增获取DNA的过程。PCR是多聚酶链式反应的缩写。PCR方法模仿体内DNA的复制过程，首先使DNA变性(加热至94℃)，两条链解开为单链；然后冷却(至55℃)使引物(DNA复制时所需的约20个核苷酸的短链)与单链相应的碱基互补序列结合；再在热稳定DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)作用下进行延伸(加热至72℃)，即以4种脱氧核苷酸为原料，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。如果2条DNA单链各补上一条新链即成2个DNA分子。如此反复循环，DNA以指数形式扩增。上述过程可以在PCR扩增仪中自动完成。图二表示反转录形成DNA的过程。即以mRNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA。请据图分析回答：
(1)图一中的DNA聚合酶的化学本质是________，它与人体内的DNA聚合酶相比具有________特性。
(2)图一A中的DNA解旋过程在人体内可由________催化完成。C过程复制方式的特点是________。
(3)图二E中的碱基互补配对方式与图一C中的不同之处是______________。假设图一中的一个模板DNA分子中有800个碱基对，其中含有腺嘌呤600个，若通过PCR技术共消耗周围环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则该模板DNA在PCR扩增仪中已经复制了________次。
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下列有关基因工程技术的叙述，正确的是
A. 不同的限制酶切割形成的黏性末端一定不同
B. PCR反应中周期性的温度设置是特定的，与扩增的目的基因和引物无关
C. 在构建基因表达载体时通常需要大量的目的基因和载体
D. 质粒上的目的基因都必须整合到受体细胞的DNA上并表达
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科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图所示：
（1）研究人员在过程①中，利用PCR技术扩增人凝血因子IX基因时，除了酶、引物、模板以外，还需要加入____________作为合成DNA的原料；PCR过程中需要不断调整反应体系的温度，一般情况下，至少需要______个不同的反应温度。
（2）通过步骤②获得的A，除了人凝血因子IX基因外，还含有_______________________（至少三个）等结构。
（3）过程④指_______________，重组胚胎可以与普通代孕母羊的子宫建立正常的生理和组织联系，但是出生后的转基因绵羊依然具有生产人凝血因子IX医用蛋白的能力，原因是___________________________________。
（4）理论上，可以通过少量整合有目的基因的成纤维细胞，克隆出大量转基因绵羊，请对这一问题做出两个合理的解释： ___________________；____________________。
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