下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：（1）在操作一中，为了使细...

(6分)下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：

(1) 在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用消化法将细胞分开，消化法用的消化酶是胰蛋白质酶，或胶原酶。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。

据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5～2小时，原因是____________________________________，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常用消化临界时向溶液中直接加入________即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是__________________。

(2) 动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO₂培养箱中24小时后观察，这样做的目的是__________________________。

(3) 在动物细胞培养过程中通常要对细胞进行计数，计数的细胞数应为活细胞数。某同学在细胞培养的一次测定中，首先振荡摇匀培养液并立即吸细胞悬液少数向一试管中滴入细胞悬液9滴，再滴入台盼蓝(活细胞染液)1滴，混匀。再从试管中取混合液向计数板边缘轻轻滴1～2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片之间间隙，经测定计数室每小格中活细胞数平均为3个，则原每毫升培养液中含有的活细胞数应为________个。

(4) 科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是____________________________________。

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下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：

（1）在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用消化法将细胞分开，消化法用的消化酶是胰蛋白质酶或胶原酶。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。

据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5—2小时原因是　　　　 ，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常在消化临界时向溶液中直接加入　　　　 即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是　　　　 。

（2）动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO2培养箱中，24小时后观察，这样做的目的是　　　　 。动物细胞培养过程中为避免杂菌污染，可在培养液中添加_____________。

（3）科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是　　　　　　 。

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无菌操作是微生物接种技术的关键；传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：

（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理　　　　　　　　　 。

①皮肤　　　 ②饮用水　　 ③牛奶　　 ④注射器　　 ⑤培养皿　　

⑥接种环　　 ⑦培养基　　 ⑧果汁　　 ⑨酱油　　　　 ⑩手术刀

A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩　　 C．①②③④⑤⑥⑧　　 D．以上全部

（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整　　　　　　　 ，接种前要进行　　　　 ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。

（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下图是利用　　　　　　　　　　 法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：

① 每次划线前要　　　　　　　　　　　　 ；

② 冷却后从上一区划线末端开始划；

③ 首尾区　　　　　　 。

（4）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被

污染。对固体培养基应采用的检测方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，观察培养基上是否有菌落产生。

（5）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

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利用基因工程技术将植物进行改造，使植物成为生物反应器并生产转基因疫苗已成为制药产业重点开发的热点领域。回答下列问题：

（1）在生产疫苗过程中，为将目的基因导入植物受体细胞，通常先用______处理农杆菌，使含有目的基因的重组质粒进入农杆菌，后借助______法改造植物基因组。对改造并脱分化形成的愈伤组织细胞进行______培养，形成特定的细胞系，就可以从培养液中提取疫苗蛋白，该过程实现了人类需要的植物细胞______产物的工业化生产。

（2）从培养液中提取疫苗过程复杂，科学家用一定的方法，使抗原基因表达于植物的可食部位，生产可食疫苗。该方法中可调节______的配比，诱导愈伤组织细胞分化出根、芽的______，进而再生出新的植株。

（3）科学家又发现，以植物病毒为载体构建重组病毒形成植物病毒反应器，并生产转基因蛋白，具有更多优点：病毒基因组小，易操作；______，短时间具有高表达量。烟草花叶病毒的RNA可以作为mRNA合成蛋白质，疟疾的抗原蛋白已由烟草花叶病毒反应器获得，在构建表达载体时，和烟草花叶病毒RNA重组的是______。

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实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养〉的基本过程如图所示，根据动物细胞工程的相关知识, 回答下列问题：

（1）动物细胞工程常用的技术手段中，　　　　　　　　　　　　　　 技术是其他动物细胞工程技术的基础，图中过程丙为　　　　　　　　　　　 ，过程丁为　　　　　　　　　　　　 。

（2）培养瓶的悬液中分散的细胞会贴附在瓶壁上，称为　　　　　　　　　　　　　 。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为　　　　　　　　　　　 。图中“细胞培养2”中有少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得　　　　　　　　　　 ，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。

（3）在细胞内DNA合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基酸等为原料合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌啉可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而小鼠骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。利用DNA合成途径不同的特点配制的培养基中添加的　　　　　　　　 成分具有筛选杂交瘤细胞的作用，筛选出来的杂交瘤稀薄啊还要进行 　　　　　 和抗体检测，才能获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

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（15分）下图表示生物工程相关技术操作流程示意图，A、B、C、D表示有关细胞或结构，序号①到⑤表示有关操作过程和处理方法，请据图回答以下问题：

（1）若上图表示植物体细胞杂交的流程，经过①②处理得到的A和B称为　　　　　　　　 ，植物体细胞杂交技术依据的生物学原理是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）若上图表示单克隆抗体的生产流程，则A、B分别表示　　　　　　　　　　　　　　 ，经过③过程得到的两两融合细胞有　　　　 种，因此要经过筛选得到所有的　　　　　　　　　　　　 ，再通过分散克隆和抗原-抗体杂交筛选出　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）若上图表示克隆动物的流程，A表示供体细胞，则经②处理后得到的B为　　　　　　　 。

（4）若上图D表示体外即将用于移植的早期胚胎，则可以通过　　　　　　　　　　　　　 等技术（至少填两个）得到这样的早期胚胎。

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【生物——选修3：现代生物科技专题】

胚胎工程是指对动物的早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。回答下列与胚胎工程相关的问题：

（1）试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植产生后代的技术，这种生殖方式属于__________________。

（2）培育试管动物首先需要收集精子和卵母细胞。收集精子的方法有假阴道法、手握法和电刺激法，从反射弧的角度分析，前两种方法刺激的是___________(填“感受器”或“神经中枢”或“效应器”），后一种方法刺激的是__________(填“感受器”或“神经中枢”或“效应器”），用______处理供体母羊，可使其排出更多的卵子，然后从___________中冲出卵子，可直接与获能的精子在体外受精，原因是_____________。

（3）为了获得同卵双胎试管动物，可对囊胚阶段分割处理，此过程中应当注意__________均等分割。

（4）胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状况有关。大量的研究已经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生_____________反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

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如图是运用生物工程技术培育“转基因试管牛”的图解。请回答下列相关问题：

（l）图中①过程之前通常采用_____法对采集的良种公牛精子进行获能处理。精子和卵子在发生上的重要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在_____完成的。

（2）图中③过程通常选择发育到_____阶段的胚胎进行移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是_____

（3）构建药用蛋白基因表达载体需要将药用蛋白基因与_____的启动子等调控组件重组在一起，通过_____方法导入到性染色体组成为_____的受精卵中。

（4）若得到的药用蛋白不稳定，在体外保存期短。为解决这一问题，可通过对药用蛋白基因进行_____来实现对现有药用蛋白的改造。

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如图是运用生物工程技术培育“转基因试管牛”的图解。请回答下列相关问题：

（l）图中①过程之前通常采用_____法对采集的良种公牛精子进行获能处理。精子和卵子在发生上的重要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在_____完成的。

（2）图中③过程通常选择发育到_____阶段的胚胎进行移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是_____

（3）构建药用蛋白基因表达载体需要将药用蛋白基因与_____的启动子等调控组件重组在一起，通过_____方法导入到性染色体组成为_____的受精卵中。

（4）若得到的药用蛋白不稳定，在体外保存期短。为解决这一问题，可通过对药用蛋白基因进行_____来实现对现有药用蛋白的改造。

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请回答下列在生物技术实践过程中，对某些实验步骤的操作中的相关问题：

(1)在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用　　　　　　 消毒；在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解　　　　　　 。

(2)葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮红素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用______法来分离提取，还可以用　　　　　　　　 和　　　　　　　 等提取植物芳香油的方法。

(3)为了检测某致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A，B，C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______（填“敏感”或“不敏感”）；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____（填“敏感”或“不敏感”）；含C滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是____________________________。

(4)用来判断某选择培养基是否起到了选择分解纤维素的细菌作用，要设置的对照是（　　 ）

A．未接种的选择培养基

B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基

D．接种了的选择培养基

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