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有机磷农药是用于防治植物病虫害的含磷有机化合物,广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强,人误食后如不及时医治就会危及生命,某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：
（1）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在含有碳源、氮源及_________等的选择培养基上添加适量的_____________进行选择培养。
（2）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培 养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物________（填“甲”“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养，理由是 ________________________________。
（3）制备固体培养基的基本步骤是计算→________→溶化→分装→加棉塞→包扎→_______ →倒平板。
（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用_______直接计数，也可选用________法统计活菌数目。
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有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强,人误食后如不及时医治就会危及生命。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：
（1）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在含有碳源、氮源及_________等的选择培养基上添加适量的_____________进行选择培养。
（2）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是__________。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之_____________（填“前”或“后”）调节。
（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是__________________________________________________。
（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用 ____________直接计数，也可选用____________________法统计活菌数目。
（5）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物_____（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养，理由是_________________________。
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有机磷农药使用不当有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，危害人类健康。某生物兴趣小组同学提出：土壤中可能存在高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：
（1）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是_______________。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之_______________（填“前”或“后”）调节。
（2）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在_____________土壤中取样，并在培养基上添加适量的______________进行选择培养。
（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是____________________________________。
（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用___________直接计数，也可选用_________________法统计活菌数目。
（5）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物_______（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养。
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生产中为防治病虫害而大量使用农药，使农产品以及农业生态环境中农药残留严重超标。针对该现状，我国科学家经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术。通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物。其中有机磷降解菌降解甲基对硫磷（一种含氮有机农药）的效果达100%。
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以____________为唯一氮源的固体培养基上。
（2）获得纯净培养物的关键是________________________，接种前通常应将培养皿进行_______ 灭菌，培养基进行__________ 灭菌。
（3）纯化菌种时，整个操作过程都应在___________ 附近进行。
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有机磷农药乐果在农业生产中使用广泛，其长期使用会导致土壤中有不同程度的残留。图甲为科研人员从土壤中分离出降解乐果的菌株的流程，图乙为降解乐果的菌株在固体培养基上产生的透明圈，透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物降解能力的大小，请回答相关问题：
（1）制备该选择培养基时，应以_____为唯一碳源，对培养基灭菌常用的方法是_____。
（2）培养基冷凝后应将平板_____，以防冷凝水落入培养基造成污染。图甲所示平板划线接种的操作过程中，对接种环至少需进行_____次灼烧灭菌。
（3）挑取甲过程分离获得的菌种制成稀释液，采用_____法接种在培养基上，培养3～4 d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良降解菌株（如表）。
菌株
透明圈直径（D）单位：mm
菌落直径（d）单位：mm
D/d
①
22.8
15.3
1.5
②
20.7
7.7
2.7
③
8.2
7.5
1.1
根据实验结果可以确定降解乐果能力最强的菌株是_____（填标号）。
（4）使用乐果显色剂采用比色法检测降解后的乐果残留量，应先制作系列浓度梯度的溶液进行显色反应，下表中3号比色管的乐果浓度应为_____。
管号
1
2
3
4
5
6
乐果浓度/（mg•L﹣1）
0
1
如果土壤溶液中乐果浓度为50 mg•L﹣1，降解后约有21%的残留量，则需要将残留液稀释_____（填标号：①5②10③20）倍后，再进行比色。
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有机磷化合物在农业生产中作为杀虫剂被广泛使用，长期以来因使用其量大、范围广，容易造成水体污染等诸多环境问题。
(1)为了筛选甲胺磷的降解细菌，将农药厂的甲胺磷污染土壤悬液涂布在______________________的固体培养基上进行培养，可以对降解菌进行定向的________。
(2)在分离得到的菌株A中检测到的ophc2蛋白，可以催化甲胺磷的降解，这种蛋白质是在细胞的________上合成的。若要定量分析ophc2蛋白的催化能力，应测定单位时间内______________。
(3)为了测定菌株A的降解效率，应配置0 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L、70 mg/L的甲胺磷溶液，测定不同浓度甲胺磷溶液的吸光值，画出标准曲线，得到吸光值与甲胺磷浓度的关系：y＝0.02x－0.01，如图7－15－6所示。
图7－15－6
将含有100 mg/L甲胺磷的菌株A培养液分别在不同温度下培养5天后，测定吸光值，结果如下表所示，已知降解率＝(初始甲胺磷浓度－降解后甲胺磷浓度)/初始甲胺磷浓度，则取得的最大降解率为________(忽略细菌对吸光值的影响和培养液体积变化)，若甲胺磷自身化学分解，则计算的降解率数值会________(填“偏大”“不变”或“偏小”)。
温度/℃
15
20
25
30
35
40
吸光值(菌株A)
1.71
1.53
1.15
0.49
1.32
1.89
(4)继续分析细菌的16S rDNA可以鉴定种类，提取得到菌株A的DNA后，通过____________扩增得到大量的16S rDNA，进而对细菌分类。
(5)导入ophc2基因的烟草可获得降解有机磷的能力，烟草花粉的遗传物质存在于细胞核和线粒体中，为了避免转基因烟草的花粉对野生型烟草造成基因污染，可将ophc2基因导入烟草细胞的________中。
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如今的生产工艺导致新鲜的蔬果表面常有水溶性的有机农药残留。现取某种新鲜蔬菜若干浸入一定量纯水中，每隔一段时间，取出一小片菜叶，测定其细胞液浓度，结果可绘制成图的曲线（测得整个过程纯水的浓度变化较小）。下列叙述正确的是（ ）
A. AB段细胞吸水，显微镜下可见细胞体积明显增大
B. B点时，细胞液与外界溶液没有水的交换
C. BC段细胞发生了质壁分离复原
D. 此曲线说明浸泡时间延长，有机农药溶于水会被植物细胞吸收
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如今的生产工艺导致新鲜的蔬果表面常有水溶性的有机农药残留。现取某种新鲜蔬菜若干浸入一定量纯水中，每隔一段时间，取出一小片菜叶，测定其细胞液浓度，结果可绘制成图的曲线（测得整个过程纯水的浓度变化较小）。下列叙述正确的是（ ）
A.AB段细胞吸水，显微镜下可见细胞体积明显增大
B.B点时，细胞液与外界溶液没有水的交换
C.BC段细胞发生了质壁分离复原
D.此曲线说明浸泡时间延长，有机农药溶于水会被植物细胞吸收
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有机磷农药广泛应用于农业生产中，常常因过量施用带来环境污染。某同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：
(1)为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在_____________的土壤中取样，若需增加目的菌的浓度，需在相应的培养基中进行_________（填选择或鉴别）培养。
(2)将获得的等量3种待选菌种甲、乙、丙分别接种在1 L含20 mg有机磷的同种培养液中（其它营养物质保持充裕，条件一直适宜）。记录实验开始到有机磷被耗尽所用的时间，甲、乙、丙分别为32 h、45 h、16 h，应选择微生物________________（填甲、乙或丙）作为菌种进行后续培养，理由是_____________________________________。
(3)若要测定培养液中的菌体数，既可在显微镜下用__________________直接计数，也可选用________________________法统计活菌数目。
(4)若要短期保存菌种，以便进行后续各种实验，我们可以采用_____________的方法。
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（15分）有机磷农药杀虫能力强，在粮食增产、传染病防治等方面作用显著，但污染环境并危害人体健康。在众多的有机磷农药残留物降解技术中，生物降解有高效、彻底、无二次污染的优势，其中，微生物由于具有较复杂多样的代谢途径，是有机磷农药降解的主力军。
⑴在富含有机磷农药残留成分的土壤中，更容易分离到能降解农药的微生物。根据达尔文的理论，这是因为有机磷农药对于此类微生物具有 作用。
⑵微生物具有复杂多样的代谢途径，从根本上说，是由微生物的 所决定的。
⑶微生物主要通过酶促反应，将有机磷农药分解为无毒或者低毒的化合物。研究发现，利用有机磷农药降解酶净化农药比利用微生物菌体更有效。
①微生物群体中，最初的降解酶基因是由于 而产生的。从微生物中提取到一种降解酶后，需要确定在何种环境中该酶的活性高，检测酶活性高低的指标可以是 。
②从天然菌株中提取降解酶的含量低，成本高，难以大量应用，科学家通过基因工程解决了这一难题。他们在获得降解酶基因后，通过 技术对该基因进行大量扩增，再利用 酶、 酶和运载体等作为基本工具，通过一定的手段构建目的基因表达载体，并将其导入大肠杆菌体内，从而实现了高效表达。
③天然的降解酶对有机磷农药的降解率比较低，不能达到预期效果，科学家对降解酶特定部位的氨基酸序列进行重新设计、改造，显著提高了其降解能力，这项工程技术称为 。
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