土壤中的产脲酶细菌在污水处理中具有巨大的应用前景，请回答：（1）从土壤分离产脲酶细菌过程中...

土壤中的产脲酶细菌在污水处理中具有巨大的应用前景，请回答：

（1）从土壤分离产脲酶细菌过程中，培养基中高浓度尿素的作用是杀死__________的微生物，并为产脲酶细菌提供__________；除了营养物质外，培养基的配制还应控制__________等条件（答出两点即可）。

（2）采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个__________。与分离真菌相比，分离产脲酚细菌的样品稀释度不同，原因是____________________。

（3）初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，其原理是______________________________。

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尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用．某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下：

K2HPO4　　 NaCl　　 H2O　　 葡萄糖　　 尿素　　 酚红　　 琼脂

0.12g　　 0.12g　　 15mL　　 0.025g　　 2.0g　　 0.25mg　　 0.5g

（1）分解尿素的细菌都能合成 脲酶 ，该种细菌在生态平衡中起到什么作用？ 参与了氮循环（或维持氮平衡） ．写出细菌分解尿素的方程式 ．

（2）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？ 不能 （能/不能），原因是 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物 ．

（3）分离得到分解尿素的细菌后，如果要扩大培养，则应选择 培养基进行培养．培养一段时间后，使用 对微生物细胞进行计数．计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性 A

A．计数时直接从静置培养的试管底部取培养液进行计数

B．如果方格内微生物细胞数量多于300 个，培养液先稀释后再计数

C．如果微生物细胞有粘连，要数出团块中的每一个细胞

D．压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数

（4）为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”．为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用 固定化酶 技术．

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土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：

（1）能分解尿素的细菌代谢类型为 异氧需氧型 ，应从富含有机质的土壤表层取土样．

（2）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用 尿素为唯一氮源 的培养基进行分离，并加入 酚红 指示剂进行鉴别．

（3）若取土样5g，应加入 45 ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液．因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液．取样稀释前，一定要 摇均 以减少误差．将103﹣107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用 涂布器（玻璃刮刀） 将菌液铺平．这种接种方法称为 稀释涂布（平板）法 ．

（4）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有 红色环带 （现象）的菌落数，结果如下表，其中 105或106 倍的稀释比较合适．

稀释倍数　　 103　　 104　　 105　　 106　　 107

菌落数（个）　　 500　　 367　　 248　　 36　　 18

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土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：

(1)能分解尿素的细菌代谢类型为＿＿，应从富含有机质的土壤表层取土样。

(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________的培养基进行分离，并加入＿＿＿指示剂进行鉴别。

(3)若取土样5g，应加入＿＿ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要＿＿＿以减少误差。将10³-10⁷倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用＿＿＿＿将菌液铺平。这种接种方法称为＿＿＿＿。

(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有＿＿＿＿(现象)的菌落数，结果如下表，其中＿＿＿＿倍的稀释比较合适。

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下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________________________的培养基进行分离，并加入________指示剂进行鉴别。

（2）若取土样5g，应加入____________ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液，分别吸取0.1mL的稀释液涂布到固体培养基上，这种接种方法称为________________。某同学用该方法接种后，在某个平板上没有得到菌落，可能的原因是_______________________________________

（3）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计符合要求的菌落数，结果如下表，其中_______________倍的稀释比较合适。

（4）若需要将分离的菌种进行长期保藏，应使用的方法是_______________________。

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为调查某地土质状况，科研小组对该地土壤中分解尿素的细菌进行了分离和纯化培养。请回答下列问题：

(1)分解尿素的细菌能分解尿素，而其它微生物不能，其根本原因是前者具有____________________________。为筛选出分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择以________作为唯一氮源。分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，但可用葡萄糖作为碳源，由此推测分解尿素的细菌是________(填“自养”或“异养”)型生物。

(2)该研究小组将10克土样进行梯度稀释，在某个稀释度下涂布接种了3个平板(接种量均为0.1mL)，经适宜培养后，3个平板均没出现菌落，分析可能的原因是____________________________。

分析原因后，科研小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，推测最可能的原因是______________________________________。

(3)科研小组从同一平板中挑选出A、B、C三种菌落进行梯度稀释并分别涂布接种在分解尿素的细菌的选择培养基上，经适宜培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落。

①由此可得出的结论是________________________________________________。

②推测C种细菌与A、B等在同一个平板上能生长繁殖的可能原因是________________。

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为调查某地土质状况，科研小组对该地土壤中分解尿素的细菌进行了分离和纯化培养。请回答下列问题：

(1)分解尿素的细菌能分解尿素，而其它微生物不能，其根本原因是前者具有____________________________。为筛选出分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择以________作为唯一氮源。分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，但可用葡萄糖作为碳源，由此推测分解尿素的细菌是________(填“自养”或“异养”)型生物。

(2)该研究小组将10克土样进行梯度稀释，在某个稀释度下涂布接种了3个平板(接种量均为0.1mL)，经适宜培养后，3个平板均没出现菌落，分析可能的原因是____________________________。

分析原因后，科研小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，推测最可能的原因是______________________________________。

(3)科研小组从同一平板中挑选出A、B、C三种菌落进行梯度稀释并分别涂布接种在分解尿素的细菌的选择培养基上，经适宜培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落。

①由此可得出的结论是________________________________________________。

②推测C种细菌与A、B等在同一个平板上能生长繁殖的可能原因是________________。

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下表中甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，回答下列问题：

（1）从作用上看，甲培养基属于，其中能提供氮源的物质是。为了进一步鉴定分离得到的菌种确实是能分解尿素的细菌，可在另一个与上述成分相同的培养基中加入指示剂来判断。

（2）为了判断甲培养基是否具有筛选作用，应在牛肉膏蛋白胨培养基上接种等量的相应浓度的土壤稀释液，相同且适宜条件下培养。如果，则证明该培养基具有筛选作用。

（3）如果将B配制成固体培养基，则在培养基上长出的菌落（是/否）都能分解纤维素，理由是。该培养基的主要作用是。

（4）为了计数微生物的数量，接种时应采用法，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为。

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请回答“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”有关问题

（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、　　　　　　 和无机盐。

（2）分离纯化微生物最常使用的接种方法是　　　　　　　　　　 和　　　　　　　　　 两种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是　　　　　　　　　　　 。

（3）可以通过_____________________________来判断细菌是否分解尿素。土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能合成__________。

（4）对分离得到的土壤细菌如果转移放入大试管进一步培养，则土壤细菌的增长呈现____型曲线增长。

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【选修1——生物技术实践】尿素是一种高浓度氮肥，通过土壤中某些细菌分解为氨后,被植物吸收利用。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

（1）根据培养基的成分分析，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？____(填“能”或“不能”），原因是____。在接种前需要检测培养基灭菌是否彻底，常用的检测方法是____。

（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，最好采用____法接种。某同学取稀释倍数为105倍的菌液0.1ml接种后，测得平板上菌落数为156、178和191，则每毫升样品中的菌落数为____。

（3）某同学在分离纯化土壤中分解尿素的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，可能的原因是____，为避免此种现象发生，正确的操作方法是____。

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