（7分）海栖热袍菌生活在55～90℃的海底火山口处水域，其产生的乳酸脱氢酶（LDH）具有极强耐热性。研究人员利用基因工程技术生产该酶以用于工业制备NAD+（一种辅酶），基本技术流程如下图。请回答：
（1）过程①中，应提取______的基因组DNA作模板；同时根据___________基因的核苷酸序列合成引物，过程①中使用的工具酶为____________________
（2）进行过程③前，利用_______________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
（3）以鉴定目的基因是否成功表达，此方法称为___________
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（7分）海栖热袍菌生活在55～90℃的海底火山口处水域，其产生的乳酸脱氢酶（LDH）具有极强耐热性。研究人员利用基因工程技术生产该酶以用于工业制备NAD+（一种辅酶），基本技术流程如下图。请回答：
（1）过程①中，应提取______的基因组DNA作模板；同时根据___________基因的核苷酸序列合成引物，过程①中使用的工具酶为____________________
（2）进行过程③前，利用_______________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
（3）以鉴定目的基因是否成功表达，此方法称为___________
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在一定剂量范围内苜蓿中的黄酮对动物乳腺上皮细胞增殖具有一定促进作用。为研究不同浓度苜蓿黄酮对乳腺上皮细胞的增殖及其对乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响，科研人员用MTT法以细胞悬液OD值为观测指标测定细胞增殖能力，进行了相关实验研究。请完善实验思路，并根据实验结果进行分析。
实验材料与仪器：
用二甲基亚砜（DMSO）配置的浓度为25、50、75和100µ/mL苜蓿黄酮溶液、用动物细胞培养液配制的一定密度的动物乳腺上皮细胞悬液、光电比色计、MTT法细胞增殖测定仪器等
（要求与说明：MTT法测定细胞增殖具体操作不作要求；乳酸脱氢酶（LDH）活性检测不作要求；在一定细胞数范围内，OD值与细胞数成正比；培养过程中培养液变化忽略不计；实验条件适宜）
（1）完善实验思路
①取若干培养瓶，各加入998mL的细胞悬液，分为5组，编号甲~戊，每组5个重复。
②甲组：加入2mL二甲基亚矾；_______。
③________。
④实验第5天，_______。
⑤________。
（2）结果分析与结论
苜蓿黄酮对某动物乳腺上皮细胞增殖及其乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响
| 项目 | 时间/d | 甲组 | 乙组25µg/mL | 丙组50μg/mL | 丁组75μg/mL | 戊组100µg/mL |
| 细胞增殖 | 3 | 0．37 | 0．38 | 0．38． | 0．37 | 0．37 |
| 细胞增殖 | 5 | 0．39 | 0．39 | 0．41* | 0．46* | 0．40* |
| 乳酸脱氢酶活性 | 5 | 1078．80 | 675．60* | 573．21* | 1138．04 | 796．89* |
注：表中*表示与对照组比较有统计学上的显著差异，不带*数据表示与对照组无显著差异；（单位：略）
根据上表可得实验结论：
结论一：作用时间较短时（3天），苜蓿黄酮对细胞增殖无明显作用；
结论二：_______；
结论三：_______。
（3）实验分析
细胞呼吸中，乳酸脱氢酶（LDH）催化的反应_______（填“产生”或“不产生”）ATP，这一催化反应发生在_______（填“需氧”或“厌氧”）呼吸中。本实验中还可用细胞培养上清液中LDH的浓度代表细胞的受损程度的原因是_______。为减少微生物对实验结果带来的干扰，实验中的动物细胞培养基中添加的胎牛血清可采用_______（方法）去除杂菌。
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乳酸脱氢酶（LDH）能催化丙酮酸（C3H403）转化为乳酸，为研究大鼠肝细胞在缺氧状态下LDH活性进行实验，结果如下：
请回答：
（1）大鼠肝细胞无氧呼吸的场所是______，在LDH的催化下，C3H403和 结合生成乳酸。
（2）缺氧状态下，大鼠葡萄糖的消耗量增加，但产生的ATP没有明显增加，原因是无氧呼吸增强，葡萄糖 __，生成的ATP少，大部分 存留在乳酸中。
（3）本实验的自变量是____。实验还应该测定 时的乳酸脱氢酶洁性，做为空白对照。
（4）烧（创）伤后机体缺血、缺氧，细胞内氧分压下降，乳酸脱氢酶活性 （增强／不变／减弱）。
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肝炎、急性肝细胞损伤时LDH﹣5（属于乳酸脱氢酶）都会升高．在体检前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免过量饮酒．因为酒精会损伤肝细胞，肝细胞受损后，细胞膜的通透性变大，导致LDH﹣5外渗，外渗量与肝细胞的受损程度成正比，请设计实验验证饮酒时间越长对肝细胞危害程度越大．
（1）实验材料：健康小鼠肝脏细胞、动物细胞培养液、用培养液配置的高浓度白酒、恒温培养箱、烧杯、LDH﹣5含量检测仪（说明：该检测仪培养液中的LDH﹣5含量，使用方法和检测值不作要求；该实验在无菌室中进行．）
（2）实验思路：
①取两个烧杯，编号甲、乙，每个烧杯中加入等量的健康小鼠肝脏细胞和等量的动物细胞培养液．
②甲烧杯中加入适量的用培养液配制的高浓度白酒，乙烧杯中加入 ．
③ 记录并统计分析．
（3）若要使实验结果更精确，请设计改进的实验方案： ．
（4）请按改进后实验方案设计一张实验数据记录表． ．
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肝炎、急性肝细胞损伤时LDH﹣5（属于乳酸脱氢酶）都会升高．在体检前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免过量饮酒．因为酒精会损伤肝细胞，肝细胞受损后，细胞膜的通透性变大，导致LDH﹣5外渗，外渗量与肝细胞的受损程度成正比，请设计实验验证饮酒时间越长对肝细胞危害程度越大．
（1）实验材料：健康小鼠肝脏细胞、动物细胞培养液、用培养液配置的高浓度白酒、恒温培养箱、烧杯、LDH﹣5含量检测仪（说明：该检测仪培养液中的LDH﹣5含量，使用方法和检测值不作要求；该实验在无菌室中进行．）
（2）实验思路：
①取两个烧杯，编号甲、乙，每个烧杯中加入等量的健康小鼠肝脏细胞和等量的动物细胞培养液．
②甲烧杯中加入适量的用培养液配制的高浓度白酒，乙烧杯中加入 ．
③ 记录并统计分析．
（3）若要使实验结果更精确，请设计改进的实验方案： ．
（4）请按改进后实验方案设计一张实验数据记录表． ．
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细胞在厌氧条件下，丙酮酸经过乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的作用，可以分别生成乙醇和乳酸。科研人员研究了水淹胁迫对某种植物呼吸的影响，部分实验结果如下图所示。回答相关问题。
（1）该植物细胞产生丙酮酸的场所是________。丙酮酸转化为乙醇和CO2或乳酸的过程________________（填“生成”或“不生成”）ATP。
（2）在水淹胁迫造成缺氧条件下，该植物的根系和叶片的细胞呼吸会由有氧呼吸为主向无氧呼吸为主转变，并且以转化为酒精的无氧呼吸为主。图甲、乙所示能够提供的证据是：水淹后，根系和叶片细胞中的________________________________________________。
（3）长期处于缺氧条件下，该植物根系对无机盐的吸收减少，其原因是：长期缺氧条件下， ____。
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嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeI、EcoRI、Hind Ⅲ 、SalI四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓ TATG、G↓ AATTC、A↓AGCTT、G↓TC- GAC，请分析回答：
（1）图中的结构A是_______主要作用是________。—个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外.还应该含有_________。
（2）用图中质粒1和H基因构成重组质粒，应选用_________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有_____________(多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加______________，整个实验过程应保持___________操作。
（4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_____________。
A.引物 I ：••• GCGAATTC •••，引物II ：••• CTCATATG •••
B.引物 I : ••• GAATTCCC •••，引物 II: ••• CATATGAG •••
C.引物1 : ••• GGAAGCTT •••，引物II ：••• AAGCTTCC •••
D.引物I : ••• CTCATATG •••，引物II：••• AACCTTAACCTT•••
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嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：
（1）图中的结构A是_______，其主要作用是_____________________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有_____________________。
（2）用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有___________（多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加___________，整个实验过程应保持_________操作。
（4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_________。
A．引物Ⅰ：…GGGAATTC…；引物Ⅱ：…CTCATATG…
B．引物Ⅰ：…GAATTCCC…；引物Ⅱ：…CATATGAG…
C．引物Ⅰ：…GGAAGCTT…；引物Ⅱ：…AAGCTTCC…
D．引物Ⅰ：…CTCATATG…；引物Ⅱ：…AAGCTTAAGCTT…
高三生物非选择题困难题查看答案及解析
嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：
（1）图中的结构A是_______，其主要作用是_____________________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有_____________________。
（2）用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有___________（多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加___________，整个实验过程应保持_________操作。
（4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_________。
A．引物Ⅰ：…GGGAATTC…；引物Ⅱ：…CTCATATG…
B．引物Ⅰ：…GAATTCCC…；引物Ⅱ：…CATATGAG…
C．引物Ⅰ：…GGAAGCTT…；引物Ⅱ：…AAGCTTCC…
D．引物Ⅰ：…CTCATATG…；引物Ⅱ：…AAGCTTAAGCTT…
高三生物非选择题困难题查看答案及解析
嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：
（1）图中的结构A是_______，其主要作用是_____________________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有_____________________。
（2）用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用________________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有___________（多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加___________，整个实验过程应保持_________操作。
（4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_________。
A．引物Ⅰ：…GGGAATTC…；引物Ⅱ：…CTCATATG…
B．引物Ⅰ：…GAATTCCC…；引物Ⅱ：…CATATGAG…
C．引物Ⅰ：…GGAAGCTT…；引物Ⅱ：…AAGCTTCC…
D．引物Ⅰ：…CTCATATG…；引物Ⅱ：…AAGCTTAAGCTT…
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